【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及動物模型及其應用，更具體地說，它涉及基于uox基因敲除小鼠腎結石動物模型的構建方法。
技術介紹
1、高尿酸血癥(hyperuricemia,hua)主要是由于尿酸排泄減少或嘌呤代謝障礙而引起的血尿酸增高。hua發(fā)病率逐年增高，腎結石患者中26-40％的患者合并高尿酸血癥。hua是導致腎結石的高風險因素，隨著人類的飲食結構和生活習慣等方式的改變，腎結石的發(fā)生率會進一步上升，將嚴重危害人類的身體健康。因此積極有效的控制血尿酸水平能夠扭轉腎結石形成的誘因，降低復發(fā)率，具有積極意義。
2、人類在進化中編碼尿酸氧化酶(urate?oxidase，uox)的基因沉默失活(因此患高尿酸血癥的風險也大大增加)，而嚙齒類動物編碼尿酸氧化酶的基因正常表達，uox可將尿酸分解為尿囊素從而排除體外。這一特征使得在嚙齒類動物中復制人類高尿酸血癥具有較大的困難。因此利用基因工程技術使動物產(chǎn)生尿酸酶的基因缺失，獲得uox缺乏的小鼠，造成高尿酸血癥模型。該模型能更好的模擬人類中尿酸的生成及代謝途徑，并為研究某藥物或某靶點對高尿酸血癥或高尿酸血癥腎結石模型的作用機制提供良好并穩(wěn)定的模型。
技術實現(xiàn)思路
1、為了克服現(xiàn)有技術中所存在的上述缺陷，本專利技術提供了基于uox基因敲除小鼠腎結石動物模型的構建方法，該模型能更好的模擬人類中尿酸的生成及代謝途徑，并為研究某藥物或某靶點對高尿酸血癥或高尿酸血癥腎結石模型的作用機制提供良好并穩(wěn)定的模型。
2、本專利技術的上述技術目的是通過以下技
3、s1、小鼠的選擇：選取健康、精神狀況良好、未發(fā)生外傷及殘疾的uox-/-的雄性c57bl/6小鼠為實驗動物，進行適應性飼養(yǎng)；
4、s2、小鼠的鑒定：飼養(yǎng)1周后，收集小鼠的血液樣本0.2ml，并對小鼠的血清尿酸進行檢測；
5、s3、小鼠的飼養(yǎng)：進行兩周的恢復性飼養(yǎng)，期間給予小鼠標準飼料、適量的瓜子及潔凈飲用水，每天更換飲水、墊料和飼料并觀察小鼠生命健康情況；
6、s4、小鼠的造模：給予小鼠標準飼料、配比好的nh4ci(0.25％)濃度自由飲用水和劑量為5mg·kg-1的苯溴馬隆灌胃處理3周，每天更換飲水、墊料和飼料并觀察小鼠生命健康情況。
7、s5、模型的鑒定，具體包括：
8、1)小鼠完成給藥三周處理后，使用小鼠的超聲成像儀對小鼠的小鼠的泌尿系進行腹部檢查，觀察小鼠腎臟，若存在結石或尿鹽沉積，則模型鑒定成功；
9、2)若步驟(1)中觀察小鼠腎臟中不存在結石或尿鹽沉積時，收集小鼠的尿液進行尿液晶體檢測，并將小鼠尿液在離心機上離心后，在顯微鏡鏡下觀察晶體的數(shù)量及形態(tài)，最后在偏正光鏡下觀察晶體；
10、3)然后對小鼠進行解剖取材，通過肉眼觀察或把小鼠的腎臟組織進行he染色，觀察腎臟組織切片，若有晶體或結石形成，則模型鑒定成功。
11、進一步的，步驟s2中，采用小鼠眼眶靜脈叢采血的方式收集小鼠的血液樣本。
12、進一步的，步驟s2中，使用尿酸含量檢測試劑盒對小鼠的血清尿酸進行檢測。
13、基于uox基因敲除小鼠腎結石動物模型在抗高尿酸血癥治療中的應用。
14、基于uox基因敲除小鼠腎結石動物模型在腎結石治療中的應用。
15、綜上所述，本專利技術具有以下有益效果：
16、(1)目前尚未有高尿酸血癥腎結石的動物模型的創(chuàng)建。
17、(2)現(xiàn)有的各種腎結石的動物模型，絕大部分是關于草酸鈣腎結石模型的構建方法，而本專利構建的是高尿酸血癥腎結石動物模型，并且，本方法構建出的結石模型并非單一的模型，還能構建出草酸鈣結石模型、純尿酸結石模型或者混合型結石模型。這與臨床上高尿酸血癥腎結石患者術后結石成分分析結果是一致的。
18、(3)本申請通過uox基因敲除小鼠來構建，不需要使用其他誘導小鼠高尿酸血癥藥物或事物，大大減輕了小鼠負擔，也大大減少了構建模型的老鼠死亡率；同時，基因敲除的小鼠能使得小鼠能維持高水平的高尿酸血癥，而因藥物或事物構建的模型，因為代謝等因素，并不能構建出穩(wěn)定的高尿酸血癥模型。
19、(4)基因敲除后的小鼠，恰恰更能貼近模擬出人體內(nèi)的尿酸代謝途徑，為臨床上藥物治療及病理機制的探討提供更加穩(wěn)定的模型。
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1.基于UOX基因敲除小鼠腎結石動物模型的構建方法，其特征是：包括以下步驟：
2.基于權利要求1所述的基于UOX基因敲除小鼠腎結石動物模型的構建方法，其特征在于，步驟S2中，采用小鼠眼眶靜脈叢采血的方式收集小鼠的血液樣本。
3.基于權利要求1所述的基于UOX基因敲除小鼠腎結石動物模型的構建方法，其特征在于，步驟S2中，使用尿酸含量檢測試劑盒對小鼠的血清尿酸進行檢測。
4.基于權利要求1所述的基于UOX基因敲除小鼠腎結石動物模型在抗高尿酸血癥治療中的應用。
5.基于權利要求1所述的基于UOX基因敲除小鼠腎結石動物模型在腎結石治療中的應用。
【技術特征摘要】
1.基于uox基因敲除小鼠腎結石動物模型的構建方法，其特征是：包括以下步驟：
2.基于權利要求1所述的基于uox基因敲除小鼠腎結石動物模型的構建方法，其特征在于，步驟s2中，采用小鼠眼眶靜脈叢采血的方式收集小鼠的血液樣本。
3.基于權利要求1所述的基于uox基因敲除小鼠腎...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：鐘禹文，陳家浩，粟宏偉，賴俊諭，
申請(專利權)人：西南醫(yī)科大學附屬中醫(yī)醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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