【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于微生物，具體涉及一株蔗糖小迫氏菌mep0410及其在鐵皮石斛育苗中的應用。
技術介紹
1、鐵皮石斛（ dendrobium?officinalekimura?et?migo），別名黑節草，為蘭科石斛屬多年生草本植物，生長于海拔800-1600米的懸崖巖石或密林樹干上。鐵皮石斛是我國傳統名貴中藥材，在民間被稱為“救命仙草”，享有“中華九大仙草”之首的美譽，主要分布于我國云南、廣西、福建、貴州、浙江等地。鐵皮石斛作為藥食同源植物，其入藥常以干品?(如飲片、楓斗等)?形式，其新鮮莖稈可直接食用，也可煲湯、榨汁、浸酒等形式食用。由于其極高的藥用價值和經濟價值，鐵皮石斛濫采濫挖的現象極為嚴重，再加上其在自然條件下繁殖率低、生長慢，鐵皮石斛野生資源已瀕臨枯竭。人工栽培是滿足其龐大市場需求的有效途徑，但為追求高產，縮短生長周期，目前人工種植鐵皮石斛存在濫用化肥、化學藥劑等現象，導致人工栽培的鐵皮石斛生長年限縮短，品質差問題。因此尋找有效、綠色的提高人工種植鐵皮石斛品質的方式，對保證鐵皮石斛藥材的質量以及用藥安全具有重要意義。
2、植物內生菌是指其生活史中某一階段或整個階段生活在健康植物組織或器官中，并對宿主植物不會引起明顯病害癥狀的一類微生物群，主要包括內生細菌、內生放線菌、內生真菌；其作為一類非常重要的微生物資源，在促進植物生長、次級代謝產物積累、提高植物抗逆性等方面具有重要作用。近些年，探究內生菌與藥用植物互作關系，利用內生菌提高藥用植物的品質及產量已成為研究熱點
技術實現思路
1、針對目前人工栽培鐵皮石斛過程中存在濫用化肥，導致鐵皮石斛品質差，無法保證其藥材質量，同時帶來環境污染等技術難題，本專利技術提供了一株鐵皮石斛內生菌mep0410及其在促進鐵皮石斛生長中的應用，特別是促進鐵皮石斛次級代謝產物積累中的應用。
2、本專利技術采用的技術方案如下：
3、一株蔗糖小迫氏菌（ kosakonia?sacchari）mep0410，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為cgmcc?no.?30045，保藏日期為2024年03月18日，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。
4、本專利技術的菌株mep0410是從采自廣西壯族自治區來賓市金秀縣的健康野生鐵皮石斛采用內生菌分離純化技術分離獲得，經形態、分子鑒定表明其為蔗糖小迫氏菌（ kosakonia?sacchari）。具體分離純化方法如下：
5、（1）取野生鐵皮石斛植株的根、莖、葉于流水下沖洗30?min直至表面干凈后用吸水紙吸去組織表面水分。將清洗后的樣本在超凈工作臺中進行表面消毒：先用75%乙醇浸泡1min?，然后用無菌水沖洗2次，再用5%次氯酸鈉浸泡10?min，無菌水沖洗4次。將表面消毒后的樣本（根、莖、葉）分別放入研缽中，加入9?ml無菌水研磨均勻，并將研磨液用無菌水進行梯度稀釋（10-1、10-2、10-3），然后將研磨原液及稀釋液（10-1、10-2、10-3）分別涂布于isp2固體培養基，并于28℃培養3-5?d，直至長出單菌落。
6、（2）挑取單菌落于相同的isp2平板劃線純化，于28℃培養3-5?d；
7、（3）重復步驟（2），直至獲得純培養物。
8、上述蔗糖小迫氏菌mep0410在促進鐵皮石斛生長中的應用。
9、進一步地，所述蔗糖小迫氏菌mep0410促進鐵皮石斛次級代謝產物積累。優選地，所述次級代謝產物包括多糖、黃酮、生物堿。
10、上述蔗糖小迫氏菌mep0410在制備促進鐵皮石斛生長的產品中的應用。
11、上述蔗糖小迫氏菌mep0410制備的菌劑。
12、進一步地，所述菌劑通過以下方法制備得到：將上述蔗糖小迫氏菌mep0410的活化菌液轉接于isp2液體培養基，28℃，200?rpm搖床培養4?d，離心收集菌體，用無菌水洗滌后離心收集菌體，并用無菌水將菌體重懸，獲得的菌液即為所述的菌劑。
13、在本專利技術的一個實施例中，所述活化菌液是將蔗糖小迫氏菌mep0410的菌株接種于isp2液體培養基中，于28℃搖床，200?rpm培養4?d，進行活化。
14、上述菌劑在培育鐵皮石斛高品質種苗中的應用。
