【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥，具體地，本專利技術涉及一系列抑制血管緊張素原表達的sirna雙鏈體及其用途。更具體地，本專利技術涉及一系列sirna雙鏈體、sirna-遞送載體綴合物(galnac-sirna)、藥物組合物及其用途。
技術介紹
1、高血壓(hypertension)是一種常見的心血管疾病，可引起心臟、腎臟、大腦和其它器官的損傷，導致殘疾甚至死亡。世界衛生組織(who)估計，全球有10億人患有高血壓。高血壓的主要治療方法包括藥物治療、改變生活方式和手術療法。但很多患者不會得到有效的治療，有的患者還因藥物產生副反應。因此，需要新的、更有效的高血壓治療途徑。
2、目前，高血壓的主要控制的方式是通過降血壓藥進行治療。目前治療高血壓的藥物主要包括以下幾類：(1)利尿劑(diuretics)：利尿劑通過影響腎臟對鈉和水的再吸收來降低血容量和血壓。常用的利尿劑包括袢利尿劑(如速尿)、噻嗪類利尿劑(如氫氯噻嗪)等。(2)acei(angiotensin-converting?enzyme?inhibitors)：acei的作用是抑制raas系統的激活，減少血管緊張素ii的生成，從而降低血壓。常見的acei包括卡托普利、依普利酮等。(3)arb(angiotensin?receptor?blockers)：arb是血管緊張素ii受體拮抗劑，通過阻斷血管緊張素ii與其受體的結合，減少血管收縮作用，達到降壓的效果。常用的arb包括纈沙坦、厄貝沙坦等。(4)ccb(calcium?channel?blockers)：ccb通過阻斷細
3、血管緊張素原(angiotensinogen,agt)是肝臟合成的一種前體蛋白質，是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(raas)的起始物質，參與了高血壓的發生機制。當腎臟血流減少時，腎小球旁細胞會釋放腎素，腎素會將血管緊張素原轉化為血管緊張素i(ang?i)，而血管內皮細胞上的血管緊張素轉化酶(ace)會將血管緊張素i轉化為血管緊張素ii(ang?ii)。血管緊張素ii是一種強有力的血管收縮肽，能促進血管平滑肌細胞收縮，使血管變窄并提高血壓。血管緊張素ii還能夠刺激腎上腺皮質分泌醛固酮，醛固酮會使腎小管增加鈉的再吸收，導致水在體內重新吸收，從而增加血容量和血壓。除此之外，血管緊張素ii還具有多種生理作用，例如刺激交感神經系統，增加心率、心臟收縮力和心輸出量，促進腎臟鈉和水的再吸收，加重心臟肥大和心衰等病變。因此，當raas系統異常激活時，血管緊張素ii的水平會升高，導致血壓升高。此外，raas也參與了腎臟功能的調節，如果長期激活，會引起腎小球硬化和腎臟損害，加重高血壓的發生和發展。因此，抑制agt和血管緊張素ii的形成是治療高血壓的重要策略之一。
4、sirna是一種短rna分子，可靶向性地抑制mrna基因的表達。sirna通過rna干擾機制，與目標基因的mrna相結合并引導rna核酸酶切割相應的mrna分子，從而阻止mrna的翻譯和蛋白質的合成。與其他基因沉默技術相比，sirna技術具有高效、選擇性和可重復性等優點。
5、近年來，靶向agt的sirna藥物作為治療高血壓的新策略備受研究者關注。人體內的agt基因序列已被充分研究，其mrna的結構和功能已被深入了解。因此，通過研究agtmrna序列，可以設計靶向agt的sirna雙鏈體。在體內實驗中，研究者成功地將靶向agt的sirna注射到小鼠體內，結果顯示，該sirna藥物可以顯著降低小鼠的agt?mrna和蛋白質水平，并降低小鼠的血壓。
6、此外，由于sirna具有靶向性和可逆性，因此可以降低治療過程中的副作用，并且可以在治療后恢復病人的正常基因表達水平。sirna技術也可以為藥物設計提供更多的靈活性，并有望成為未來治療高血壓的重要技術手段之一。
7、總之，agt是導致高血壓的重要因素，靶向agt的sirna藥物作為治療高血壓的新策略，具有巨大的潛力。
技術實現思路
1、本專利技術旨在至少在一定程度上解決現有技術中存在的技術問題至少之一。為此，本專利技術提供了一種抑制血管緊張素原表達的sirna雙鏈體、它們與遞送載體的共價綴合物及其用途。本專利技術的sirna可抑制血管緊張素原的表達，有效治療血管緊張素原過多引起的相關疾病。
2、本專利技術提出了一系列sirna雙鏈體。根據本專利技術的實施例，所述sirna雙鏈體包括一條正義鏈和一條反義鏈。所述反義鏈包括與所述正義鏈互補配對的互補性區域。其中，所述正義鏈選自與seq?id?no:1～seq?id?no:111中每一條鏈的核苷酸序列區別不多于2個核苷酸的核苷酸序列，所述反義鏈選自與seq?id?no:112～seq?id?no:222中每一條鏈的核苷酸序列區別不多于2個核苷酸的核苷酸序列。專利技術人經過實驗設計得到上述合適的小干擾rna(sirna)可特異性減少肝細胞合成agt，同時避免脫靶效應，sirna雙鏈體通過形成沉默復合體(rna-induced?silencing?complex，risc)，與靶標基因(agt)的mrna的序列互補配對，從而使agt的mrna降解，抑制agt的表達，使體內血壓降低，繼而有效預防或治療血管緊張素原過多引起的相關疾病，例如高血壓。
3、在本專利技術中，所述“區別不多于2個核苷酸”是指與目標核苷酸序列相比，可存在1或2個核苷酸的差異，該差異包括但不限于核苷酸的缺失、核苷酸的插入(可插入至核苷酸序列的3’-末端、5’-末端、或核苷酸序列任意兩個核苷酸之間)、核苷酸的替換等。
4、根據本專利技術的實施例，上述sirna雙鏈體還可以進一步包括如下附加技術特征的至少之一：
