【技術實現步驟摘要】
技術介紹
0、背景
1、急性髓系白血病(acute?myeloid?leukemia,aml)是一種由于髓系祖細胞發生突變，而導致細胞過度增殖且分化阻滯，致使髓系母細胞在造血組織中累積，從而引起的血液惡性腫瘤。常規治療方法包括化學療法和造血干細胞移植。盡管aml患者對高標準化療初始反應較好，但復發現象普遍存在，并且大多數aml患者的預后較差。傳統的化療藥物無法從根本上解決復發和藥物耐藥的高發生率。而造血干細胞移植后的復發率仍有40％，復發后2年存活率不到20％。因此，迫切需要開發新的和改進的治療方法。
2、免疫細胞治療，比如嵌合抗原受體t細胞療法利用基因改造的t細胞，更具針對性且有效地靶向并殺死癌細胞。從血液中收集t細胞后，將其改造，使細胞表面表達識別腫瘤的嵌合抗原受體。可以利用crispr/cas9基因編輯技術將car(chimeric?antigenreceptor,car)引入t細胞。當這些異體car-t細胞注射到患者體內時，識別腫瘤的car-t細胞可高效殺滅癌細胞。
3、cd33(也稱為siglec3、唾液酸結合免疫球蛋白樣凝集素3、gp67或p67)是siglec凝集素家族成員，其表達于正常的單核細胞、粒細胞、造血祖細胞以及干細胞群體中免疫表型定義的造血干細胞。在大多數aml患者的癌變細胞中，無論是初發還是復發，cd33皆表達，因此是一個經典的腫瘤表面分子。cd33通過與糖蛋白的唾液酸殘基和糖脂的結合來發揮作用。靶向cd33的car-t細胞在臨床上已經被證明可以殺腫瘤，然而由于cd
4、cd123是白介素-3受體的α鏈，cd123特異性識別并結合il-3。il-3主要由抗原刺激的輔助t細胞產生，它可以促進細胞生長和增殖。cd123與腫瘤的發生、過敏性炎癥和自身免疫疾病有關。cd123在大多數aml患者的癌變細胞中表達。cd123也在正常造血干細胞中表達，并與造血干細胞的分化功能相關。靶向cd123-car-t細胞在臨床上已經被證明可以殺腫瘤，然而由于cd123-car-t除了識別腫瘤細胞，也會識別表達cd123的健康髓系細胞群體，因此產生脫靶毒性，患者不耐受。
5、cd117，也稱肥大/干細胞生長因子受體(stem?cell?growth?factor,scfr)、原癌基因c-kit、酪氨酸蛋白激酶kit，是一種145-kd的跨膜糖蛋白。對于具有失活突變的c-kit或其配體——干細胞因子(stem?cell?factor,scf)——的小鼠研究表明，c-kit的正常功能活性對于維持正常造血、黑色素生成、生殖細胞生成以及細胞生長和分化至關重要。cd117在造血祖細胞、肥大細胞、生殖細胞、卡氏間質細胞上表達，并且在大多數aml患者的癌變細胞中高表達。因此，抗cd117car-t細胞代表著治療cd117表達的惡性腫瘤的有效治療方法。然而，由于正常造血干細胞也表達cd117,直接使用cd117-car-t免疫治療會產生脫靶毒性。
6、c型凝集素樣受體1也被稱為micl、clec12a、clec-1、樹突狀細胞相關凝集素和dcal-2。cll-1是一種糖蛋白受體，屬于參與免疫調節的c型凝集素樣受體家族成員。該家族的成員具有多種功能，如細胞黏附、胞間信號傳導、糖蛋白代謝以及在炎癥和免疫應答中的作用。cll-1在造血細胞上表達，并主要在先天免疫細胞上表達，包括單核細胞、dcs、漿細胞樣dcs以及粒細胞和髓系祖細胞。cll-1也在大多數急性髓系白血病和骨髓增生異常綜合癥患者的癌細胞中表達。cll-1是與白血病干細胞相關表面抗原。抗cll-1car-t細胞代表著治療cll-1表達的惡性腫瘤的有效選擇。然而，由于正常細胞也表達cll-1,直接使用cll-1-car-t免疫治療會產生脫靶毒性。
7、摘要
8、本公開描述了一種治療癌癥(如急性髓系白血病)的成分和方法。該方法指出，向患者輸入靶向分子cd33、cd123、cd117或cll-1的抗體或表達嵌合抗原受體的免疫細胞的之前或同時，向患者移植具有相同分子表達，但破壞抗體或car所識別表位的突變工程干細胞。通過引入突變，工程干細胞表現與患者體內造血細胞不同，即不會受到治療的影響，因此為患者提供功能性造血細胞和抗體。
9、本公開中的一種實施案例，提供了一種治療癌癥的方法，包括向患者輸入含有cd33抗原表位突變的干細胞。由于突變位于cd33蛋白的抗原識別表位，相較于野生型cd33蛋白，突變的cd33蛋白與cd33-抗體的結合親和力降低。其中，所述治療包括抗體、抗體的抗原結合片段以及包含抗原結合片段的嵌合抗原受體或包含car的免疫細胞。
10、本公開中的另一種實施案例，提供了一種治療癌癥的方法，包括向患者輸入含有cd123抗原表位突變的干細胞。由于突變位于cd123蛋白的抗原識別表位，相較于野生型cd123蛋白，突變的cd123蛋白與cd123-抗體的結合親和力降低。其中，所述治療包括抗體、抗體的抗原結合片段以及包含抗原結合片段的嵌合抗原受體或包含car的免疫細胞。
11、本公開中的另一種實施案例，提供了一種治療癌癥的方法，包括向患者輸入含有cd117抗原表位突變的干細胞。由于突變位于cd117蛋白的抗原識別表位，相較于野生型cd117蛋白，突變的cd117蛋白與cd117-抗體的結合親和力降低。其中，所述治療包括抗體、抗體的抗原結合片段以及包含抗原結合片段的嵌合抗原受體或包含car的免疫細胞。
