【技術實現步驟摘要】
本申請涉及生物制藥，具體涉及含有臍帶間充質干細胞的產品、其培養篩選方法以及應用。
技術介紹
1、間充質干細胞(mscs)是多能干細胞。間充質干細胞除了具有自我更新能力和多向分化能力外，還具有免疫調節、抗炎和抗t、b、nk細胞及巨噬細胞等免疫細胞增殖的功能。這些獨特的免疫調節特性使間充質干細胞成為治療自身免疫性疾病的熱點，如移植物抗宿主病、克羅恩病、多發性硬化癥、系統性紅斑狼瘡和系統性硬化癥等，都顯示出良好的臨床應用前景。
2、間充質干細胞對先天和適應性免疫系統的調節作用主要依賴于間充質干細胞的旁分泌能力，這可以通過分泌高水平的可溶性因子來實現。因此，間充質干細胞的免疫調節作用非常依賴于這些細胞在給藥后成功遷移到所需組織。不幸的是，間充質干細胞的歸巢是低效的，只有一小部分細胞在系統管理后到達目標組織。大多數間充質干細胞在外周靜脈移植后被發現被困在肺部。這可以歸因于毛細血管系統的機械阻抗。這種損耗是實現基于間充質干細胞療法的全部治療潛力的一個主要瓶頸。
3、系統性紅斑狼瘡(systemic?lupus?erythematosus，sle)是一種嚴重影響人類健康的自身免疫疾病，會導致患者免疫失調、多器官衰竭，有30％的難治性患者無藥可治，兩年死亡率高達35％。目前全世界大約有420萬患者，其中中國目前約有120萬患者，且近年發病率逐年上升。狼瘡性腎炎(lupusnephritis，ln)是其中最常見的并發癥之一，40％～60％的sle患者起病初即有ln，目前臨床常規性療法呈現療效不佳、毒副作用大導致患者難以耐受
4、系統性硬化癥(systemicsclerosis，ssc)又稱硬皮病，是一種以皮膚、血管和內臟器官(包括心、肺、腎和胃腸道等)纖維化為特征的結締組織病。臨床上分為兩個主要亞型：局限皮膚型ssc(cutaneous?limited?ssc，lcssc)與彌漫皮膚型ssc(cutaneous?diffusessc，dcssc)。局限皮膚型ssc皮膚纖維化局限于手指、手和面部。彌漫皮膚型ssc皮膚彌漫性硬化，通常始于手指和手，漸延及前臂、上肢、面部、軀干及下肢。ssc嚴重程度和發展情況異質性較大，常伴隨多種器官嚴重受累，后期5年的致死率高達50％以上。
5、ssc發病率為1～2/10萬，患病率僅次于類風濕關節炎(rheumatoid?arthritis，ra)、系統性紅斑狼瘡，位居結締組織疾病的第3位。臨床上主要為30～50歲的患者，女性是男性的3～4倍。盡管ssc發病和致死率很高，但目前尚未建立有效的治療方法，現有的藥物治療在逆轉和阻止疾病進展方面基本無效。臨床通常只能對患者進行對癥治療，以減輕疼痛或改善器官功能。在起病3-5年關鍵期內，現有藥物無法阻止疾病進展至重要臟器，而且可能誘發各種累及臟器的不良反應，成為導致患者死亡的主要原因之一。因此，紓解ssc患者的用藥困境，確保生命安全已經迫在眉睫。
6、間充質干細胞(mesenchymal?stem?cells，mscs)作為能夠自我更新、增殖、多向分化且能夠發揮免疫調控作用的一類細胞，具有突出的免疫調控能力和良好的安全性，在體外和體內均表現出免疫調節、免疫抑制、促血管生成、抗炎、抗纖維化等特性，mscs已在多種自身免疫性疾病的治療實踐中顯示出安全有效。mscs已被應用于多種自身免疫性疾病的治療，如治療sle、ra、干燥綜合征(sjogren?syndrome，ss)及炎癥性腸病(inflammatorybowel?disease，ibd)，且未見不良反應的報道。
技術實現思路
