【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于中藥，具體涉及一種從連翹中同時制備對照品級連翹苷和連翹酯苷a。
技術介紹
1、連翹(forsythia?suspensa(thunb.)vahl)為木犀科連翹屬落葉灌木，秋季果實初熟尚帶綠色時采收，除去雜質，蒸熟，曬干，習稱“青翹”；果實熟透時采收，曬干，除去雜質，習稱“老翹”，具有清熱解毒、消腫散結之功效。現代藥理研究表明，連翹具有抗菌、抗病毒、解熱抗炎、抗氧化、保肝等多種藥理作用。連翹苷和連翹酯苷a為連翹的重要活性物質，是國家藥典所規定的連翹質量控制指標成分。連翹苷具有清熱、解毒、散結排膿、降血脂等功效；連翹酯苷a對阿爾茨海默癥有一定的療效，對金黃色葡萄球菌等多種致病菌具有抑制作用，而且還能夠抑制磷酸二酯酶、真菌以及活性氧，兩者在醫藥和食品領域作為天然藥物、天然防腐劑及天然抗氧化劑均具有廣泛的應用前景。
2、目前，對連翹苷和連翹酯苷a的提取及純化方法均有報道。現有技術中，主要通過熱水提取，硅膠柱或柱層析法純化得到連翹苷和連翹酯苷a。中國專利cn201110209731.3公開了一種從連翹葉中提取連翹苷和連翹酯苷a的方法，其先通過熱水提取，沉淀分離，再用有機溶劑萃取，乙醇重結晶等制備連翹苷和連翹酯苷a，但熱水提取不完全，耗時太長，得率比較低。
3、現有技術存在的不足：(1)水提取多采用將連翹與水混合浸泡后再加熱提取，提取效率低下，有效成分提取不充分；(2)分離還停留在硅膠柱分離的階段，需要用大量的有機溶劑沖洗，分離周期長，回收率低，分離效果不理想，所用的材料也不能重復使用，成本較高，不符合
技術實現思路
1、為了解決上述問題，本專利技術提供一種分離、純化連翹苷和連翹酯苷a的方法，目的在于提供一種快速、高效分離對照品級連翹苷和連翹酯苷a的新方法，尤其是一種采用動態軸向壓縮柱分離制備連翹苷和連翹酯苷a的方法。
2、本專利技術解決了現有技術中分離制備連翹苷和連翹酯苷a所存在的純度及收率低、除雜不徹底、人工成本高、操作復雜和工藝路線不合理以及不適合大生產等弊端。
3、為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：
4、一種同時制備高純度連翹苷和連翹酯苷a的方法，包括下列步驟：
5、a、提取：取連翹飲片，加入4-10倍的40％-90％乙醇溶液，加熱回流提取4次，每次1-2h，合并醇回流液，減壓濃縮至50-60℃時相對密度為1.02-1.05，得濃縮液ⅰ，備用；
6、b、萃取：取濃縮液ⅰ，加入0.5-2倍體積的30-60℃石油醚萃取2次，收集水層，減壓濃縮得濃縮液ⅱ；濃縮液ⅱ再加入0.5-2倍體積正丁醇萃取2次，合并正丁醇層，減壓濃縮，得干膏，備用；
7、c、冷沉析晶：取步驟b所得干膏用甲醇溶解，加水稀釋，冷沉24-48小時，離心，過濾收集上清液得連翹苷和連翹酯苷a混合物粗品溶液；
8、d、高效液相色譜法制備：將連翹苷和連翹酯苷a混合物粗品溶液注入高效液相色譜制備柱，梯度洗脫，紫外檢測器在線檢測，分別收集含連翹苷和含連翹酯苷a的流出液，收集液減壓濃縮，冷凍干燥，即得。
9、優選地，步驟a取連翹飲片先用8-10倍量70％-90％乙醇提取2次，再用4-6倍量40％-60％乙醇提取2次。
10、優選地，步驟a取連翹飲片先用8倍量85％乙醇提取2次，再用6倍量50％乙醇提取2次。
11、優選地，步驟b中，濃縮液ⅰ加1倍體積的30-60℃石油醚萃取2次；濃縮液ⅱ加1倍體積的正丁醇萃取2次。
12、優選地，步驟d所述的高效液相色譜制備柱為dac-hb50動態軸向壓縮柱。
13、步驟d所述高效液相色譜制備柱填料為反相硅膠基質填料；優選地，所述反向硅膠基質填料為十八烷基鍵合硅膠；進一步優選填料為華譜粒徑為10μm。
14、本專利技術中，步驟d梯度洗脫過程以甲醇-純化水為流動相。
15、優選地，梯度洗脫按照如下條件進行洗脫：
16、
17、
18、優選地，所述洗脫梯度條件如下：
19、
20、優選地，步驟d所述紫外檢測為雙波長檢測，連翹苷檢測波長為277nm，連翹酯苷a的檢測波長為330nm。
21、本專利技術的技術方案與現有技術相比，取得了如下的技術優勢和有益效果：
22、1)本專利技術通過回流、萃取、冷沉析晶、高效液相色譜法制備，能有效去除雜質，富集、提高有效成分含量、收率，使連翹苷及翹酯苷a純度達到對照品級別，所得連翹中連翹苷及翹酯苷a純度高達99.8％，明顯優于現有技術，臨床應用效果好。
