【技術實現步驟摘要】
本專利技術公開了一種顯齒蛇葡萄中有效成分的提取方法與應用，屬于化妝品原料制備。
技術介紹
1、隨著經濟的發展，人們更加注重健康，崇尚綠色生活，天然產物的開發利用越來越受到人們的青睞。
2、顯齒蛇葡萄別名藤茶、茅巖莓茶，是一種野生木質藤本植物，藥理研究證實，顯齒蛇葡萄中的有效成分具有抗氧化作用、護肝作用、調節血脂作用、輔助降血糖作用、抗菌消炎作用、調節免疫作用等。顯齒蛇葡萄的有效成分包括蛋白質、氨基酸、多糖和黃酮類物質等。現有的顯齒蛇葡萄的有效成分的提取方法多只注重黃酮類物質特別是二氫楊梅素的提取，如中國專利申請公開的“一種從顯齒蛇葡萄中提取高含量二氫楊梅素的工藝方法”(cn102875510a)，其采用水提取、濃縮、冷卻結晶、溶劑溶解除雜、脫色、再濃縮、結晶、重結晶、真空干燥等步驟。其只提取和純化二氫楊梅素，沒有考慮提取多糖，而中國專利申請公開的“中國專利申請公開的“一種從顯齒蛇葡萄中提取高含量二氫楊梅素的工藝方法”(cn108070039b)，其將顯齒蛇葡萄莖葉加入去離子水，先用超聲波提取，然后用酶水解提取，離心分離；將分離液濃縮固形物含量大于或等于20-30％；將濃縮液加入濃度≧95％乙醇，然后調節體系乙醇濃度為75-80％，攪拌10-20min后靜置2-3小時，離心分離，將分離物干燥即得顯齒蛇葡萄多糖；將離心液回收乙醇，干燥可顯齒蛇葡萄黃酮類提取物。雖然可同時提取到顯齒蛇葡萄多糖和黃酮，但是有效成分中的蛋白質和氨基酸仍舊被浪費掉了。
3、鑒于上述問題，開發一種簡單環保、工藝穩定且適合工業化大規模生產
技術實現思路
1、本專利技術的目的是為了克服上述已有技術缺陷，提供簡單環保、工藝穩定且適合工業化大規模生產的提取方法對顯齒蛇葡萄葉進行處理，提取出顯齒蛇葡萄葉中更多的有效成分的顯齒蛇葡萄提取方法。
2、為實現上述目的，本專利技術的技術方案如下：
3、一種顯齒蛇葡萄中有效成分的提取方法，包括以下步驟：
4、s1、初提
5、將顯齒蛇葡萄葉干燥至恒重，顯齒蛇葡萄葉與含水醇混合，置于高壓脈沖電場中在0～5℃條件下進行低溫醇提，壓濾，得到第一濾液和第一濾渣，所述高壓脈沖電場的強度為15～25kv/cm，第一濾渣按照與提取溶劑混合，得到第二濾液和第二濾渣，合并第一濾液和第二濾液，得到醇提液，第二濾渣加去離子水進行水回流提取，壓濾，得到第三濾液和第三濾渣，第三濾渣按照與去離子水混合，得到第四濾液和第四濾渣，合并第三濾液和第四濾液，得到水提液待用，第四濾渣棄去；
6、s2、水沉和離心
7、將步驟s1得到的醇提液真空減壓去醇，得到濃縮液，在濃縮液中加入去離子水，攪拌靜置后離心，分別收集沉淀和清液；
8、s3、二氫楊梅素精制
9、將步驟s2中沉淀溶解于丙酮中，過濾除去不溶物得到濾液，濾液濃縮得到丙酮濃縮液，之后在丙酮濃縮液中緩慢加入去離子水并在室溫避光條件下放置結晶，結晶完成后，抽濾并用冰水洗滌濾餅至流出液無色，將濾餅干燥粉碎，得到二氫楊梅素；
10、s4、顯齒蛇葡萄多酚純化
11、將步驟s2得到的離心清液和s1中的水提液合并后經超濾膜過濾，收集超濾截留液和超濾透過液，將超濾透過液通過通過聚酰胺柱純化，上樣結束后水洗去除樹脂間隙中的小分子糖等水溶性雜質，水洗結束后用洗脫溶劑對聚酰胺柱進行洗脫，洗脫液經過濃縮、干燥后得到顯齒蛇葡萄多酚；
12、s5、顯齒蛇葡萄多糖純化
13、將s2中所收集的超濾截流液加水稀釋，濃縮液中加入2-乙氧基-6,9-二氨基吖啶乳酸鹽溶液，調節ph，攪拌后充分沉降，離心得到沉淀物和濾液，濾液依次通過陰離子交換樹脂和陽離子交換樹脂后，收集流出液，所得流出液濃縮后加入95％的乙醇至含醇量為75％，沉淀經過濾和95％乙醇頂洗后得到濾餅，濾餅干燥后即為顯齒蛇葡萄多糖；
