【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本申請涉及檢測，尤其涉及檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑及其制備方法和檢測方法。
技術介紹
1、類風濕關節(jié)炎(ra)是一種自身免疫性的慢性疾病，主要表現(xiàn)為關節(jié)腫脹、畸形、功能障礙或缺失。臨床研究發(fā)現(xiàn)，抗角蛋白抗體(aka)、抗核周因子(apf)、抗sa抗體、抗絲集蛋白抗體(afa)在類風濕關節(jié)炎診斷中具有較高的特異性，且其化學結構存在相關性，抗原決定簇中都含有瓜氨酸，因此被統(tǒng)稱為抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(抗ccp抗體)。
2、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(抗ccp抗體)是環(huán)狀聚絲蛋白的多肽片段。通過檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(抗ccp抗體)，可在ra患者表現(xiàn)出臨床典型癥狀前診斷，具有一定的預測價值,在ra的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。
3、目前主要的抗環(huán)瓜氨酸肽抗體測定方法有酶聯(lián)免疫吸附測定法(elisa法)、化學發(fā)光法等。elisa法一般采用人工操作，操作繁瑣低效，人為影響因素大，結果只能定性或不精確定量；化學發(fā)光法操作步驟多，測試成本高。
4、目前的抗環(huán)瓜氨酸肽抗體檢測試劑還存在以下問題：
5、(1)試劑穩(wěn)定性差，易沉淀：由于工藝中活化劑用量、封閉劑、r2稀釋液選用不合理，包被抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的致敏膠乳懸浮穩(wěn)定性差，容易碰撞聚集沉淀；
6、(2)試劑線性范圍窄、靈敏度差，一般為5-100u/ml；
7、(3)試劑特異性差，容易報零。
技術實現(xiàn)思路
1、本申請實施例的目的在于提出一種檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑及其制備方法和檢測方法，有效提高
2、為了解決上述技術問題，本申請實施例提供一種檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑，采用了如下所述的技術方案：
3、一種檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑，所述檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑包括第一試劑和第二試劑；
4、其中，按質(zhì)量分數(shù)計，所述第一試劑包括hepes緩沖液、nacl、peg-6000、增敏劑以及nan3；
5、所述第二試劑包括ccp致敏膠乳顆粒、hepes緩沖液、封閉劑、海藻糖以及nan3。
6、進一步的，所述第一試劑包括40～60mmol/l的hepes緩沖液、15～50g/l的nacl、10～30g/l的peg-6000、10～50g/l的增敏劑以及0.1％的nan3；
7、所述第二試劑包括0.5～2g/l的ccp致敏膠乳顆粒、10～30mm的hepes緩沖液、1％～6％的封閉劑、1～10g/l的海藻糖以及0.1％的nan3。
8、進一步的，所述增敏劑包括100g/l的聚氧乙烯烷基醚和200g/l的壬基酚聚氧乙烯醚。
9、進一步的，所述封閉劑包括30g/l的甘氨酸、20g/l的bsa和100g/l的蔗糖。
10、進一步的，所述ccp致敏膠乳顆粒為粒徑包括100nm的羧基膠乳顆粒和359nm的羧基膠乳顆粒。
11、進一步的，所述粒徑為100nm的羧基膠乳顆粒和所述359nm的羧基膠乳顆粒的體積比為2：1。
12、為了解決上述技術問題，本申請實施例還提供一種檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑的制備方法，采用了如下所述的技術方案：
13、一種檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑的制備方法，包括下述步驟：
14、將放置有磁性轉子的燒杯置于磁力攪拌器上，加入純水、hepes緩沖液、nacl、peg-6000、增敏劑以及nan3，混勻處理，過濾處理，得到檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑的第一試劑；
15、將放置有磁性轉子的燒杯置于磁力攪拌器上，加入膠乳顆粒，對所述膠乳顆粒進行活化處理；
16、加入ccp抗原進行反應，加入封閉劑進行反應，離心，棄上清液，得到ccp致敏膠乳顆粒；
17、重懸所述ccp致敏膠乳顆粒，加入hepes、海藻糖、nan3，得到檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑的第二試劑。
18、進一步的，所述對所述膠乳顆粒進行活化處理的步驟包括：
19、加入hepes緩沖溶液、5～20g/l的nhs溶液和5～20g/l的edc溶液，活化25～35min。
20、進一步的，通過超聲波細胞粉碎機重懸所述ccp致敏膠乳顆粒。
