【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于中藥檢測領域，具體涉及一種細梗香草提取物特征圖譜的構建方法和應用。
技術介紹
1、細梗香草為報春花科珍珠菜屬植物細梗香草(lysimachia?capillipes?hemsl.)干燥全草，可用于治療感冒咳喘、風濕痛、月經不調或神經衰弱等癥狀，或者用于補虛、驅蛔和抗腫瘤。細梗香草中含有的黃酮類、皂苷類和揮發油等化合物，對人體健康具有積極影響。特別是以細梗香草皂苷b和c為主的皂苷類化合物，是其發揮抗腫瘤、抗炎和鎮痛作用的主要物質基礎。
2、文獻公開了hplc-elsd測定細梗香草皂苷b與皂苷c的含量的方法(應弘梅.中國藥學雜志.2011,46(09):704-706)，表明細梗香草皂苷b與細梗香草皂苷c在細梗香草藥材中的含量為1～6％。授權公告號為cn101507740b的中國專利技術專利公開了一種利用大孔樹脂制備細梗香草總皂苷提取物的方法。授權公告號為cn110297047b的中國專利技術專利公開了細梗香草藥材的hplc指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜，該方法采用色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，流動相為乙腈-0.3％磷酸溶液系統，采用梯度洗脫方式。指紋圖譜雖然可以提供一個全面的成分分析，但無法側重于特定成分的詳細識別。
3、關于含有細梗香草皂苷類成分的細梗香草藥材、提取物及其制劑的特征圖譜，目前尚未有相關報道。為了彌補現有技術的缺陷，我們需要建立這些藥材的特征圖譜，以便于進行質量控制，進而提升產品的質量穩定性和均一性。
技術實現思路
1、本專
2、本專利技術所采用的具體技術方案如下：
3、第一方面，本專利技術提供了一種細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，包括如下步驟：
4、s1：將若干細梗香草提取物樣品分別溶于提取液中提取；提取后過濾，取濾液作為供試品溶液；將細梗香草皂苷b和細梗香草皂苷c標準品溶于甲醇中，混合均勻得到參照物溶液；
5、s2：采用高效液相色譜法對參照物溶液進行檢測，得到參照物液相圖譜；其中高效液相色譜法的色譜條件如下：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，采用蒸發光散射檢測器檢測，以甲醇為流動相a、0.1～1％乙酸或甲酸溶液為流動相b進行梯度洗脫，流速為1ml/min，理論板數按細梗香草皂苷b峰計算應不低于5000；所述參照物液相圖譜中包括2個峰，按出峰時間先后順序分別為細梗香草皂苷c的特征峰和細梗香草皂苷b的特征峰；
6、s3：采用步驟s2所述的高效液相色譜法對若干供試品溶液進行檢測，分別得到供試品液相圖譜；根據得到的若干供試品液相圖譜尋找共用峰，生成對照特征圖譜；對照特征圖譜中，按照出峰時間先后分別為峰1、峰2、峰3和峰4，其中峰3和峰4分別與參照物液相圖譜中細梗香草皂苷c和細梗香草皂苷b的特征峰保留時間一致。
7、作為優選，步驟s1中所述細梗香草提取物是將細梗香草藥材通過乙醇溶液提取后，經過大孔吸附樹脂純化制得的；所述大孔吸附樹脂為d101型大孔樹脂、d201型大孔樹脂、ab-8型大孔樹脂或hpd450型大孔樹脂。
8、作為優選，步驟s1中所述提取液采用體積濃度為30～100％甲醇水溶液或體積濃度為30～100％乙醇水溶液。
9、作為優選，步驟s1中所述提取方法為超聲提取、振搖提取或回流提取，提取時間為5～120min。
10、進一步的，步驟s1中所述提取方法采用超聲處理30min。
11、作為優選，所述參照物溶液中細梗香草皂苷b和細梗香草皂苷c的濃度均為0.5mg/ml。
12、作為優選，步驟s2中流動相b為0.2～0.6％乙酸溶液。
13、作為優選，步驟s2中梯度洗脫程序如下：0～15min，流動相a占比為35％→50％，流動相b占比為65→50％；15～23min，流動相a占比為50％→60％，流動相b占比為50％→40％；23～40min，流動相a占比為60％→65％，流動相b占比為40→35％；40～45min，流動相a占比為65％→72％，流動相b占比為35→28％；45～70min，流動相a占比為72％，流動相b占比為28％。
14、作為優選，所述對照特征圖譜中，將峰3作為基準，記為峰s，計算其余3個峰與峰s的相對保留時間；所述相對保留時間在規定值的±10％范圍之內，規定值為：峰1：0.68、峰2：0.71、峰s：1.00、峰4：1.16。
15、第二方面，本專利技術提供一種利用第一方面所述細梗香草提取物特征圖譜的構建方法在細梗香草提取物制劑、膠囊或片劑產品質量檢測中的應用，其特征在于，具體如下：
16、s1：將待測樣品溶于乙醇溶液中提取，過濾，得待測樣品溶液；將細梗香草皂苷b和細梗香草皂苷c標準品溶于甲醇中，混合均勻得到參照物溶液；
17、s2：采用高效液相色譜法對參照物溶液進行檢測，得到參照物液相圖譜；其中高效液相色譜法的色譜條件如下：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，采用蒸發光散射檢測器檢測，以甲醇為流動相a、0.1～1％乙酸或甲酸溶液為流動相b進行梯度洗脫：0～15min，流動相a占比為35％→50％，流動相b占比為65→50％；15～23min，流動相a占比為50％→60％，流動相b占比為50％→40％；23～40min，流動相a占比為60％→65％，流動相b占比為40→35％；40～45min，流動相a占比為65％→72％，流動相b占比為35→28％；45～70min，流動相a占比為72％，流動相b占比為28％；流速為1ml/min；理論板數按細梗香草皂苷b峰計算應不低于5000；
