【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，具體而言，本專利技術涉及一種同時具有鉤吻2-氧戊二酸雙加氧酶、氮甲基轉移酶的酶、其基因及其在制備(19(z)-anhydrovobaxinediol)上的應用。
技術介紹
1、鉤吻(gelsemium?elegans)又名大茶藥、斷腸草等，為馬錢科植物胡蔓藤的全草。鉤吻分為三種，一種是中國鉤吻gelsemium?elegans?benth，產于亞洲，在我國主要分布于浙江、福建、廣東、廣西等地；另外兩種是北美鉤吻，包括gelsemium?sempervirens?art以及gelsemium?rankinii?small，有劇毒，產于美洲。
2、鉤吻的有效化學成分為吲哚類生物堿，而吲哚生物堿既是活性成分，也是其毒性成分。近年來，我國對鉤吻的應用有了進一步發展，己從過去的僅供外用發展為酊劑、浸膏、合劑、注射劑等多種劑型，應用范圍也逐步擴大，臨床上用于抗腫瘤、鎮痛、擴瞳及畜禽復壯等方面。
3、鉤吻的化學成分復雜，至今已從鉤吻植物中提取到190余種成分，包括生物堿及甾體、環烯醚萜等非生物堿。鉤吻生物堿主要為吲哚生物堿，包括鉤吻素子、甲、戊、己、寅、卯、辰、丙、丁、庚以及胡蔓藤堿甲、已、丙、丁等40多種單體，其中鉤吻素子的含量最大，其次是鉤吻素甲。另有報道鉤吻各部分生物堿的含量以根皮部為最高(1.5-2.2％)，莖次之(0.4-0.5％)，莖皮為(1-1.1％)，葉的含量僅為0.3％。
4、19(z)-anhydrovobaxinediol是草藥鉤吻的提取成分之一,是合成鉤吻素子的重
5、本專利技術的研究對象為鉤吻素戊、(19(z)-anhydrovobaxinediol)、鉤吻素子，在2-氧戊二酸雙加氧酶和氮甲基轉移酶的作用下將生成鉤吻素子中間體(19(z)-anhydrovobaxinediol)。
技術實現思路
1、本專利技術主要提供了一種酶，其同時具有鉤吻2-氧戊二酸雙加氧酶和氮甲基轉移酶、其基因及其在制備(19(z)-anhydrovobaxinediol)上的應用。為了實現本專利技術的目的，擬采用如下技術方案：
2、本專利技術一方面涉及一種酶，其同時具有鉤吻2-氧戊二酸雙加氧酶和氮甲基轉移酶，其特征在于所述酶具有seq?id?no.1所示的蛋白的氨基酸序列。
3、seq?id?no.1
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18、tqnpggkernekeflalateagfkgirkecfvsnlwimefyk本專利技術另一方面還涉及鉤吻2-氧戊二酸雙加氧酶和氮甲基轉移酶基因，所述基因編碼權利要求1所述的鉤吻2-氧戊二酸雙加氧酶和氮甲基轉移酶。
19、在本專利技術的一個優選實施方式中，所述酶基因具有seq?id?no.2所示的核酸序列。
20、seq?id?no.2
21、atggcctcagtagctccggtagagcacctggcttccattgctagtcc
22、tgctcaaccatccaattttccatgggttaaagtacttgccgaatcacc
23、tgaccttaaatccatcccttctcgttatgcttacttcaacactactga
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1.一種酶，其同時具有鉤吻2-氧戊二酸雙加氧酶和氮甲基轉移酶，其特征在于所述酶具有SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列。
2.一種基因，其同時具有鉤吻2-氧戊二酸雙加氧酶和氮甲基轉移酶基因，所述基因編碼權利要求1所述的酶。
3.根據權利要求1所述的酶基因，所述酶具有SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示的核酸序列。
4.一種重組質粒，所述重組質粒具有權利要求2或3所述的酶基因。
5.根據權利要求4所述的重組質粒，所述重組質粒通過將2-氧戊二酸雙加氧酶基因和氮甲基轉移酶基因與pET28a載體同源重組獲得。
6.一種轉基因工程菌，含有權利要求4或5所述的重組質粒，或，所述基因工程菌的基因組中整合有外源的權利要求2或3所述的酶基因和氮甲基轉移酶基因。
7.根據權利要求6所述的轉基因工程菌，所述轉基因工程菌為大腸桿菌Rosetta(DE3)菌株。
8.權利要求1所述的酶在以鉤吻素戊為原料制備19(Z)-anhydrovobaxinediol的應用，其中，所述19(Z)-anhydrovoba
9.根據權利要求8所述的應用，所述應用以鉤吻素戊為原料，在由上述的酶的催化下，在鉤吻素戊的C-15位上的氮基上進行加氧環化反應和甲基化反應，生成19(Z)-anhydrovobaxinediol。
...【技術特征摘要】
1.一種酶，其同時具有鉤吻2-氧戊二酸雙加氧酶和氮甲基轉移酶，其特征在于所述酶具有seq?id?no.1所示的氨基酸序列。
2.一種基因，其同時具有鉤吻2-氧戊二酸雙加氧酶和氮甲基轉移酶基因，所述基因編碼權利要求1所述的酶。
3.根據權利要求1所述的酶基因，所述酶具有seq?id?no.1和seq?id?no.2所示的核酸序列。
4.一種重組質粒，所述重組質粒具有權利要求2或3所述的酶基因。
5.根據權利要求4所述的重組質粒，所述重組質粒通過將2-氧戊二酸雙加氧酶基因和氮甲基轉移酶基因與pet28a載體同源重組獲得。
6.一種轉基因工程菌，含有權利要求4...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張廣輝，李志遠，楊生超，陳庚，舒彥宇，馮孝林，馬迪娜，盧迎春，馬驍，馬飛飛，郭振宇，
申請(專利權)人：云南農業大學，
類型：發明
國別省市：
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