【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于醫療實驗，具體為補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法。
技術介紹
1、隨著經濟條件的提升和生活理念的轉變，人們健康投資和主動就醫的觀念和行為不斷地加強，這導致我國每年的手術數量也在不斷的上升，術后傷口愈合、體質恢復的問題愈專利技術顯，常規手術流程如麻醉、去除病變組織、縫合等，以及帶來的疼痛創傷等應激因素，對患者原本衰弱的呼吸、循環、代謝、免疫等諸多系統功能產生進一步的不良影響，在惡性腫瘤患者中，高齡患者合并有糖尿病、高血壓、冠心病、copd等多器官疾病，其免疫功能、營養狀態等方面都不理想，由于患者體質虛弱，術后傷口愈合不良、感染、抗生素耐藥的現象仍然是我們臨床所普遍面臨的難題，這增加了術后并發癥的發生率，延長住院周期，對醫院、個體家庭和社會都造成了負擔，對此，我們提出了補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法。
技術實現思路
1、針對現有技術的不足，本專利技術提供了補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，以解決以上技術問題。
2、為實現上述目的，本專利技術提供如下技術方案：補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，評估步驟為：
3、s1、使用苦寒瀉下法建立脾氣虛動物模型，準備雄性大鼠隨機分為空白組與脾氣虛組；
4、s2、脾氣虛組使用高乳糖飼料喂養合并灌服生大黃，連續進行灌胃，空白組常規進食與飲水，采用隨機數字表法將脾氣虛組分為模型組、陽性組、補中托毒劑低劑量組、補中托毒劑中劑量組、補中托毒劑高劑量組；
5、
6、s4、對大鼠背部剪毛，脫毛膏脫毛，除空白組外其余組進行全層皮膚切除術，觀察大鼠呼吸平穩規律后將其放回代謝籠獨立飼養，并對肌肉注射青霉素預防感染；
7、s5、將補中托毒劑的低、中、高劑量組分別按體表面積折算，灌胃藥液，連續給藥至大鼠處死前，空白組和模型組大鼠給予等體積蒸餾水，陽性組大鼠灌胃等效劑量的康復新液并外用，末次灌胃處死大鼠；
8、s6、觀察大鼠一般狀態包括精神狀態，毛色，活動靈敏度與便形便質，每天稱量動物體重、進食量和飲水量；
9、s7、對處死后的大鼠皮膚組織進行檢測，檢測ang1與tie2光密度值；
10、s8、整理分析實驗的數據。
11、優選的，s1步驟中脾氣虛動物模型建立步驟為：
12、a1、選擇成年大鼠或小鼠作為實驗動物；
13、a2、通過使用苦寒瀉下法誘導動物脾氣虛證，定量給動物灌胃苦寒藥物，模擬出中醫中苦寒藥物對脾胃的損害，導致脾氣虛弱；
14、a3、在灌胃苦寒藥物的同時或之后，觀察動物的體重、食量、大便、活動與皮毛變化情況，以及生化指標血漿總蛋白與白蛋白的改變。
15、優選的，苦寒瀉下法操作步驟通過預先準備苦寒瀉下的藥物，將藥物溶解在溶液中，通過管道將溶液灌入動物的胃部，并記錄動物的各種指標數據，并進行統計分析，灌胃的藥物為大黃水，大黃水采用常規煎煮方式，濃縮至濃度為0.4g/ml，放置在4℃下保存備用，在臨用前搖勻，常規煎煮方式即將中藥采用中火熬煮的方式進行煎煮。
16、優選的，s2步驟中隨機數字表法利用隨機數字表抽取樣本，步驟為首先明確研究的總體和需要抽取的樣本數量，將總體中的每一個個體進行編號，確保每個編號是唯一的，并且編號的位數一致，選擇一個隨機數字表，包含從0到9的隨機數字，在隨機數字表上任意選擇一個數字作為起點，并確定抽樣的順序，按照確定的順序從隨機數字表上逐個抽取數字，對于每個抽取到的數字，檢查其是否對應于總體中的一個有效編號，如果是，則將該編號對應的個體作為樣本單位，進行記錄分析。
17、優選的，s3步驟中補中托毒劑由如下材料制備而成：黃芪30g、黨參15g、當歸10g、陳皮10g、升麻10g、柴胡10g、麩炒白術15g、炙甘草6g、牡丹皮10g、白芷30g、皂角刺15g、蒲公英30g與金銀花18g，中藥材料采用常規煎煮方式，濃縮至濃度為1g/ml后，放置在4℃下保存備用。
18、優選的，s4步驟中手術步驟包括術前禁食12h，采用10％水合氯醛溶液3ml·kg-1腹腔麻醉，俯臥位于大鼠固定板，常規消毒后在背部脊柱旁開1cm且近臀處做全層皮膚切除，剔除脂肪組織。
19、優選的，s5步驟中補中托毒劑的低、中、高劑量分別為5.565g·kg-1、11.13g·kg-1與22.26g·kg-1。
