【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥領域；更具體地，本專利技術涉及抑制過激炎性反應的重組蛋白及其在預防或治療膿毒癥中的應用。
技術介紹
1、天然免疫細胞過度激活常導致的不受控制的炎癥，引起系統性病理改變，常與感染重癥的高死亡率相關。因此，炎性反應須由一系列負調控因子在多個水平上嚴格控制，以維持免疫穩態。幼稚t細胞(t?cells)已被證實在抑制β冠狀病毒和革蘭氏陰性菌感染的急性炎癥反應中起著關鍵作用。t細胞通過與巨噬細胞直接接觸，抑制其toll樣受體(toll-like?receptors，tlr)激活產生的tnf，il-6等炎性因子表達，這個過程不需要抗原特異性的t細胞受體(t?cell?receptor,tcr)。更為重要的是，有效控制抗原遞呈細胞(antigen?presenting?cells,apc)，如巨噬細胞，樹突狀細胞或b細胞上tlr介導的炎癥病理反應，取決于幼稚t細胞數量而非其質量，即免疫低下的個體感染出現的危重癥和/或高病死率，與幼稚t細胞數量低直接相關。
2、細菌性和病毒性膿毒癥建立的極早期，t細胞因大量死亡常出現急劇減數(tlymphopenia)，也與早期的過激炎性反應、后期的免疫麻痹等導致多器官功能失常/衰竭有關。針對膿毒癥治療，既往30多年實施的旨在增加t細胞數量、打破t細胞免疫耗竭、抑制天然免疫系統過激炎性反應(包括中和各種炎性因子)等200多種臨床研究均告失敗，顯示了急需加大膿毒癥發病機制和治療策略研究的必要性和緊迫性。
3、cd4分子是一種跨膜蛋白，其胞外區(ectodomain)具
4、當cd4+t細胞激活時，cd4分子胞外域可被酶解脫落而形成可溶性cd4(solublecd4,scd4)。早期臨床研究發現scd4在感染疾病、自身性免疫疾病以及癌癥患者血清中檢測到scd4，但其生理、病理機制未見報道。上世界90年代初開始，有大量的研究試圖利用scd4蛋白及其不同衍生物來阻抑hiv感染(chen,feng?et?al.2014)。然而，scd4蛋白對于巨噬細胞過激炎性反應(相關的)疾病是否有調控作用，尚沒有報道。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供抑制巨噬細胞過激炎性反應的重組蛋白scd4及其在制備預防或治療膿毒癥過激炎性反應的藥物組合物中的應用。
2、在本專利技術的第一方面，提供可溶性cd4重組蛋白或表達可溶性cd4的構建體(例如表達載體，更具體例如腺病毒載體、慢病毒載體等)在制備預防或治療炎性反應的藥物組合物中的用途，其中所述的炎性反應為膿毒癥(sepsis)過激炎性反應(hyperinflammation)或巨噬細胞炎性反應。
3、在一種或多種優選實施方式中，所述的巨噬細胞炎性反應包括：膿毒癥發生(onset)極早期，巨噬細胞tlr4介導的炎性因子過激表達性炎癥。
4、在一種或多種優選實施方式中，所述巨噬細胞tlr4介導的炎性因子過激表達性炎癥包括(但不限于)：tnf過度表達性炎癥和/或il-6過度表達性炎癥。
5、在一種或多種優選實施方式中，所述可溶性cd4重組蛋白包括cd4分子胞外區。
6、在一種或多種優選實施方式中，所述cd4分子胞外區含d1、d2、d3和d4結構域。
7、在一種或多種優選實施方式中，所述可溶性cd4重組蛋白由人源或鼠源的經基因密碼子優化的編碼序列編碼獲得。
8、在一種或多種優選實施方式中，所述可溶性cd4重組蛋白包括seq?id?no:1或seqid?no:3所示氨基酸序列的蛋白或其保守性變體(保留有seq?id?no:1或seq?id?no:3所示蛋白質序列和功能的變體)。
9、在一種或多種優選實施方式中，所述保守性變體包括選自：(1)將seq?id?no:1或seq?id?no:3所示氨基酸序列經過一個或多個(如1-20個；較佳地1-10個；較佳地1-5個、1-3個或1-2個)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且保留seq?id?no:1或seq?id?no:3所示氨基酸序列的蛋白功能的衍生蛋白；(2)氨基酸序列與seq?id?no:1或seq?id?no:3所示氨基酸序列有80％以上(較佳地85％以上、90％以上或95％以上；如98％以上或99％以上)相同性，且保留seq?id?no:1或seq?id?no:3所示氨基酸序列的蛋白功能的衍生蛋白；或，(3)在seq?id?no:1或seq?id?no:3所示氨基酸序列的蛋白(如在n或c末端)添加標簽序列，或添加信號肽序列后形成的蛋白。
10、在一種或多種優選實施方式中，所述保守性變體選自(但不限于)：包含利于檢測seq?id?no:1或seq?id?no:3所示蛋白質的小肽標簽的變體，和/或增加seq?id?no:1或seqid?no:3所示蛋白質穩定性的fc融合重組變體。
11、在一種或多種優選實施方式中，所述表達可溶性cd4的構建體包括(但不限于)：表達載體。
12、在一種或多種優選實施方式中，所述表達載體包括：病毒性表達載體、非病毒性表達載體。
13、在一種或多種優選實施方式中，所述病毒性表達載體包括(但不限于)：腺相關病毒，慢病毒載體，腺病毒載體。
14、在一種或多種優選實施方式中，所述可溶性cd4通過結合巨噬細胞mhc?ii，交叉抑制所述炎性反應；較佳地所述炎性反應包括：為膿毒癥(sepsis)過激炎性反應(hyperinflammation)或巨噬細胞炎性反應；更佳地，所述巨噬細胞炎性反應為巨噬細胞tlr4炎性反應。