1、針對上述存在的技術局限性，本申請提出了含有臍帶間充質干細胞的產品、其培養篩選方法以及應用；其克服了
技術介紹
中提到的不足和缺陷。
2、為實現上述目的，本申請采用了以下技術方案：
3、本申請的第一個專利技術點是提供了一種用于治療免疫性疾病及免疫性相關疾病的生物制品，所述生物制品包括：細胞表面含有標志物的臍帶間充質干細胞，所述標志物包括slc3a2和/或clic4，且優選任意一種標志物的表達量均不小于90％。
4、可選地，上述的生物制品，所述免疫性疾病為自體免疫性疾病；優選為紅斑狼瘡和/或結締組織疾病；所述免疫性相關疾病為狼瘡相關疾病和/或結締組織相關疾病；優選為狼瘡腎炎和/或系統性硬化癥。
5、本申請的第二個專利技術點是提供了一種用于治療免疫性疾病及免疫性相關疾病的生物制品，所述生物制品為含有細胞表面標志物和細胞因子受體的臍帶間充質干細胞，所述細胞表面標志物包括slc3a2和/或clic4，所述細胞因子受體包括cxcr3和/或il4i1；
6、且優選地，以上任意一種表面標志物的表達量均不小于90％；任意一種細胞因子受體的含量均不小于40％。
7、可選地，上述的生物制品，所述免疫性疾病為自體免疫性疾病；優選為紅斑狼瘡和/或結締組織疾病；所述免疫性相關疾病為狼瘡相關疾病和/或結締組織相關疾病；優選為狼瘡腎炎和/或系統性硬化癥。
8、本申請的第三個專利技術點是提供了一種上述的生物制品的培養及篩選方法，臍帶間充質干細胞培養過程中，當匯合度達到50-90％時進行換液培養，培養12-30小時后進行收獲，再以表面標志物slc3a2和/或clic4的表達量不小于90％為標準進行篩選。
9、可選地，上述的生物制品的培養及篩選方法，所述換液培養過程中所換的培養液，為加入質量體積比1％-5％血清替代物的dmem培養液；所述血清替代物優選為人血小板裂解物hpl。
10、本申請的第四個專利技術點是提供了一種上述的生物制品的培養及篩選方法，臍帶間充質干細胞培養過程中，當匯合度達到50-90％時進行換液培養，培養12-30小時后進行收獲，再以表面標志物slc3a2和/或clic4的表達量不小于90％、以及細胞因子受體cxcr3和/或il4i1的含量不小于40％為標準進行篩選。
11、可選地，上述的生物制品的培養及篩選方法，所述換液培養過程中所換的培養液，為加入質量體積比1％-5％血清替代物的dmem培養液；所述血清替代物優選為人血小板裂解物hpl。
12、本申請的第五個專利技術點是提供了上述的生物制品或通過尚述的方法獲得的所述生物制品在制備用于治療免疫性疾病及免疫性相關疾病的產品中的應用，所述臍帶間充質干細胞為培養后篩選得到的細胞表面標志物表達量不小于90％的臍帶間充質干細胞，所述表面標志物包括slc3a2和/或clic4。
13、本申請的本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于治療免疫性疾病及免疫性相關疾病的生物制品，其特征在于，所述生物制品包括：細胞表面含有標志物的臍帶間充質干細胞，所述標志物包括SLC3A2和/或CLIC4，且優選任意一種標志物的表達量均不小于90％。
2.根據權利要求1所述的生物制品，其特征在于，所述免疫性疾病為自體免疫性疾病；優選為紅斑狼瘡和/或結締組織疾病；
3.一種用于治療免疫性疾病及免疫性相關疾病的生物制品，其特征在于，所述生物制品為含有細胞表面標志物和細胞因子受體的臍帶間充質干細胞，所述細胞表面標志物包括SLC3A2和/或CLIC4，所述細胞因子受體包括CXCR3和/或IL4I1；
4.根據權利要求3所述的生物制品，其特征在于，所述免疫性疾病為自體免疫性疾病；優選為紅斑狼瘡和/或結締組織疾病；
