【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
：本專利技術(shù)屬于冬蟲夏草人工培育，具體涉及rna干擾蝙蝠蛾幼蟲相關(guān)基因在促進冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲中的應用
技術(shù)介紹
0、
技術(shù)介紹
：
1、冬蟲夏草的人工撫育已取得了重大突破，在低海拔地區(qū)通過模擬高原環(huán)境可生產(chǎn)媲美野生的冬蟲夏草，實現(xiàn)了珍稀生物資源從實驗室到行業(yè)的飛躍。冬蟲夏草菌菌種的不穩(wěn)定、病原菌對蝙蝠蛾幼蟲的高致死率、攜菌幼蟲的低僵化率等因素嚴重制約了冬蟲夏草的人工高效生產(chǎn)。影響攜菌幼蟲僵化率(即芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲后形成的僵蟲比例)的關(guān)鍵因素在于冬蟲夏草菌在寄主昆蟲血淋巴中由芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲的效率。
2、真菌二態(tài)型是在環(huán)境因子的影響下，一些真菌菌體形態(tài)在酵母型與菌絲型之間發(fā)生相互轉(zhuǎn)變的現(xiàn)象。冬蟲夏草菌是典型的二態(tài)型真菌(芽生孢子-菌絲)，在特定因素的誘導下，可通過出芽生長產(chǎn)生更多的芽生孢子，或通過頂端生長形成細長的預菌絲(prehyphae)和菌絲。n-乙酰葡糖胺、脯氨酸、法尼醇、酪醇、甲基法尼酯、蛻皮激素可于體外不同程度地促進冬蟲夏草菌芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲。據(jù)報道，昆蟲蛻皮激素和保幼激素、甘露醇于蝙蝠蛾幼蟲體內(nèi)可促進其僵化。
3、冬蟲夏草菌感染蝙蝠蛾幼蟲后，很長時間以芽生孢子形態(tài)生長于幼蟲血淋巴中，受到蝙蝠蛾幼蟲的調(diào)控。但蝙蝠蛾幼蟲哪些基因調(diào)控其血淋巴中的冬蟲夏草菌芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲扔未見報道。小干擾rna(sirna)，有時稱為短干擾rna或沉默rna，是一類雙鏈rna分子，長度為20-25個堿基對，在rna干擾(rnai)途徑內(nèi)操作，干擾了表達與互補的核苷酸序列的特定基因的轉(zhuǎn)錄
技術(shù)實現(xiàn)思路
0、
技術(shù)實現(xiàn)思路
：
1、基于冬蟲夏草菌二型態(tài)轉(zhuǎn)化的蝙蝠蛾幼蟲調(diào)控問題，本專利技術(shù)的目的是提供rna干擾蝙蝠蛾幼蟲相關(guān)基因在促進冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲中的應用，從而克服攜帶冬蟲夏草菌蝙蝠蛾幼蟲僵化率低，人工撫育冬蟲夏草周期長的問題。
2、本專利技術(shù)通過研究發(fā)現(xiàn)，以rnai技術(shù)敲低蝙蝠蛾幼蟲的相關(guān)基因可促進幼蟲血淋巴中冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲。
3、因此，本專利技術(shù)提供了蝠蛾幼蟲中可調(diào)控冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲的基因，所述的基因如以下任一所述：
4、flightin基因，其核苷酸序列如seq?id?no.8；
5、larvalcuticleproteinlcp-30基因，其核苷酸序列如seq?id?no.11-15中任一所示；
6、26-hydroxylase(cyp18a1)基因，其核苷酸序列如seq?id?no.9或10所示；
7、cuticleprotein?18.6,isoform?b基因，其核苷酸序列如seq?id?no.21-27中任一所示；
8、probable?chitinase?3基因，其核苷酸序列如seq?id?no.16-20中任一所示。
9、本專利技術(shù)的第二個目的提供敲低上述基因表達的sirna。
10、優(yōu)選，所述的sirna的序列如如下任一sirna所示或二種以上的組合：
11、
12、
13、
14、
15、英文字母表示該基因的拷貝數(shù)編號，阿拉伯數(shù)字表示該基因每個拷貝中sirna的正義上鏈-1、正義下鏈-2，反義上鏈-3、反義下鏈-4。
16、本專利技術(shù)的第三個是提供是提供上述基因在調(diào)控冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲中的應用。
17、優(yōu)選，是降低上述基因的表達量的制劑在促進冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲中的應用。
18、優(yōu)選，是通過rnai敲低上述基因表達促進冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲中的應用。
19、優(yōu)選，是降低上述基因的表達量的制劑在促進攜帶冬蟲夏草菌的蝙蝠蛾幼蟲的僵化，即在制備促進蝙蝠蛾幼蟲僵化的制劑中應用。
20、本專利技術(shù)的第四個目的是提供一種促進蝙蝠蛾幼蟲僵化的方法，其特征在于，以上述基因的sirna分別或混合導入攜冬蟲夏草菌的蝙蝠蛾幼蟲體內(nèi)，促進蝙蝠蛾幼蟲的僵化。
21、優(yōu)選，所述的冬蟲夏草菌為ophiocordyceps?sinensis。