21、為了解決上述技術問題，本申請實施例還提供一種檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的方法，采用了如下所述的技術方案：
22、一種檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的方法，使用上述的試劑，包括以下步驟：
23、將待測樣本與第一試劑和第二試劑均勻混合，得到混合溶液；
24、將所述混合溶液置于檢測儀器中，得到吸光度；
25、根據(jù)所述吸光度計算得到抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的濃度。
26、與現(xiàn)有技術相比，本申請實施例主要有以下有益效果：
27、本申請第一試劑采用聚氧乙烯烷基醚和壬基酚聚氧乙烯醚作為增敏劑，提升了試劑的特異性，解決了臨床陰性樣本容易報零問題。本申請第二試劑以大小球混用作為基礎，100nm和359nm微球混合，并優(yōu)化了工藝過程，提高試劑的線性和靈敏度。本申請使用甘氨酸、bsa和蔗糖作為封閉劑，更好地封閉了位點，促使致敏膠乳分散穩(wěn)定，顯著提升了試劑盒的穩(wěn)定性。
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1.一種檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑，其特征在于，所述檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑包括第一試劑和第二試劑；
2.根據(jù)權利要求1所述的檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑，其特征在于，所述第一試劑包括40～60mmol/L的Hepes緩沖液、15～50g/L的NaCl、10～30g/L的PEG-6000、10～50g/L的增敏劑以及0.1％的NaN3；
3.根據(jù)權利要求1所述的檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑，其特征在于，所述增敏劑包括100g/L的聚氧乙烯烷基醚和200g/L的壬基酚聚氧乙烯醚。
4.根據(jù)權利要求1所述的檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑，其特征在于，所述封閉劑包括30g/L的甘氨酸、20g/L的BSA和100g/L的蔗糖。
5.根據(jù)權利要求1所述的檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑，其特征在于，所述CCP致敏膠乳顆粒為粒徑包括100nm的羧基膠乳顆粒和359nm的羧基膠乳顆粒。
6.根據(jù)權利要求5所述的檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑，其特征在于，所述粒徑為100nm的羧基膠乳顆粒和所述359nm的羧基膠乳顆粒的體積比為2：1。
7
8.根據(jù)權利要求7所述的檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑的制備方法，其特征在于，所述對所述膠乳顆粒進行活化處理的步驟包括：
9.根據(jù)權利要求7所述的檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑的制備方法，其特征在于，通過超聲波細胞粉碎機重懸所述CCP致敏膠乳顆粒。
10.一種檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的方法，使用如權利要求1至6任意一項所述的試劑，其特征在于，包括以下步驟：
...【技術特征摘要】
1.一種檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑，其特征在于，所述檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑包括第一試劑和第二試劑；
2.根據(jù)權利要求1所述的檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑，其特征在于，所述第一試劑包括40～60mmol/l的hepes緩沖液、15～50g/l的nacl、10～30g/l的peg-6000、10～50g/l的增敏劑以及0.1％的nan3；
3.根據(jù)權利要求1所述的檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑，其特征在于，所述增敏劑包括100g/l的聚氧乙烯烷基醚和200g/l的壬基酚聚氧乙烯醚。
4.根據(jù)權利要求1所述的檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑，其特征在于，所述封閉劑包括30g/l的甘氨酸、20g/l的bsa和100g/l的蔗糖。
5.根據(jù)權利要求1所述的檢測抗環(huán)瓜氨酸肽抗體的試劑，其...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：齊文闖，劉瓊，蔣析文，段少卿，陳思妮，
申請(專利權)人：廣州達安基因股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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