【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及特異性抑制tmprss6基因的表達。
技術介紹
1、tmprss6(跨膜蛋白酶，絲氨酸6)編碼一種ii型絲氨酸蛋白酶并且主要在肝臟中表達。tmprss6通過結合并且以蛋白酶解方式降解肝殺菌肽(hepcidin)激活物和造成肝殺菌肽水平下調的bmp輔助受體hjv(血幼素)影響肝臟中的鐵水平。
2、tmprss6由以下組成：一個短n端胞質內尾、一個ii型跨膜結構域、由兩個胞外cub(補體因子c1s/c1r、海膽胚生長因子和bmp(骨形態發生蛋白))結構域組成的莖區域、三個ldlr(a類低密度脂蛋白受體)結構域和c端胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶結構域。在胞外結構域中也存在n-糖基化的共有序列位點并且在胞質內尾區域內存在潛在磷酸化位點。
技術實現思路
1、在此描述了實現rna誘導性沉默復合物(risc)介導的tmprss6基因的rna轉錄物切割的組合物和方法，例如在細胞或哺乳動物中。還描述了用于治療由tmprss6基因表達引起的病理狀況和疾病，例如以鐵過多為特征的病癥(例如，地中海貧血，例如，中間型β-地中海貧血或α-地中海貧血)的組合物和方法。還描述了用于減少或阻止鐵吸收或動員，由此緩解某些病理狀況中鐵過量的組合物和方法。在此所述的方法和組合物對于治療血色素沉著癥(體內鐵堆積)總體上是有用的。
2、如在此使用，術語“irna”指一種物質，含有如在此限定該術語的rna并且經rna誘導的沉默復合物(risc)途徑介導rna轉錄物的靶向切割。在一個實施例中，如在
3、在此表征的組合物中所包括的irna涵蓋具有rna鏈(反義鏈)的雙鏈rna(dsrna)，所述rna鏈(反義鏈)具有長度為30個或更少核苷酸、總體上19-24個核苷酸的與tmprss6基因的mrna轉錄物的至少部分基本上互補的區域。在一個實施例中，該dsrna包含至少15個連續核苷酸的區域。
4、在一個實施例中，抑制tmprss6基因表達的irna包括至少兩個彼此互補的序列。irna包括具有第一序列的有義鏈和具有第二序列的反義鏈。反義鏈包含與編碼tmprss6的mrna的至少部分基本上互補的核苷酸序列，并且這一互補區域是30個或更少個核苷酸和至少15個核苷酸長度。總體上，該irna是19個至24個，例如，19個至21個核苷酸長度。在一些實施例中，irna是從約15至約25個核苷酸長度，并且在其他實施例中，該irna是從約25至約30個核苷酸長度。一旦與表達tmprss6的細胞接觸，則該irna抑制tmprss6基因的表達至少10％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％或至少40％或更多，如通過如在此所述的方法時分析時。在一個實施例中，在穩定的核酸脂質粒子(snalp)中配制tmprss6?irna。
5、在一個實施例中，在此表征的irna包括選自表2、3或4的有義序列的dsrna第一序列和選自表2、3或4的相應反義序列的第二序列。在此表征的irna分子可以包括天然存在的核苷酸或可以包括至少一個修飾的核苷酸，其包括但不局限于2'-o-甲基修飾的核苷酸、具有5'-硫代磷酸酯基的核苷酸團和與膽甾烯基衍生物連接的末端核苷酸。可替代地，修飾的核苷酸可以選自：2'-脫氧-2'-氟修飾的核苷酸、2'-脫氧修飾的核苷酸、鎖定核苷酸、非堿基核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸、磷酰胺酯和包含非天然堿基的核苷酸。總體上，這種修飾的序列將基于所述irna的第一序列，所述一序列選自表2、3或4的有義序列，和第二序列，所述第二序列選自表2、3或4的反義序列。
6、在一個實施例中，在此表征的irna包括tmprss6?dsrna的有義鏈，所述有義鏈具有選自seq?id?no:111、seq?id?no:455、seq?id?no:109、seq?id?no:524、seq?id?no:89、seqid?no:494、seq?id?no:445，seq?id?no:592、seq?id?no:47，和seq?id?no:540的序列；和由選自seq?id?no:112、seq?id?no:456、seq?id?no:110、seq?id?no:525、seq?id?no:90、seqid?no:495、seq?id?no:446、seq?id?no:593、seq?id?no:48和seq?id?no:541的序列組成的反義鏈。
7、在另一個實施例中，將含有靶向tmprss6的dsrna的組合物給予至具有升高的鐵水平(例如，在肝臟中升高的鐵水平)的受試者。可以將具有升高的鐵水平的受試者確定為的受試者who具有升高的血清鐵水平(例如，高于350μg/dl、高于500μg/dl或超過1000μg/dl或更高)、升高的血清鐵蛋白水平，或大于40％、大于45％、大于50％、大于60％或更多的轉鐵蛋白飽和水平。
