【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于腸菌類抑制物，尤其是涉及一種抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽及測定工藝。
技術(shù)介紹
1、目前，當(dāng)今全球水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)正快速發(fā)展，高效、低成本和健康可持續(xù)也成為眾多企業(yè)的最高追求。腸道微生物區(qū)系被認(rèn)為是一個重要的器官，在機(jī)體的生長發(fā)育過程中起著不可或缺的作用，例如參與消化和免疫調(diào)節(jié)；腸道菌群的動態(tài)平衡會受到動物飲食的較大影響。但是，從不同種水產(chǎn)動物的研究中不難看出低魚粉飼料無法抑制水產(chǎn)動物腸道中條件致病菌假單胞菌和氣單胞菌的生長。
2、為此，本專利技術(shù)提供一種抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽及測定工藝。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、鑒于現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本專利技術(shù)的目的在于提供一種抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽，抑制水產(chǎn)動物腸道中條件致病菌假單胞菌和氣單胞菌的生長。
2、本專利技術(shù)的目的可通過下列技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：
3、抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽，由以下成分的重量百分比組成：粗蛋白30-40％、粗纖維8-10％、粗脂肪10-15％、酸溶蛋白30-50％、水蘇糖0.1-0.5％、棉子糖0.1-0.5％、ph3.5％-4.5％。
4、作為本專利技術(shù)優(yōu)選的技術(shù)方案，由以下成分的重量百分比組成：包括粗蛋白40％、粗纖維10％、粗脂肪15％、酸溶蛋白30％、水蘇糖0.5％、棉子糖0.5％、ph4％。
5、作為本專利技術(shù)優(yōu)選的技術(shù)方案，生長活性肽是以大豆為發(fā)酵基底物而獲得的淺棕色膏狀物質(zhì)。
6、
7、(1)第一步、喂養(yǎng)：取適量的水產(chǎn)動物分六組養(yǎng)殖桶分別構(gòu)成參照組、對比例、實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3以及實(shí)施例4，在實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3以及實(shí)施例4中添加飼料中不同含量的含有生長活性肽喂養(yǎng)水產(chǎn)動物；
8、(2)第二步、樣品采集及處理：養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，每組試驗(yàn)均經(jīng)過禁食24h，采集完水產(chǎn)動物的血淋巴和肝胰腺樣本后，在參照組、對比例和實(shí)施例1的每個養(yǎng)殖桶中隨機(jī)取等量的水產(chǎn)動物的腸道作為混合樣本，即每組取4管腸道樣本，解剖過程中快速取出水產(chǎn)動物的腸道組織放入凍存管中并在-20℃保存以供后續(xù)測定；
9、(3)第三步、使用土壤dna試劑盒從每組4份腸道混合樣本中直接提取微生物總dna；
10、然后用通用引物338f(5‘-actcctacgggaggcagcag-3’)和806r(5‘-ggactachvgggtwtctaat-3’)通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增微生物16s?rrna基因的v3-v4區(qū)；在對產(chǎn)物進(jìn)行定量、組合和純化后，使用i?l?l?umina?m?i?seq平臺構(gòu)建純化的文庫并測定序列內(nèi)容。
11、作為本專利技術(shù)優(yōu)選的技術(shù)方案，對步驟(3)測序后的原始數(shù)據(jù)通過flash合并；
12、然后使用vsearch檢測并移除嵌合序列以獲得高質(zhì)量的干凈標(biāo)簽；用于將高質(zhì)量的序列聚類成擴(kuò)增子序列變異體(asv)，基于97％的序列相似性水平進(jìn)行生物信息學(xué)分析；根據(jù)核糖體數(shù)據(jù)庫項(xiàng)目，在選擇具有代表性的asv序列并篩選每個asv后，對分類進(jìn)行注釋。
13、作為本專利技術(shù)優(yōu)選的技術(shù)方案，在步驟(3)中采用q?i?i?me測定各樣品腸道微生物群落的α多樣性指數(shù)、觀測物種數(shù)、chao1多樣性指數(shù)、香農(nóng)多樣性指數(shù)；用維恩圖和百分比堆積柱狀圖分別顯示每個樣本共有的和獨(dú)特的門或?qū)僖约懊總€樣本的菌群物種組成；通過主坐標(biāo)分析(pcoa)評價不同組間物種復(fù)雜性的差異；應(yīng)用線性判別分析(lefse)對不同組別的特定類群微生物進(jìn)行鑒定。
14、如上所述，本專利技術(shù)涉及抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽及測定工藝，具有以下有益效果：
15、(1)大豆生物活性肽抑制水產(chǎn)動物腸道中條件致病菌假單胞菌和氣單胞菌的生長，促進(jìn)潛在益生菌生長性能和餌料利用率，促進(jìn)蛋白沉積和脂肪分解，緩解氧化應(yīng)激，增強(qiáng)機(jī)體免疫力。
16、(2)大豆生物活性肽能促進(jìn)腸道內(nèi)豐度增加、抑制假單胞菌生長，進(jìn)而導(dǎo)致肝胰腺sod和gpx活性增加、tg和mda含量減少，肝胰腺抗氧化水平增加，從而緩解氧化應(yīng)激。
17、下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本專利技術(shù)作進(jìn)一步的說明。
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1.抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽，其特征在于，由以下成分的重量百分比組成：粗蛋白30-40％、粗纖維8-10％、粗脂肪10-15％、酸溶蛋白30-50％、水蘇糖0.1-0.5％、棉子糖0.1-0.5％、pH3.5％-4.5％。
2.如權(quán)利要求1所述的抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽，其特征在于，由以下成分的重量百分比組成：包括粗蛋白40％、粗纖維10％、粗脂肪15％、酸溶蛋白30％、水蘇糖0.5％、棉子糖0.5％、pH4％。
3.如權(quán)利要求1所述的抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽，其特征在于，生長活性肽是以大豆為發(fā)酵基底物而獲得的淺棕色膏狀物質(zhì)。
4.應(yīng)用于權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽的測定工藝，其特征在于，包括以下步驟
5.如權(quán)利要求4所述的測定工藝，其特征在于：對步驟(3)測序后的原始數(shù)據(jù)通過FLASH合并；
6.如權(quán)利要求4所述的測定工藝，其特征在于：在步驟(3)中采用QIIME測定各樣品腸道微生物群落的α多樣性指數(shù)率、觀測物種數(shù)、Chao1多樣性指數(shù)、香農(nóng)多樣性指數(shù)
...【技術(shù)特征摘要】
1.抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽，其特征在于，由以下成分的重量百分比組成：粗蛋白30-40％、粗纖維8-10％、粗脂肪10-15％、酸溶蛋白30-50％、水蘇糖0.1-0.5％、棉子糖0.1-0.5％、ph3.5％-4.5％。
2.如權(quán)利要求1所述的抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽，其特征在于，由以下成分的重量百分比組成：包括粗蛋白40％、粗纖維10％、粗脂肪15％、酸溶蛋白30％、水蘇糖0.5％、棉子糖0.5％、ph4％。
3.如權(quán)利要求1所述的抑制蝦腸道胞菌和氣單胞菌的生長活性肽，其特征在于，生長活性肽是以大豆為發(fā)酵基底物而獲得的淺棕色膏狀物質(zhì)。
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：胡賀，劉茂，
申請(專利權(quán))人：江蘇福潤德科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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