12、本公開中的另一種實施案例，提供了一種治療癌癥的方法，包括向患者輸入含有cll-1抗原表位突變的干細胞。由于突變位于cll-1蛋白的抗原識別表位，相較于野生型cll-1蛋白，突變的cll-1蛋白與cll-1-抗體的結合親和力降低。其中，所述治療包括抗體、抗體的抗原結合片段以及包含抗原結合片段的嵌合抗原受體或包含car的免疫細胞。
13、在一些實施案例中，癌癥指白血病。在一些實施案例中，癌癥指急性髓系白血病。
14、在一些實施案例中，干細胞指造血干細胞和祖細胞。
15、在一些實施案例中，突變cd33蛋白包括來自seq?id?no:1的c41、w60、i105、d112、y116、f118、p132、w22、g34、r89、n100、n113和s131中一種或多種殘基的突變，優先選擇非保守突變。在一些實施案例中，抗cd33抗體為my9.6或其抗原結合片段。
16、在一些實施案例中，突變cd33蛋白包括來自seq?id?no:1的c41、w60、i105、y116和f118中一種或多種殘基的突變，優先選擇非保守突變。在一些實施案例中，抗cd33抗體為hm195或其抗原結合片段。
17、在一些實施案例中，突變由包含一條向導rna(guide?rna,grna)的堿基編輯器引入干細胞，其中grna包含一段來自seq?id?no:19本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種含有突變的突變CD33蛋白，其突變為在SEQ?ID?NO:1上含有選自P132、C41、W60、I105、D112、Y116、F118、W22、G34、R89、N100、N113和S131中一種或多種殘基的突變，或組合突變。
2.權利要求1所述的突變CD33蛋白中，其突變為非保守突變。
3.權利要求1所述的突變CD33蛋白中，其突變為P132上的突變。
4.權利要求1所述的突變CD33蛋白中，其突變為P132A。
5.一種含有根據權利要求1所述的突變CD33蛋白的細胞在制造用于治療白血病患者的藥物中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，該癌癥患者為接受抗CD33抗體治療的患者，其中該抗CD33抗體選自抗體藥物，含有該抗體的抗體藥物偶聯物，或者表達含有該抗體的嵌合抗原受體的免疫細胞。
7.根據權利要求5所述的應用，該抗CD33抗體為單克隆HM195或其抗原結合片段。
8.根據權利要求5所述的應用，該突變由包含一條gRNA(guide?RNA)的堿基編輯器引入干細胞，其中gRNA包含一段來自
9.根據權利要求5或者8所述的應用，該突變由包含一條peg?RNA(prime?editingguide?RNA)的先導編輯器引入干細胞，其中pegRNA包含一段來自SEQ?ID?NO:145-228的間隔序列。
10.根據權利要求5所述的應用，該癌癥為急性髓系白血病。
11.根據權利要求5所述的應用，該細胞為干細胞。
12.根據權利要求11所述的應用，干細胞指造血干細胞和祖細胞(hematopoietic?stemand?progenitor?cell,HSPC)。
13.根據權利要求5所述的應用，該抗CD33治療包括含嵌合抗原受體的免疫細胞。
14.根據權利要求13所述的應用，該免疫細胞為T細胞、NK細胞和巨噬細胞。
15.一種編碼根據權利要求1所述的突變CD33蛋白的核酸序列。
16.一種包含根據權利要求1所述的突變CD33蛋白或者根據權利要求15所述的核酸序列的細胞。
17.一種含有突變的突變CD117蛋白，其突變為在SEQ?ID?NO:3上含有選自T67、K69、T71、S81、Y83、T114、T119和K129中一種或多種殘基的突變，或組合突變。
18.一種含有突變的突變CLL-1蛋白，其突變為在SEQ?ID?NO:4上選自氨基酸殘基142-158中一種或多種殘基的突變，或組合突變。
...【技術特征摘要】
1.一種含有突變的突變cd33蛋白，其突變為在seq?id?no:1上含有選自p132、c41、w60、i105、d112、y116、f118、w22、g34、r89、n100、n113和s131中一種或多種殘基的突變，或組合突變。
2.權利要求1所述的突變cd33蛋白中，其突變為非保守突變。
3.權利要求1所述的突變cd33蛋白中，其突變為p132上的突變。
4.權利要求1所述的突變cd33蛋白中，其突變為p132a。
5.一種含有根據權利要求1所述的突變cd33蛋白的細胞在制造用于治療白血病患者的藥物中的應用。
6.根據權利要求5所述的應用，該癌癥患者為接受抗cd33抗體治療的患者，其中該抗cd33抗體選自抗體藥物，含有該抗體的抗體藥物偶聯物，或者表達含有該抗體的嵌合抗原受體的免疫細胞。
7.根據權利要求5所述的應用，該抗cd33抗體為單克隆hm195或其抗原結合片段。
8.根據權利要求5所述的應用，該突變由包含一條grna(guide?rna)的堿基編輯器引入干細胞，其中grna包含一段來自seq?id?no:19-144的間隔序列。
9.根據權利要求5或者8所述的應用，該突變由包含一條peg?rna(prime?edi...
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