14、s6、顯齒蛇葡萄蛋白純化
15、將s5中離心所得沉淀物溶解后通過裝有馬鈴薯淀粉的層析柱除去2-乙氧基-6,9-二氨基吖啶乳酸鹽，上樣完成后水洗，合并收集流出液和水洗液后濃縮，濃縮液再進行凝膠柱層析，收集含有蛋白的洗脫段并濃縮，干燥后即為顯齒蛇葡萄蛋白。
16、優選的，所述步驟s1中，干燥的溫度為40-60℃，所述醇提所用乙醇為50-95％的乙醇水(v/v)。
17、優選的，所述步驟s1中，水回流提取的溫度為70-100℃，料液比為1g：1-20ml，時間為30-120min。
18、優選的，所述步驟s2中，在濃縮液中加入去離子水的體積為濃縮液的1-5倍，所述去離子水為常溫去離子水，所述靜置的時間為0.5-3h。
19、優選的，所述步驟s3中，丙酮濃縮液中加入去離子水的終點為液體開始變得渾濁，丙酮濃縮液中加入去離子水至液體開始變渾濁，加熱澄清后放置結晶，濾餅的干燥方式為真空低溫干燥或真空冷凍干燥。
20、優選的，所述步驟s4中，超濾膜的截留分子量為3-10kd，所述超濾膜為有機平板膜、管式膜或中空纖維膜中的一種，過膜壓力為0.2-0.5mpa，所述聚酰胺柱的上柱流速為1-4bv/h，所述洗脫溶劑為濃度為0.5％-10％濃度的尿素水溶液，所述乙醇水洗脫的洗脫體積和洗脫流速分別為2-5bv和2-4bv/h，所述蛋白的干燥方式為噴霧干燥。
21、優選的，所述步驟s5中，截留液用水稀釋后的濃度為10-15brix，所述2-乙氧基-6,9-二氨基吖啶乳酸鹽溶液的濃度為0.1％-5％，所述調節ph為用鹽酸調節ph至6.5-7.5，所述蛋白的干燥方式為真空冷凍干燥。
22、優選的，所述步驟s6中，沉淀物溶解后通過通過馬鈴薯淀粉柱的流速為0.5-2.0bv/h，所述馬鈴薯淀粉柱水洗的洗脫體積和洗脫流速分別為0.5-4bv和1-3bv/h，所述蛋白的干燥方式為真空冷凍干燥，溫度為-50℃～-70℃。
23、本專利技術還公開了一種根據上述任一所述的提取方法所制得的顯齒蛇葡萄中有效成分的應用，所述有效成分應用于非治療性化妝品中，所述非治療性化妝品是以所述的有效成分為活性組分，加上藥學或化妝品常規輔料或輔助成分制備而成的皮膚外用制劑。
24、作為優選，所述非治療性化妝品為化妝水、精華液、膏霜、面膜、啫喱中得一種或多種。
25、與現有技術相比，本專利技術具有的有益效果如下：
26、1.本專利技術采用高壓脈沖電場進行提取，該提取方法效率高，對比傳統的熱回流提取，能大大降低生產蒸汽所消耗的熱能，節約能耗，降低企業生產成本，同時又能減少廢氣排放，有利于可持續發展。
27、2.本專利技術采用高壓脈沖電場進行提取，該提取方法提取溫度低且具有很高的回收率，非常適合熱不穩定的二氫楊梅素的提取，同時提取溫度低能減少顯齒蛇葡萄中色素等無效成分的浸出，方便后續的分離純化，提本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種顯齒蛇葡萄中有效成分的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟S1中，干燥的溫度為40-60℃，所述醇提所用乙醇為50-95％的乙醇水(v/v)。
3.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟S1中，水回流提取的溫度為70-100℃，料液比為1g：1-20mL，時間為30-120min。
4.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟S2中，在濃縮液中加入去離子水的體積為濃縮液的1-5倍，所述去離子水為常溫去離子水，所述靜置的時間為0.5-3h。