18、所述參照物液相圖譜中包括2個峰，峰3為細梗香草皂苷c的特征峰，峰4為細梗香草皂苷b的特征峰；
19、s3：采用步驟s2所述的高效液相色譜法對待測溶液進行檢測，得到待測溶液的液相圖譜；
20、s4：待測溶液的液相圖譜應呈現4個特征峰，按照出峰時間先后分別為峰1、峰2、峰3和峰4，其中峰3和峰4分別與參照物液相圖譜中細梗香草皂苷c和細梗香草皂苷b的特征峰保留時間一致；以參照物液相圖譜中峰3為基礎，記為峰s，計算其余3個峰與峰3的相對保留時間，規定值為：峰1：0.68、峰2：0.71、峰s：1.00、峰4：1.16；若其余3個峰的相對保留時間在規定值的±10％范圍之內，則判定該待測樣品為質量合格的細梗香草提取物。
21、本專利技術相對于現有技術而言，具有以下有益效果：
22、本專利技術通過特定的色譜條件建立了細梗香草提取物的特征圖譜，標定了4個特征峰，尤其是能指認出細梗香草特有的細梗香草皂苷c和細梗香草皂苷b色譜峰。采用本專利技術提供的方法在細梗香草提取物制劑、膠囊或片劑產品中進行質量檢測，保障了細梗香草提取物及其產品的質量均一性。
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1.一種細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，步驟S1中所述細梗香草提取物是將細梗香草藥材通過乙醇溶液提取后，經過大孔吸附樹脂純化制得的；所述大孔吸附樹脂為D101型大孔樹脂、D201型大孔樹脂、AB-8型大孔樹脂或HPD450型大孔樹脂。
3.根據權利要求1所述的細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，步驟S1中所述提取液采用體積濃度為30～100％甲醇水溶液或體積濃度為30～100％乙醇水溶液。
4.根據權利要求1所述的細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，步驟S1中所述提取方法為超聲提取、振搖提取或回流提取，提取時間為5～120min。
5.根據權利要求4所述的細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，步驟S1中所述提取方法采用超聲處理30min。
6.根據權利要求1所述的細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，所述參照物溶液中細梗香草皂苷B和細梗香草皂苷C的濃度均為0.5mg/mL。
8.根據權利要求1所述的細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，步驟S2中梯度洗脫程序如下：0～15min，流動相A占比為35％→50％，流動相B占比為65→50％；15～23min，流動相A占比為50％→60％，流動相B占比為50％→40％；23～40min，流動相A占比為60％→65％，流動相B占比為40→35％；40～45min，流動相A占比為65％→72％，流動相B占比為35→28％；45～70min，流動相A占比為72％，流動相B占比為28％。
9.根據權利要求1所述的細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，所述對照特征圖譜中，將峰3作為基準，記為峰S，計算其余3個峰與峰S的相對保留時間；所述相對保留時間在規定值的±10％范圍之內，規定值為：峰1：0.68、峰2：0.71、峰S：1.00、峰4：1.16。
10.一種利用權利要求1～9任一所述細梗香草提取物特征圖譜的構建方法在細梗香草提取物制劑、膠囊或片劑產品質量檢測中的應用，其特征在于，具體如下：
...【技術特征摘要】
1.一種細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，步驟s1中所述細梗香草提取物是將細梗香草藥材通過乙醇溶液提取后，經過大孔吸附樹脂純化制得的；所述大孔吸附樹脂為d101型大孔樹脂、d201型大孔樹脂、ab-8型大孔樹脂或hpd450型大孔樹脂。
3.根據權利要求1所述的細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，步驟s1中所述提取液采用體積濃度為30～100％甲醇水溶液或體積濃度為30～100％乙醇水溶液。
4.根據權利要求1所述的細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，步驟s1中所述提取方法為超聲提取、振搖提取或回流提取，提取時間為5～120min。
5.根據權利要求4所述的細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，步驟s1中所述提取方法采用超聲處理30min。
6.根據權利要求1所述的細梗香草提取物特征圖譜的構建方法，其特征在于，所述參照物溶液中細梗香草皂苷b和細梗香草皂苷c的濃度均為0.5mg/ml。
7.根據權利要求1所述...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李守信，田景奎，朱瑋，李偉，張曉勇，馬家惠，
申請(專利權)人：中國科學院基礎醫學與腫瘤研究所籌，
類型：發明
國別省市：
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