【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物，特別涉及一種針對人lgr4的單克隆抗體的應用。
技術介紹
1、腫瘤對化療藥物產生耐受性是當今腫瘤治療的一大挑戰，也是臨床治療效果不佳甚至最終導致腫瘤治療失敗的根本原因。在眾多實驗室及研究者的不斷努力下，新的化療藥和治療方法被不斷開發或設計出來，但腫瘤細胞對化療藥耐藥仍然是一個尚未被攻克的棘手難題。
2、在臨床治療的過程中，多數腫瘤在化療初期可以取得好的治療效果，腫瘤增長受到抑制、體積開始減小。然而隨著治療的推進，化療效果變差，甚至部分腫瘤會復發，復發的腫瘤對藥物不敏感。更為嚴峻的是，這種獲得性耐藥通常表現為多藥耐藥，即對不同類型的藥物均產生抗性，使得腫瘤病人面臨無藥可治的困境，是腫瘤治療失敗和病人致死的主要原因。據統計，癌癥死亡患者中有超過90％以上存在耐藥現象。
3、耐藥的主要原因就是化療后殘存的腫瘤細胞對化療藥物產生抗性，導致對藥物的敏感度降低?；熕幬镌谠斐纱罅堪┘毎劳龅耐瑫r，引起部分癌細胞內部wnt/β-catenin信號通路過度激活，從而引起該通路下游促進細胞存活的基因高度表達，使腫瘤細胞抵抗鐵死亡、凋亡、壞死等多種死亡形式。因此針對腫瘤耐藥機制的研究以及針對耐藥機制開發相應的抗腫瘤增效藥物，對于解決腫瘤耐藥以及腫瘤治療后復發極為重要。
4、腫瘤耐藥性的機制十分復雜，目前已知多藥耐藥蛋白abcb1、abcg2等分子的高表達、原癌基因突變和細胞死亡逃逸等參與腫瘤耐藥。根據專利技術人前期研究和其他文獻報道，lgr4(又名gpr48)，參與調控腫瘤干細胞的生長，主要表
技術實現思路
1、本專利技術所要解決的技術問題是如何針對腫瘤耐藥機制開發相應的抗腫瘤增效藥物，解決腫瘤耐藥以及腫瘤治療后復發。
2、為了解決以上技術問題，本專利技術首先提供了一種具有抑制腫瘤細胞活性或抗腫瘤活性的藥物組合物。
3、本專利技術提供的具有抑制腫瘤細胞活性或抗腫瘤活性的藥物組合物的活性成分含有抗體和抗腫瘤藥物，所述抗體為單克隆抗體或其抗原結合片段，所述單克隆抗體或其抗原結合片段包括重鏈可變區和輕鏈可變區；所述重鏈可變區包括三個互補決定區hcdr1、hcdr2和hcdr3；所述輕鏈可變區包括三個互補決定區lcdr1、lcdr2和lcdr3；
4、所述hcdr1的氨基酸序列為序列2的第26-33位，
5、所述hcdr2的氨基酸序列為序列2的第51-60位，
6、所述hcdr3的氨基酸序列為序列2的第99-108位，
7、所述lcdr1的氨基酸序列為序列1的第27-32位，
8、所述lcdr2的氨基酸序列為序列1的第50-52位，
9、所述lcdr3的氨基酸序列為序列1的第89-97位；
10、所述抗腫瘤藥物為化學藥。
11、互補決定區的序列根據kabat定義。在本專利技術保護范圍內，所述抗體可為全長抗體、fab片段、f(ab’)2片段或單鏈fv片段等各種形式。
12、術語“抗原結合片段”是指抗體的抗原結合片段，其通常包括至少部分母體抗體(parental?antibody)的抗原結合區或可變區(例如一個或多個cdr)。上述抗原結合片段保留母體抗體的至少某些結合特異性。通常，當基于摩爾來表示活性時，上述抗原結合片段保留至少10％的母體結合活性。具體地，上述抗原結合片段保留至少20％、50％、70％、80％、90％、95％或100％或更多的母體抗體對靶標的結合親和力。
13、術語“fab片段”是由重鏈fd和完整輕鏈通過二硫鍵結合而成的異二聚體，僅含一個抗原結合位點。上述重鏈fd指fab中約1/2的h鏈部分(約含225個氨基酸殘基，包括vh、ch1和部分鉸鏈區)。
14、術語“fv片段”是指可分別構建含有vh和vl基因的載體，共轉染細胞，使之分別表達，再組裝成功能性fv抗體；也可在載體中的vh和vl之間設置終止密碼，分別表達兩個小分子蛋白片段，再通過非共價鍵結合而形成fv抗體(fv片段)。
15、術語“fab′片段”含有一條輕鏈和包含vh結構域和ch1結構域以及ch1和ch2結構域之間區域的一條重鏈的部分，由此可在兩個fab′片段的兩條重鏈之間形成鏈間二硫鍵以形成f(ab′)2分子。
16、術語“f(ab′)2片段”含有兩條輕鏈和兩條包含ch1和ch2結構域之間的恒定區的部分的重鏈，由此在兩條重鏈間形成鏈間二硫鍵。因此，f(ab′)2片段由通過兩條重鏈間的二硫鍵保持在一起的兩個fab′片段組成。
17、術語“單鏈抗體(scfv)”是指由輕鏈可變區和重鏈可變區連接得到的多肽。該多肽能自發折疊成天然構像，保持fv的特異性和親和力。
18、上述藥物組合物中，所述輕鏈可變區的氨基酸序列為seq?id?no.1，或者與seq?idno.1具有至少90％的一致性；
19、和/或所述重鏈可變區的氨基酸序列為seq?id?no.2，或者與seq?id?no.2具有至少90％的一致性。