5、根據本專利技術的實施例，所述正義鏈除了包括表1中所示的seq?id?no:1～seq?idno:111中的至少之一，還包括與表1中所示的正義鏈有1個、2個核苷酸區別的連續核苷酸序列。
6、根據本專利技術的實施例，所述反義鏈除了包括表1中所示的seq?id?no:112～seqidno:222中的至少之一，還包括與表1中所示的反義鏈(不包括3’-突出端堿基)有1個、2個核苷酸區別的連續核苷酸序列。
7、示例性地，5’-ucauuagaagaaaagguggga-3’(seq?id?no:195)與5’-ucauuagaagaaaaggugguu-3’，5’-ucauuagaagaaaagguggtt-3’，5’-icauua本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于靶向血管緊張素原(AGT)mRNA?的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的siRNA雙鏈體由一條正義鏈和一條反義鏈通過相關堿基配對組成，其中，所述的正義鏈選自與SEQID?NO:1～SEQ?ID?NO:111中每一條鏈的核苷酸序列區別不多于2個核苷酸的核苷酸序列，所述的反義鏈選自與SEQ?ID?NO:53～SEQ?ID?NO:222中每一條鏈的核苷酸序列區別不多于2個核苷酸的核苷酸序列。
2.如權利要求1所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述正義鏈選自SEQ?ID?NO:1～SEQID?NO:111中的任一核苷酸序列中的至少17個序列連續一致的核苷酸。
3.如權利要求1至2任一項所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的反義鏈選自與SEQID?NO:53～SEQ?ID?NO:222中的任一核苷酸序列中的至少19個序列連續一致的核苷酸。
4.如權利要求1至3任一項所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的正義鏈包含選自以下的雙鏈體的任一正義鏈核苷酸序列中的至少17個序列連續一致的核苷酸：
5.如權利要求1至4任一項所述的
6.如權利要求1至5任一項所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的正義鏈與反義鏈選自以下的任一雙鏈體的核苷酸序列：
7.如權利要求1至6中任一項所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的siRNA雙鏈體包含至少一個修飾的核苷酸。
8.如權利要求1至7中任一項所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的正義鏈基本上所有核苷酸和所述的反義鏈基本上所有核苷酸包含修飾。
9.如權利要求1至7中任一項所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的正義鏈的所有核苷酸和所述反義鏈的所有核苷酸包含修飾。
10.如權利要求7至9中任一項所述的siRNA雙鏈體，其特征為，所述的修飾的核苷酸選自包括選自磷酸二酯鏈接子修飾、核糖基修飾和堿基修飾中的至少之一，或這三類修飾的任意組合的修飾。
11.根據權利要求10所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的含修飾核苷酸中磷酸二酯鏈接子的修飾選自下列通式I中之一：
12.根據權利要求10所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的修飾核苷酸中核糖基修飾選自下列通式II和通式III之一：
13.根據權利要求10所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的含修飾核苷酸中Bx為常規堿基或非常規堿基；所述的常規核苷堿基指腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶和胸腺嘧啶；所述的非常規堿基為除常規核苷堿基之外的非常規嘌呤、嘧啶或含氮雜環堿基，所述的非常規堿基，優選自下列含氮雜環之一：
14.根據權利要求10至13任何一項所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的正義鏈和/或所述的反義鏈中所有核苷酸均為獨立任選修飾的核苷酸。
15.根據權利要求10至14任何一項所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的修飾核苷酸的核糖基修飾各自獨立任選自核糖基的2’或3’-位：2’-O-甲基修飾的核苷酸，3’-O-甲基修飾的核苷酸，2’-氟代修飾的核苷酸，3’-氟代修飾的核苷酸，2’-脫氧核苷酸，3’-脫氧核苷酸；任選地，所述的修飾核苷酸的磷酸二酯鏈接子修飾可獨立為5’-硫代磷酸二酯鏈接子。
16.如權利要求15所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的修飾核苷酸核糖基的修飾為2’-O-甲基或2’-氟代修飾或2’-脫氧修飾。
17.如權利要求16所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的正義鏈5’-末端的核苷酸為起始點的第9號位、第10號位和第11號位為2’-氟代修飾的核苷酸，其余號位為2’-O-甲基修飾的核苷酸；和/或