15、一種鐵皮石斛高品質種苗的培育方法，采用上述菌劑浸泡鐵皮石斛組培苗根部，之后將鐵皮石斛組培苗轉入ms基礎培養基進行培養。
16、本專利技術提供的一株從鐵皮石斛根部分離獲得的蔗糖小迫氏菌（ kosakonia? sacchari）mep0410，該菌株具有固氮、產鐵載體、產acc脫氨酶活性等潛在的促生能力，可有效促進鐵皮石斛次級代謝產物的積累。本專利技術可為開發提升人工栽培鐵皮石斛品質的菌肥提供優良菌種資源，對促進鐵皮石斛產業化快速發展具有重要意義。
17、與現有技術相比，本專利技術的優點是：
18、（1）本專利技術中分離獲得的蔗糖小迫氏菌（ kosakonia?sacchari）mep0410具有固氮、產鐵載體、產acc脫氨酶活性等促生潛力，可以有效提高鐵皮石斛多糖、黃酮、生物堿等次級代謝產物的含量。該菌株可開發作為微生物菌劑，用于高質量的鐵皮石斛種苗培育以及提高人工種植鐵皮石斛的品質，生產綠色、生態、高質量的鐵皮石斛藥材，能夠保證其藥材使用的有效性及安全性，同時能夠減輕化肥濫用帶來的環境污染等問題。
19、（2）本專利技術公開的蔗糖小迫氏菌（ kosakonia?sacchari）mep0410培養條件簡單、容易保存、遺傳穩定、易于工業化生產，具有廣闊的開發應用前景。
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1.?一株蔗糖小迫氏菌（Kosakonia?sacchari）MEP0410，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?NO.?30045，保藏日期為2024年03月18日，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。
2.權利要求1所述的蔗糖小迫氏菌MEP0410在促進鐵皮石斛生長中的應用。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述蔗糖小迫氏菌MEP0410促進鐵皮石斛次級代謝產物積累。
4.權利要求1所述的蔗糖小迫氏菌MEP0410在制備促進鐵皮石斛生長的產品中的應用。
5.權利要求1所述的蔗糖小迫氏菌MEP0410制備的菌劑。
6.?根據權利要求5所述的菌劑，其特征在于，通過以下方法制備得到：將權利要求1所述的蔗糖小迫氏菌MEP0410的活化后接種于ISP2液體培養基，28℃，200?rpm搖床培養4?d，離心收集菌體，用無菌水洗滌后離心收集菌體，并用無菌水將菌體重懸，獲得的菌液即為所述的菌劑。
7.?根據權利要求6所述的菌劑，其特征在于：所述活化
8.權利要求5至7任一項所述的菌劑在培育鐵皮石斛高品質種苗中的應用。
9.一種鐵皮石斛高品質種苗的培育方法，其特征在于，采用權利要求5至7任一項所述的菌劑浸泡鐵皮石斛組培苗根部，之后將鐵皮石斛組培苗轉入MS基礎培養基進行培養。
...【技術特征摘要】
1.?一株蔗糖小迫氏菌（kosakonia?sacchari）mep0410，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為cgmcc?no.?30045，保藏日期為2024年03月18日，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。
2.權利要求1所述的蔗糖小迫氏菌mep0410在促進鐵皮石斛生長中的應用。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述蔗糖小迫氏菌mep0410促進鐵皮石斛次級代謝產物積累。
4.權利要求1所述的蔗糖小迫氏菌mep0410在制備促進鐵皮石斛生長的產品中的應用。
5.權利要求1所述的蔗糖小迫氏菌mep0410制備的菌劑。
6.?根據權利要求5所述的菌劑，...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李露丹，蔣侄麗，李艷婷，王藝璇，劉明杰，傅海蘭，柏安琦，曹小迎，徐丹，蔣繼宏，
申請(專利權)人：江蘇師范大學，
類型：發明
國別省市：
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