23、2)本專利技術連翹提取過程分別使用85％和50％的乙醇回流提取4次，可以兼顧連翹苷和連翹酯苷a的提取得率，可同時使得連翹苷和連翹酯苷a的提取收率都能達到最高，減少藥材資源的浪費。
24、3)本專利技術萃取過程采用選用石油醚萃取，可除去提取液中脂溶性色素，正丁醇萃取，可以除去部分極性較大、水溶性的雜質，純化樣品，使樣品滿足制備柱上樣樣品需求，保護制備柱的柱頭和填料，適于連續生產。
25、4)本專利技術采用雙波長檢測法，可在一張色譜圖上精準定位連翹苷和連翹酯苷a的色譜峰，同時制備高純度的連翹苷和連翹酯苷a，保證連翹苷和連翹酯苷a有效成分的準確分離和富集，提高提取物中連翹苷和連翹酯苷a的含量。本制備方法可實現半自動化操作，節約時間，減少生產成本，更適合大生產。
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1.一種同時制備高純度連翹苷和連翹酯苷A的方法，其特征在于，包括下列步驟：
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟A取連翹飲片先用8-10倍量70％-90％乙醇提取2次，再用4-6倍量40％-60％乙醇提取2次。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟A取連翹飲片先用8倍量85％乙醇提取2次，再用6倍量50％乙醇提取2次。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟B中，濃縮液Ⅰ加1倍體積的30-60℃石油醚萃取2次；濃縮液Ⅱ加1倍體積的正丁醇萃取2次。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟D所述的高效液相色譜制備柱為DAC-HB50動態軸向壓縮柱。
6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟D所述高效液相色譜制備柱填料為反相硅膠基質填料；優選地，所述反向硅膠基質填料為十八烷基鍵合硅膠；進一步優選填料為華譜粒徑為10μm。
7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟D梯度洗脫過程以甲醇-純化水為流動相。
8.根據權利要求7所述的制備方法
9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述洗脫梯度條件如下：
10.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟D所述紫外檢測為雙波長檢測，連翹苷檢測波長為277nm，連翹酯苷A的檢測波長為330nm。
...【技術特征摘要】
1.一種同時制備高純度連翹苷和連翹酯苷a的方法，其特征在于，包括下列步驟：
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟a取連翹飲片先用8-10倍量70％-90％乙醇提取2次，再用4-6倍量40％-60％乙醇提取2次。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟a取連翹飲片先用8倍量85％乙醇提取2次，再用6倍量50％乙醇提取2次。
4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟b中，濃縮液ⅰ加1倍體積的30-60℃石油醚萃取2次；濃縮液ⅱ加1倍體積的正丁醇萃取2次。
5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟d所述的高效液相色譜制備柱為dac-hb50動態...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張貴民，王立友，郝大偉，
申請(專利權)人：魯南制藥集團股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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