15、在一種或多種優選實施方式中，所述tlr4炎性反應藉由的信號通路為巨噬細胞mhc?ii-tlr4炎性反應復合體；較佳地，包括：所述可溶性cd4重組蛋白或表達可溶性cd4的構建體上調mhc?ii，募集和激活shp-2，抑制traf6，從而交叉抑制tlr4/nf-κb介導的炎性反應。
16、在一種或多種優選實施方式中，所述可溶性cd4重組蛋白或表達可溶性cd4的構建體被包含于藥學上可接受的載體中，形成藥物組合物。
17、在本專利技術的另一方面，提供人工建立的或存在于細胞內的信號通路或含有該信號通路的體系的用途，用于篩選抑制巨噬細胞炎性反應的物質(包括化合物，組合物，藥物等)；所述信號通路選組下組：巨噬細胞mhc?ii-shp2和/或sting-traf6-tlr4；巨噬細胞mhcii-tlr4；巨噬細胞shp2-traf6-tlr4；巨噬細胞sting-tlr4。
18、在本專利技術的另一方面，提供一種篩選抑制巨噬細胞炎性反應的物質的方法，包括：
19、(1)將候選物質與含有選組下組的本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.可溶性CD4重組蛋白或表達可溶性CD4重組蛋白的構建體在制備預防或治療炎性反應的藥物組合物中的用途，其中所述的炎性反應為膿毒癥過激炎性反應或巨噬細胞炎性反應。
2.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的巨噬細胞炎性反應包括：膿毒癥發生極早期，巨噬細胞TLR4介導的炎性因子過激表達性炎癥；較佳地，所述巨噬細胞TLR4介導的炎性因子過激表達性炎癥包括：TNF過度表達性炎癥和/或IL-6過度表達性炎癥。
3.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述可溶性CD4重組蛋白包括CD4分子胞外區；較佳地，所述CD4分子胞外區含D1、D2、D3和D4結構域；較佳地，所述可溶性CD4重組蛋白由人源或鼠源的經基因密碼子優化的編碼序列編碼獲得。
4.如權利要求1或3所述的用途，其特征在于，所述可溶性CD4重組蛋白包括SEQ?ID?NO:1或SEQ?ID?NO:3所示氨基酸序列的蛋白或其保守性變體；較佳地，所述保守性變體包括選自：
5.如權利要求4所述的用途，其特征在于，所述保守性變體選自：包含利于檢測SEQ?IDNO:1或SEQ?ID?NO:3所
6.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述表達可溶性CD4的構建體包括：表達載體；較佳地，所述表達載體包括：病毒性表達載體、非病毒性表達載體；更佳地，所述病毒性表達載體包括：腺相關病毒，慢病毒載體，腺病毒載體。
7.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述可溶性CD4通過結合巨噬細胞MHCII，交叉抑制所述炎性反應；較佳地所述炎性反應包括：為膿毒癥過激炎性反應或巨噬細胞炎性反應；更佳地，所述巨噬細胞炎性反應為巨噬細胞TLR4炎性反應。
8.如權利要求7所述的用途，其特征在于，所述TLR4炎性反應藉由的信號通路為巨噬細胞MHCII-TLR4炎性反應復合體；較佳地，包括：所述可溶性CD4重組蛋白或表達可溶性CD4的構建體上調MHC?II，募集和激活SHP-2，抑制TRAF6，從而交叉抑制TLR4/NF-κB介導的炎性反應。
9.人工建立的或存在于細胞內的信號通路或含有該信號通路的體系的用途，用于篩選抑制巨噬細胞炎性反應的物質(包括化合物，組合物，藥物等)；所述信號通路選組下組：
10.一種篩選抑制巨噬細胞炎性反應的物質的方法，包括：
...【技術特征摘要】
1.可溶性cd4重組蛋白或表達可溶性cd4重組蛋白的構建體在制備預防或治療炎性反應的藥物組合物中的用途，其中所述的炎性反應為膿毒癥過激炎性反應或巨噬細胞炎性反應。
2.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的巨噬細胞炎性反應包括：膿毒癥發生極早期，巨噬細胞tlr4介導的炎性因子過激表達性炎癥；較佳地，所述巨噬細胞tlr4介導的炎性因子過激表達性炎癥包括：tnf過度表達性炎癥和/或il-6過度表達性炎癥。
3.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述可溶性cd4重組蛋白包括cd4分子胞外區；較佳地，所述cd4分子胞外區含d1、d2、d3和d4結構域；較佳地，所述可溶性cd4重組蛋白由人源或鼠源的經基因密碼子優化的編碼序列編碼獲得。
4.如權利要求1或3所述的用途，其特征在于，所述可溶性cd4重組蛋白包括seq?id?no:1或seq?id?no:3所示氨基酸序列的蛋白或其保守性變體；較佳地，所述保守性變體包括選自：
5.如權利要求4所述的用途，其特征在于，所述保守性變體選自：包含利于檢測seq?idno:1或seq?id?no:3所示蛋白質的小肽標簽的變體，和/或增加seq?id?no:1或seq...
【專利技術屬性】
技術研發人員：唐宏，石麗娜，張勝源，徐秋平，袁峰，李鳳鶯，黃劼，
申請(專利權)人：中國科學院上海巴斯德研究所，
類型：發明
國別省市：
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