20、優選的，s7步驟中檢測方法通過對處死的大鼠切口處取新鮮肌肉組織，用4％的多聚甲醛固定液固定24h以上，將組織修整，依次進行脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、裱片與烤片，將石蠟切片放入二甲苯、從高濃度到低濃度的酒精與水中進行脫蠟處理，脫蠟完成后將其放入檸檬酸抗原修復緩沖液的修復盒中于微波爐內進行抗原修復，洗滌后置入3％雙氧水溶液室溫避光孵育以阻斷內源性過氧化物酶，洗滌完后用3％牛血清白蛋白進行血清封閉，封閉完成后滴加稀釋后的一抗溶液4℃孵育過夜，次日洗滌完成并滴加與一抗相應種屬的辣根過氧化物酶標記的二抗室溫孵育，再次洗滌滴加dab顯色液，顯微鏡下控制顯色時間并用水沖洗終止顯色，蘇木素復染、分化、返藍復染細胞核與脫蠟順序相反的流程進行脫水透明，中性樹膠封片，使用顯微鏡鏡檢，圖像采集分析，各切片隨機取3個視野，觀察各指標累積光密度，以累積光密度表示該指標含量；ang1與tie2光密度值用以量化在大鼠中特定蛋白質或分子的表達水平。
21、優選的，s8步驟中數據應用graphpad?prism8.0軟件進行繪圖及使用spss26.0進行統計分析，數據以x±s表示，用成組設計的兩樣本均數的t檢驗進行分析，通過回歸分析法對數據進行分析，對大量統計數據進行數學處理，并確定數據之間的相關關系，來得出分析結果，分析結果補中托毒劑對傷口愈合具有影響。
22、優選的，graphpad?prism8.0為繪圖軟件，集成了數據分析、圖形繪制與曲線擬合功能，spss26.0為統計分析軟件，具有數據管理、統計分析、預測建模與數據可視化功能，x±s表示為樣本平均值的加減標準差，x表示為樣本的平均值，s表示為標準差；t檢驗基于樣本均值與總體均值之間的差異與樣本大小和樣本標準差的影響。
23、與現有技術相比，本專利技術的有益效果如下：
24、本專利技術通過對實驗用大鼠，隨機分為正常對照組與創傷后脾虛證模型組后，進行創傷手術并采用補中托毒劑干預，觀測各組大鼠的體重、免疫力檢測指標和切口愈合檢測指標，通過對照用藥后觀察相關指標，判斷出補中托毒劑對術后大鼠體質恢復及傷口愈合的影響，在判斷過程中，設計了系統的實驗方案，針對大鼠提出了體重、免疫力檢測指標和肌肉恢復檢測指標，全面的描述大鼠術后的恢復情況，故在指標測量結果的分析基礎上，為補中托毒劑對術后傷口愈合影響提供有力的說服力與判斷依據，在食管癌開胸術后采用中醫補中托毒劑輔助常規換藥，可縮短切口干燥時間、肉芽形成時間、切口愈合時間，有助于更好的促進患者手術切口愈合。<本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于，評估步驟為：
2.根據權利要求1所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于，S1步驟中脾氣虛動物模型建立步驟為：
3.根據權利要求2所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于：苦寒瀉下法操作步驟通過預先準備苦寒瀉下的藥物，將藥物溶解在溶液中，通過管道將溶液灌入動物的胃部，并記錄動物的各種指標數據，并進行統計分析，灌胃的藥物為大黃水，大黃水采用常規煎煮方式，濃縮至濃度為0.4g/ml，放置在4℃下保存備用，在臨用前搖勻，常規煎煮方式即將中藥采用中火熬煮的方式進行煎煮。
4.根據權利要求1所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于：S2步驟中隨機數字表法利用隨機數字表抽取樣本，步驟為首先明確研究的總體和需要抽取的樣本數量，將總體中的每一個個體進行編號，確保每個編號是唯一的，并且編號的位數一致，選擇一個隨機數字表，包含從0到9的隨機數字，在隨機數字表上任意選擇一個數字作為起點，并確定抽樣的順序，按照確定的順序從隨機數字表上逐個抽取數字，對
5.根據權利要求1所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于，S3步驟中補中托毒劑由如下材料制備而成：黃芪30g、黨參15g、當歸10g、陳皮10g、升麻10g、柴胡10g、麩炒白術15g、炙甘草6g、牡丹皮10g、白芷30g、皂角刺15g、蒲公英30g與金銀花18g，中藥材料采用常規煎煮方式，濃縮至濃度為1g/ml后，放置在4℃下保存備用。
6.根據權利要求1所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于：S4步驟中手術步驟包括術前禁食12h，采用10％水合氯醛溶液3ml·kg-1腹腔麻醉，俯臥位于大鼠固定板，常規消毒后在背部脊柱旁開1cm且近臀處做全層皮膚切除，剔除脂肪組織。
7.根據權利要求1所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于：S5步驟中補中托毒劑的低、中、高劑量分別為5.565g·kg-1、11.13g·kg-1與22.26g·kg-1。