5.一種權利要求1或2所述的生物制品的培養及篩選方法，其特征在于，臍帶間充質干細胞培養過程中，當匯合度達到50-90％時進行換液培養，培養12-30小時后進行收獲，再以表面標志物SLC3A2和/或CLIC4的表達量不小于90％為標準進行篩選。
6.根據權利要求
7.一種權利要求3或4所述的生物制品的培養及篩選方法，其特征在于，臍帶間充質干細胞培養過程中，當匯合度達到50-90％時進行換液培養，培養12-30小時后進行收獲，再以表面標志物SLC3A2和/或CLIC4的表達量不小于90％、以及細胞因子受體CXCR3和/或IL4I1的含量不小于40％為標準進行篩選。
8.根據權利要求7所述的生物制品的培養及篩選方法，其特征在于，所述換液培養過程中所換的培養液，為加入質量體積比1％-5％血清替代物的DMEM培養液；所述血清替代物優選為人血小板裂解物hPL。
9.權利要求1或2所述的生物制品或通過權利要求5或6所述的方法獲得的所述生物制品在制備用于治療免疫性疾病及免疫性相關疾病的產品中的應用，其特征在于，所述臍帶間充質干細胞為培養后篩選得到的細胞表面標志物表達量不小于90％的臍帶間充質干細胞，所述表面標志物包括SLC3A2和/或CLIC4。
10.權利要求3或4所述的生物制品或通過權利要求5或6所述的方法獲得的所述生物制品在制備用于治療免疫性疾病及免疫性相關疾病的產品中的應用，其特征在于，所述臍帶間充質干細胞為培養后篩選得到的細胞表面標志物表達量不小于90％的、以及細胞因子受體的含量不小于40％的臍帶間充質干細胞；所述表面標志物包括SLC3A2和/或CLIC4，所述細胞因子受體為CXCR3和/或IL4I1。
...【技術特征摘要】
1.一種用于治療免疫性疾病及免疫性相關疾病的生物制品，其特征在于，所述生物制品包括：細胞表面含有標志物的臍帶間充質干細胞，所述標志物包括slc3a2和/或clic4，且優選任意一種標志物的表達量均不小于90％。
2.根據權利要求1所述的生物制品，其特征在于，所述免疫性疾病為自體免疫性疾病；優選為紅斑狼瘡和/或結締組織疾病；
3.一種用于治療免疫性疾病及免疫性相關疾病的生物制品，其特征在于，所述生物制品為含有細胞表面標志物和細胞因子受體的臍帶間充質干細胞，所述細胞表面標志物包括slc3a2和/或clic4，所述細胞因子受體包括cxcr3和/或il4i1；
4.根據權利要求3所述的生物制品，其特征在于，所述免疫性疾病為自體免疫性疾病；優選為紅斑狼瘡和/或結締組織疾病；
5.一種權利要求1或2所述的生物制品的培養及篩選方法，其特征在于，臍帶間充質干細胞培養過程中，當匯合度達到50-90％時進行換液培養，培養12-30小時后進行收獲，再以表面標志物slc3a2和/或clic4的表達量不小于90％為標準進行篩選。
6.根據權利要求5所述的生物制品的培養及篩選方法，其特征在于，所述換液培養過程中所換的培養液，為加入質量體積比1％-5％血清替代物的dmem培養液；所述血清替代物優選為人血小板裂解物hpl。
7.一...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王廣基，蘇月焱，郭佳祺，周芳，尹璇，單云龍，張啟祥，張月，張藝，章夢玲，易克政，
申請(專利權)人：江蘇睿源生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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