18.如權利要求15所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述的siRNA反義鏈5’-末端開始的第5號位至第8號位核苷酸核糖基修飾可為3’-甲氧基或3’-氟代修飾或3’-脫氧修飾，優選為第7號位；為此，磷酸二酯鏈接方式為通式(III)所示的2’,5’-磷酸二酯鏈接。
19.根據權利要求10至18任何一項所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述siRNA雙鏈體正義鏈5’-末端的核苷酸起始點第1號位的5’-修飾核苷酸可任選為通式(IV)中之一：
20.根據權利要求10至19任何一項所述的siRNA雙鏈體，其特征在于，所述siRNA雙鏈體反義鏈的5’-末端第1號位核苷酸可任選為5’-未修飾的，或經下列反式乙烯基膦酸酯(VP)修飾的核苷酸：
21.根據權利...
【技術特征摘要】
1.一種用于靶向血管緊張素原(agt)mrna?的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的sirna雙鏈體由一條正義鏈和一條反義鏈通過相關堿基配對組成，其中，所述的正義鏈選自與seqid?no:1～seq?id?no:111中每一條鏈的核苷酸序列區別不多于2個核苷酸的核苷酸序列，所述的反義鏈選自與seq?id?no:53～seq?id?no:222中每一條鏈的核苷酸序列區別不多于2個核苷酸的核苷酸序列。
2.如權利要求1所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述正義鏈選自seq?id?no:1～seqid?no:111中的任一核苷酸序列中的至少17個序列連續一致的核苷酸。
3.如權利要求1至2任一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的反義鏈選自與seqid?no:53～seq?id?no:222中的任一核苷酸序列中的至少19個序列連續一致的核苷酸。
4.如權利要求1至3任一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的正義鏈包含選自以下的雙鏈體的任一正義鏈核苷酸序列中的至少17個序列連續一致的核苷酸：
5.如權利要求1至4任一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的反義鏈包含選自以下的雙鏈體的任一反義鏈核苷酸序列中的至少19個序列連續一致的核苷酸：
6.如權利要求1至5任一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的正義鏈與反義鏈選自以下的任一雙鏈體的核苷酸序列：
7.如權利要求1至6中任一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的sirna雙鏈體包含至少一個修飾的核苷酸。
8.如權利要求1至7中任一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的正義鏈基本上所有核苷酸和所述的反義鏈基本上所有核苷酸包含修飾。
9.如權利要求1至7中任一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的正義鏈的所有核苷酸和所述反義鏈的所有核苷酸包含修飾。
10.如權利要求7至9中任一項所述的sirna雙鏈體，其特征為，所述的修飾的核苷酸選自包括選自磷酸二酯鏈接子修飾、核糖基修飾和堿基修飾中的至少之一，或這三類修飾的任意組合的修飾。
11.根據權利要求10所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的含修飾核苷酸中磷酸二酯鏈接子的修飾選自下列通式i中之一：
12.根據權利要求10所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的修飾核苷酸中核糖基修飾選自下列通式ii和通式iii之一：
13.根據權利要求10所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的含修飾核苷酸中bx為常規堿基或非常規堿基；所述的常規核苷堿基指腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶和胸腺嘧啶；所述的非常規堿基為除常規核苷堿基之外的非常規嘌呤、嘧啶或含氮雜環堿基，所述的非常規堿基，優選自下列含氮雜環之一：
14.根據權利要求10至13任何一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的正義鏈和/或所述的反義鏈中所有核苷酸均為獨立任選修飾的核苷酸。
15.根據權利要求10至14任何一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的修飾核苷酸的核糖基修飾各自獨立任選自核糖基的2’或3’-位：2’-o-甲基修飾的核苷酸，3’-o-甲基修飾的核苷酸，2’-氟代修飾的核苷酸，3’-氟代修飾的核苷酸，2’-脫氧核苷酸，3’-脫氧核苷酸；任選地，所述的修飾核苷酸的磷酸二酯鏈接子修飾可獨立為5’-硫代磷酸二酯鏈接子。
16.如權利要求15所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的修飾核苷酸核糖基的修飾為2’-o-甲基或2’-氟代修飾或2’-脫氧修飾。