5.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟S3中，丙酮濃縮液中加入去離子水的終點為液體開始變得渾濁，丙酮濃縮液中加入去離子水至液體開始變渾濁，加熱澄清后放置結晶，濾餅的干燥方式為真空低溫干燥或真空冷凍干燥。
6.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟S4中，超濾膜的截留分子量為3-10KD，所述超濾膜為有機平板膜、管式膜或中空纖維膜中的一種，過膜壓力為0.2-0.5MPa，所述
7.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟S5中，截留液用水稀釋后的濃度為10-15Brix，所述2-乙氧基-6,9-二氨基吖啶乳酸鹽溶液的濃度為0.1％-5％，所述調節pH為用鹽酸調節pH至6.5-7.5，所述蛋白的干燥方式為真空冷凍干燥。
8.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟S6中，沉淀物溶解后通過通過馬鈴薯淀粉柱的流速為0.5-2.0BV/h，所述馬鈴薯淀粉柱水洗的洗脫體積和洗脫流速分別為0.5-4BV和1-3BV/h，所述蛋白的干燥方式為真空冷凍干燥，溫度為-50℃～-70℃。
9.一種根據權利要求1-8中任一所述的提取方法所制得的顯齒蛇葡萄中有效成分的應用，其特征在于，所述有效成分應用于非治療性化妝品中，所述非治療性化妝品是以所述的有效成分為活性組分，加上藥學或化妝品常規輔料或輔助成分制備而成的皮膚外用制劑。
10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述非治療性化妝品為化妝水、精華液、膏霜、面膜、啫喱中得一種或多種。
...【技術特征摘要】
1.一種顯齒蛇葡萄中有效成分的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟s1中，干燥的溫度為40-60℃，所述醇提所用乙醇為50-95％的乙醇水(v/v)。
3.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟s1中，水回流提取的溫度為70-100℃，料液比為1g：1-20ml，時間為30-120min。
4.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟s2中，在濃縮液中加入去離子水的體積為濃縮液的1-5倍，所述去離子水為常溫去離子水，所述靜置的時間為0.5-3h。
5.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟s3中，丙酮濃縮液中加入去離子水的終點為液體開始變得渾濁，丙酮濃縮液中加入去離子水至液體開始變渾濁，加熱澄清后放置結晶，濾餅的干燥方式為真空低溫干燥或真空冷凍干燥。
6.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步驟s4中，超濾膜的截留分子量為3-10kd，所述超濾膜為有機平板膜、管式膜或中空纖維膜中的一種，過膜壓力為0.2-0.5mpa，所述聚酰胺柱的上柱流速為1-4bv/h，所述洗脫溶劑為濃度為0...
【專利技術屬性】
技術研發人員：范斌，張興琪，高標，趙笑笑，龐可亮，蘇瀟雨，
申請(專利權)人：廣東芭薇生物科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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