20、上述藥物組合物中，所述單克隆抗體由小鼠雜交瘤細胞株1h1分泌產生，所述小鼠雜交瘤細胞株1h1在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的登記入冊編號為cgmcc?no.20290。
21、所述單克隆抗體為抗lgr4的單克隆抗體(即實施例中的2-1h1抗體)。
22、上述藥物組合物中，所述化學藥為5-氟尿嘧啶(5-fu)或順鉑或索拉菲尼。
23、上述藥物組合物中，所述腫瘤細胞為結直腸癌腫瘤或三陰乳腺癌細胞。
24、在本專利技術的具體實施方式中，所述腫瘤細胞具體可為結直腸癌細胞p6c。
25、在本專利技術的具體實施方式中，所述腫瘤細胞具體可為乳腺癌細胞mcf-7(htb-22tm)、mda-mb-231(htb-26tm)
26、本專利技術還提供了上述藥物組合物中的抗體在制備增強上述抗腫瘤藥物中的應用。
27、本專利技術還提供了上述藥物組合物在制備具有抗腫瘤的產品中的應用。
28、本專利技術還提供了上述藥物組合物在制備具有抑制腫瘤細胞活性的產品中的應用。
29、上述應用中，所述腫瘤為耐藥腫瘤。
30、上述應用中，所述耐藥可為對化學藥物產生耐藥性。
31、上述應用中，所述化學藥物可為5-氟尿嘧啶(5-fu)或順鉑或索拉菲尼。
32、本專利技術還提供了上述藥物組合物在制備用于抑制腫瘤類器官生長的產品中的應用。
33、上述應用中，所述腫瘤類器官為耐藥性腫瘤類器官。
34、所述腫瘤類器官具體為結直腸癌類器官。
35、所述結直腸癌類器官具體為耐藥性結直腸癌類器官。
36、由本專利技術的研究可知：(1)lgr4單克隆抗體可以增敏化療藥對本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.具有抑制腫瘤細胞活性或抗腫瘤活性的藥物組合物，其特征在于：所述藥物組合物的活性成分含有抗體和抗腫瘤藥物，所述抗體為單克隆抗體或其抗原結合片段，所述單克隆抗體或其抗原結合片段包括重鏈可變區和輕鏈可變區；所述重鏈可變區包括三個互補決定區HCDR1、HCDR2和HCDR3；所述輕鏈可變區包括三個互補決定區LCDR1、LCDR2和LCDR3；
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于：所述輕鏈可變區的氨基酸序列為SEQ?ID?No.1，或者與SEQ?ID?No.1具有至少90％的一致性；和/或所述重鏈可變區的氨基酸序列為SEQ?ID?No.2，或者與SEQ?ID?No.2具有至少90％的一致性。
3.根據權利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于：所述單克隆抗體由小鼠雜交瘤細胞株1H1分泌產生，所述小鼠雜交瘤細胞株1H1在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的登記入冊編號為CGMCC?No.20290。
4.根據權利要求1-3任一所述的藥物組合物，其特征在于：所述化學藥為5-氟尿嘧啶(5-FU)或順鉑或索拉菲尼。
5.根據權
6.權利要求1-5中任一所述的藥物組合物中的抗體在制備增強權利要求1-5任一所述的抗腫瘤藥物中的應用。
7.權利要求1-5中任一所述的藥物組合物在制備具有抗腫瘤的產品中的應用。
8.權利要求1-5中任一所述的藥物組合物在制備具有抑制腫瘤細胞活性的產品中的應用。
9.權利要求1-5中任一所述的藥物組合物在制備用于抑制腫瘤類器官生長的產品中的應用。
10.權利要求9任一所述的應用，其特征在于：所述腫瘤類器官為耐藥性腫瘤類器官。
...【技術特征摘要】
1.具有抑制腫瘤細胞活性或抗腫瘤活性的藥物組合物，其特征在于：所述藥物組合物的活性成分含有抗體和抗腫瘤藥物，所述抗體為單克隆抗體或其抗原結合片段，所述單克隆抗體或其抗原結合片段包括重鏈可變區和輕鏈可變區；所述重鏈可變區包括三個互補決定區hcdr1、hcdr2和hcdr3；所述輕鏈可變區包括三個互補決定區lcdr1、lcdr2和lcdr3；
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于：所述輕鏈可變區的氨基酸序列為seq?id?no.1，或者與seq?id?no.1具有至少90％的一致性；和/或所述重鏈可變區的氨基酸序列為seq?id?no.2，或者與seq?id?no.2具有至少90％的一致性。
3.根據權利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于：所述單克隆抗體由小鼠雜交瘤細胞株1h1分泌產生，所述小鼠雜交瘤細胞株1h1在中國微生物菌種保藏管理委員會...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳佺，杜蕾，鄭浩，劉金鳴，王珺，張垚垚，李艷君，劉壘，王曉慧，
申請(專利權)人：南開大學，
類型：發明
國別省市：
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