17.如權利要求16所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的正義鏈5’-末端的核苷酸為起始點的第9號位、第10號位和第11號位為2’-氟代修飾的核苷酸，其余號位為2’-o-甲基修飾的核苷酸；和/或
18.如權利要求15所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的sirna反義鏈5’-末端開始的第5號位至第8號位核苷酸核糖基修飾可為3’-甲氧基或3’-氟代修飾或3’-脫氧修飾，優選為第7號位；為此，磷酸二酯鏈接方式為通式(iii)所示的2’,5’-磷酸二酯鏈接。
19.根據權利要求10至18任何一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述sirna雙鏈體正義鏈5’-末端的核苷酸起始點第1號位的5’-修飾核苷酸可任選為通式(iv)中之一：
20.根據權利要求10至19任何一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述sirna雙鏈體反義鏈的5’-末端第1號位核苷酸可任選為5’-未修飾的，或經下列反式乙烯基膦酸酯(vp)修飾的核苷酸：
21.根據權利要求10至20任何一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述sirna雙鏈體正義鏈和反義鏈中包括如下經不同類修飾方式的一組或多組的任選組合：
22.如權利要求1至21中任一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的sirna雙鏈體各鏈的長度獨立地為不超過30個核苷酸。
23.如權利要求22所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的sirna雙鏈的長度為19-23個核苷酸。
24.如權利要求23中所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的sirna雙鏈區長度可為21個核苷酸。
25.如權利要求23所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的sirna雙鏈體至少一條鏈包含至少1個核苷酸的3’-突出端。
26.如權利要求23中所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的sirna雙鏈體至少一條鏈包含具有至少2個核苷酸的3’-突出端。
27.如權利要求1至26中任一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的sirna雙鏈體進一步包含至少一個5’-硫代磷酸二酯或甲基膦酸酯核苷酸連接。
28.如權利要求27中所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的5’-硫代磷酸二酯或甲基膦酸酯核苷酸連接在一條鏈的3’-末端。
29.如權利要求28所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的鏈為反義鏈。
30.如權利要求28所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的鏈為正義鏈。
31.如權利要求27所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的5’-硫代磷酸二酯或甲基膦酸酯核苷酸鏈接在一條鏈的5’-末端。
32.如權利要求31所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的鏈為反義鏈。
33.如權利要求31所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的鏈為正義鏈。
34.如權利要求27所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的5’-硫代磷酸二酯或甲基膦酸酯核苷酸鏈接在一條鏈的5’-末端和3’-末端。
35.如權利要求34所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的鏈為反義鏈。
36.如權利要求1至35中任一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的sirna雙鏈體反義鏈5’-端的第1號位的堿基對為a:u堿基對或a:i堿基對，其中i為肌苷。
37.如權利要求7至36中任一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的sirna反義鏈包含選自以下的雙鏈體的化學修飾的任一反義鏈核苷酸序列：
38.如權利要求7至36中任一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的sirna雙鏈體正義鏈包含選自以下的雙鏈體的化學修飾的任一正義鏈核苷酸序列：
39.如權利要求7至36中任一項所述的sirna雙鏈體，其特征在于，所述的sirna反義鏈和該正義鏈包含選自以下的雙鏈體的化學修飾的核苷酸序列：
40.如權利要求7至39中任一項所述的sirna雙鏈體，其...
【專利技術屬性】
技術研發人員：馬利帥，段茂圣，張捷婷，丁彥偉，殷培秀，陳會敏，
申請(專利權)人：納肽得青島生物醫藥有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。