8、輕度至中度鐵過量由由300-2500μg/l的血清鐵蛋白水平指示，而>2500μg/l的水平與增加的心臟疾病風險相關。已經顯示>1000μg/l的血清鐵蛋白與原發性和繼發性鐵過量中的不良后果相關。絕經前女性中高于200μg/l的血清鐵蛋白水平和男性和絕經后女性中高于300μg/l表示因血色素沉著癥所致的原發性鐵過量，并且高于1000μg/l的鐵蛋白水平一般提示因鐵過量所致的肝損傷。具有高于300μg/l、500μg/l、1000μg/l、1500μg/l、2000μg/l或2500μg/l或更高血清鐵蛋白水平的受試者是接受靶向tmprss6的dsrna治療的候選者。
9、在另一個實施例中，將含有靶向tmprss6的dsrna的組合物給予至具有升高的轉鐵蛋白水平(例如，大于400mg/dl、大于500mg/dl、大于1000mg/dl或更高的轉鐵蛋白水平)的受試者。
10、鐵水平也可以通過tibc(總鐵結合容量)試驗測量。tibc試驗測量如果轉鐵蛋白完全飽和時血液將攜帶的鐵量。由于轉鐵蛋白由肝臟產生，所以tibc可以用來監測者肝功能和營養。具有大于400μg/dl、大于500μg/dl或大于1000μg/dl或更高tibc值的受試者是接受靶向tmprss6的dsrna治療的候選者。
11、在一個實施例中，dsrna的給予降低例如肝臟中的或血清中的鐵水平至少5％，例如，至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、或至少60％或更多。在一些實施例中，與治療前水平相比，將血清鐵蛋白水平、血清轉鐵蛋白水平、轉鐵蛋白飽和水平或tibc值中的一種或多種降低至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少40％、至少50％、或至少60％或更多。在另一個實施例中，鐵水平的降低、血清鐵蛋白水平的降低、轉鐵蛋白或轉鐵蛋白飽和本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于抑制TMPRSS6表達的雙鏈核糖核酸(dsRNA)，其中所述dsRNA包含一個有義鏈和一個反義鏈，該反義鏈包含與TMPRSS6轉錄物互補的一個區域，該區域包含與表2、3或4中列出的反義序列之一相差不多于3個核苷酸的至少15個連續核苷酸。
2.如權利要求1所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含至少一個修飾的核苷酸。
3.如權利要求2所述的dsRNA，其中所述修飾的核苷酸的至少一個選自下組，該組由以下各項組成：2'-O-甲基修飾的核苷酸、包含5'-硫代磷酸酯基的核苷酸和與膽甾烯基衍生物或十二烷酸雙癸酰胺基連接的末端核苷酸。
4.如權利要求2所述的dsRNA，其中所述修飾的核苷酸選自下組，該組由以下各項組成：2'-脫氧-2'-氟修飾的核苷酸、2'-脫氧修飾的核苷酸、鎖定核苷酸、非堿基核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸、磷酰胺酯和包含非天然堿基的核苷酸。
5.如權利要求1所述的dsRNA，其中這一互補區域是至少17個核苷酸長度。
6.如權利要求1所述的dsRNA，其中這一互補區域是
7.如權利要求1所述的dsRNA，其中這一互補區域是19個核苷酸長度。
8.如權利要求1所述的dsRNA，其中每個鏈不多于30個核苷酸長度。
9.如權利要求1所述的dsRNA，其中至少一個鏈包含至少1個核苷酸的3'突出端。
10.如權利要求1所述的dsRNA，其中至少一個鏈包含至少2個核苷酸的3'突出端。
...【技術特征摘要】
1.一種用于抑制tmprss6表達的雙鏈核糖核酸(dsrna)，其中所述dsrna包含一個有義鏈和一個反義鏈，該反義鏈包含與tmprss6轉錄物互補的一個區域，該區域包含與表2、3或4中列出的反義序列之一相差不多于3個核苷酸的至少15個連續核苷酸。
2.如權利要求1所述的dsrna，其中所述dsrna包含至少一個修飾的核苷酸。
3.如權利要求2所述的dsrna，其中所述修飾的核苷酸的至少一個選自下組，該組由以下各項組成：2'-o-甲基修飾的核苷酸、包含5'-硫代磷酸酯基的核苷酸和與膽甾烯基衍生物或十二烷酸雙癸酰胺基連接的末端核苷酸。
4.如權利要求2所述的dsrna，其中所述修飾的核苷酸選自下組，該組由以下各項組成：2'-脫氧-2'-氟修飾的核苷酸...
【專利技術屬性】
技術研發人員：D·邦克羅特，布萊恩·貝當古，I·陶德賈斯卡，
申請(專利權)人：阿爾尼拉姆醫藥品有限公司，
類型：發明
國別省市：
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