8.根據權利要求1所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于：S7步驟中檢測方法通過對處死的大鼠切口處取新鮮肌肉組織，用4％的多聚甲醛固定液固定24h以上，將組織修整，依次進行脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、裱片與烤片，將石蠟切片放入二甲苯、從高濃度到低濃度的酒精與水中進行脫蠟處理，脫蠟完成后將其放入檸檬酸抗原修復緩沖液的修復盒中于微波爐內進行抗原修復，洗滌后置入3％雙氧水溶液室溫避光孵育以阻斷內源性過氧化物酶，洗滌完后用3％牛血清白蛋白進行血清封閉，封閉完成后滴加稀釋后的一抗溶液4℃孵育過夜，次日洗滌完成并滴加與一抗相應種屬的辣根過氧化物酶標記的二抗室溫孵育，再次洗滌滴加DAB顯色液，顯微鏡下控制顯色時間并用水沖洗終止顯色，蘇木素復染、分化、返藍復染細胞核與脫蠟順序相反的流程進行脫水透明，中性樹膠封片，使用顯微鏡鏡檢，圖像采集分析，各切片隨機取3個視野，觀察各指標累積光密度，以累積光密度表示該指標含量；Ang1與Tie2光密度值用以量化在大鼠中特定蛋白質或分子的表達水平。
9.根據權利要求1所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于：S8步驟中數據應用GraphPad?Prism8.0軟件進行繪圖及使用SPSS26.0進行統計分析，數據以x±S表示，用成組設計的兩樣本均數的t檢驗進行分析，通過回歸分析法對數據進行分析，對大量統計數據進行數學處理，并確定數據之間的相關關系，來得出分析結果，分析結果補中托毒劑對傷口愈合具有影響。
10.根據權利要求9所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于：GraphPad?Prism8.0為繪圖軟件，集成了數據分析、圖形繪制與曲線擬合功能，SPSS26.0為統計分析軟件，具有數據管理、統計分析、預測建模與數據可視化功能，x±S表示為樣本平均值的加減標準差，x表示為樣本的平均值，S表示為標準差；t檢驗基于樣本均值與總體均值之間的差異與樣本大小和樣本標準差的影響。
...【技術特征摘要】
1.補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于，評估步驟為：
2.根據權利要求1所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于，s1步驟中脾氣虛動物模型建立步驟為：
3.根據權利要求2所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于：苦寒瀉下法操作步驟通過預先準備苦寒瀉下的藥物，將藥物溶解在溶液中，通過管道將溶液灌入動物的胃部，并記錄動物的各種指標數據，并進行統計分析，灌胃的藥物為大黃水，大黃水采用常規煎煮方式，濃縮至濃度為0.4g/ml，放置在4℃下保存備用，在臨用前搖勻，常規煎煮方式即將中藥采用中火熬煮的方式進行煎煮。
4.根據權利要求1所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于：s2步驟中隨機數字表法利用隨機數字表抽取樣本，步驟為首先明確研究的總體和需要抽取的樣本數量，將總體中的每一個個體進行編號，確保每個編號是唯一的，并且編號的位數一致，選擇一個隨機數字表，包含從0到9的隨機數字，在隨機數字表上任意選擇一個數字作為起點，并確定抽樣的順序，按照確定的順序從隨機數字表上逐個抽取數字，對于每個抽取到的數字，檢查其是否對應于總體中的一個有效編號，如果是，則將該編號對應的個體作為樣本單位，進行記錄分析。
5.根據權利要求1所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于，s3步驟中補中托毒劑由如下材料制備而成：黃芪30g、黨參15g、當歸10g、陳皮10g、升麻10g、柴胡10g、麩炒白術15g、炙甘草6g、牡丹皮10g、白芷30g、皂角刺15g、蒲公英30g與金銀花18g，中藥材料采用常規煎煮方式，濃縮至濃度為1g/ml后，放置在4℃下保存備用。
6.根據權利要求1所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其特征在于：s4步驟中手術步驟包括術前禁食12h，采用10％水合氯醛溶液3ml·kg-1腹腔麻醉，俯臥位于大鼠固定板，常規消毒后在背部脊柱旁開1cm且近臀處做全層皮膚切除，剔除脂肪組織。
7.根據權利要求1所述的補中托毒劑對術后傷口愈合促進效果的評估方法，其...
【專利技術屬性】
技術研發人員：石琦，
申請(專利權)人：山西省中醫藥研究院山西省中醫院，
類型：發明
國別省市：
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