22、優(yōu)選，所述的蝙蝠蛾幼蟲齡期為6齡。
23、優(yōu)選，所述的sirna，每頭幼蟲接種劑量為4μg。
24、本專利技術(shù)針對被冬蟲夏草菌感染蝙蝠蛾幼蟲中芽生孢子長時間保持，僵化過程耗時、僵化率低，導致冬蟲夏草人工撫育周期長和成本高等問題，將蝙蝠蛾幼蟲的flightin,larval?cuticle?protein?lcp-30,26-hydroxylase,cuticleprotein?18.6,isoform?b和probable?chitinase?3基因的sirna分別或混合注射攜菌蝙蝠蛾幼蟲，蝙蝠蛾幼蟲血淋巴中芽生孢子轉(zhuǎn)化為預菌絲比例分別為flightin(83.33±11.02),larval?cuticle?proteinlcp-30(78.25±3.55％),26-hydroxylase(cyp18a1)(40.48±6.30％),cuticle?protein18.6,isoform?b(39.81±2.31％)andprobable?chitinase?3(34.52±7.81％)，而對照中蝙蝠蛾幼蟲血淋巴中僅存在芽生孢子。這說明敲低蝙蝠蛾幼蟲的相關(guān)基因可顯著提高幼蟲血淋巴中冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲的比例。。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護點】
1.可調(diào)控冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲的基因，其特征在于，所述的基因如以下任一所述：
2.一種敲低權(quán)利要求1所述的基因表達的siRNA。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的siRNA，其特征在于，所述的siRNA的序列如如下任一siRNA所示或兩種以上的組合：
4.權(quán)利要求1所述的基因在調(diào)控冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲中的應用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應用，其特征在于，是降低權(quán)利要求1所述的基因的表達量的制劑在促進冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲中的應用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應用，其特征在于，是通過RNAi敲低權(quán)利要求1所述的基因表達促進冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲中的應用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應用，其特征在于，是降低權(quán)利要求1所述的基因的表達量的制劑在促進攜帶冬蟲夏草菌的蝙蝠蛾幼蟲的僵化，即降低權(quán)利要求1所述的基因的表達量的制劑在制備促進蝙蝠蛾幼蟲僵化的制劑中應用。
8.一種促進蝙蝠蛾幼蟲僵化的方法，其特征在于，以權(quán)利要求1所述的基因的siRNA分別或混合導入攜冬蟲夏草菌的蝙蝠蛾幼蟲體內(nèi)
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述的siRNA為權(quán)利要求3所述的siRNA。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述的冬蟲夏草菌為Ophiocordycepssinensis；所述的蝙蝠蛾幼蟲齡期為6齡。
...【技術(shù)特征摘要】
1.可調(diào)控冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲的基因，其特征在于，所述的基因如以下任一所述：
2.一種敲低權(quán)利要求1所述的基因表達的sirna。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的sirna，其特征在于，所述的sirna的序列如如下任一sirna所示或兩種以上的組合：
4.權(quán)利要求1所述的基因在調(diào)控冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲中的應用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應用，其特征在于，是降低權(quán)利要求1所述的基因的表達量的制劑在促進冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲中的應用。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應用，其特征在于，是通過rnai敲低權(quán)利要求1所述的基因表達促進冬蟲夏草菌從芽生孢子轉(zhuǎn)化為菌絲中...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李振皓，李明焱，曹莉，王瑛，韓日疇，徐靖，朱金濤，
申請(專利權(quán))人：浙江壽仙谷醫(yī)藥股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。