【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及動(dòng)物模型構(gòu)建及應(yīng)用，尤其涉及一種轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建方法及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、衰老是罹患阿爾茨海默病(alzheimer’s?disease，ad)和帕金森病(parkinson’sdisease，pd)等神經(jīng)退行性疾病的主要危險(xiǎn)因素。腦功能會(huì)隨著衰老而逐漸下降，表現(xiàn)為學(xué)習(xí)能力、記憶能力、注意力、決策速度、感官知覺(視覺、聽覺、觸覺、嗅覺和味覺)以及運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性的衰退。隨著年齡的增長，人多方面的認(rèn)知能力都有所下降，包括執(zhí)行能力、工作記憶(特別是任務(wù)轉(zhuǎn)換)和情景記憶。隨著年齡的增長，患神經(jīng)退行性疾病的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)越來越高，其中阿爾茨海默癥(ad)和帕金森病(pd)最為常見。pd的臨床表現(xiàn)包括運(yùn)動(dòng)癥狀如：運(yùn)動(dòng)遲緩、靜止性震顫、肌肉強(qiáng)直以及非運(yùn)動(dòng)癥狀如快速眼動(dòng)睡眠行為障礙、便秘、認(rèn)知能力下降、抑郁、焦慮。目前，pd的具體病因仍不清楚，缺乏有效減緩或阻止帕金森病進(jìn)展的治療方法。因此，人類要想揭開pd發(fā)病的病因，徹底根治pd，首先要建立能模擬人體pd發(fā)病機(jī)制的動(dòng)物模型，開展關(guān)于pd致病機(jī)制和治療方法的相關(guān)研究迫在眉睫。
2、pd領(lǐng)域中依據(jù)病理學(xué)、發(fā)病機(jī)制、運(yùn)動(dòng)和非運(yùn)動(dòng)癥狀等方面特征分類，可供研究人員使用的動(dòng)物模型眾多，然而，對于一個(gè)旨在同時(shí)解決pd多個(gè)方面特征的研究人員而言，動(dòng)物模型的選擇變得尤為重要，有時(shí)需要同時(shí)選擇2-3個(gè)動(dòng)物模型開展相關(guān)研究。帕金森疾病的動(dòng)物模型建立目前主要基于藥理學(xué)、毒素、遺傳和α-突觸核蛋白的模型。pd的藥理學(xué)模型是最早開發(fā)的模型，并在一定程度上促進(jìn)了對癥藥物左旋多巴(l-dopa)的發(fā)現(xiàn)。利血
3、目前，pd遺傳基因動(dòng)物模型包括過表達(dá)基因模型、轉(zhuǎn)基因模型、基因敲除以及基因突變模型等。隨著pd幾種家族性形式的發(fā)現(xiàn)，研究人員建立了通過基因突變模擬pd的動(dòng)物模型。與家族性和散發(fā)性病例有明確聯(lián)系的模型上：α-突觸核蛋白(snca)，富含亮氨酸重復(fù)激酶(lrrk2)和葡糖腦苷脂酶(gba)。然而在這些轉(zhuǎn)基因模型很少重現(xiàn)pd的完整特征,而且往往與人類的情況有很大的不同，且很少觀察到黑質(zhì)、紋狀體等區(qū)域的神經(jīng)損傷。
4、上述模型存在的不足之處極大地限制了其應(yīng)用。本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)更可靠的帕金森病動(dòng)物模型。pd基因動(dòng)物模型應(yīng)該更好地模擬人類pd，具備如下基本特征：可檢測到pd的運(yùn)動(dòng)缺陷，可反映隨年齡發(fā)展出現(xiàn)的選擇性和漸進(jìn)性da能神經(jīng)元損傷，有路易小體的形成，而且pd動(dòng)物模型相應(yīng)還應(yīng)有較短的疾病病程周期，便于經(jīng)濟(jì)快速地進(jìn)行病因病理機(jī)制研究及藥物篩選，揭示pd中da能神經(jīng)元死亡的分子機(jī)制和發(fā)現(xiàn)潛在的治療靶點(diǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的是為了提供一種轉(zhuǎn)基因的小鼠模型的新應(yīng)用，使其可以應(yīng)用于衰老、阿爾茲海默病及帕金森病相關(guān)基礎(chǔ)研究和治療藥物的臨床前篩選。
2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用了如下技術(shù)方案：
3、g-r小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型、阿爾茲海默病小鼠模型及衰老模型中的應(yīng)用，所述g-r小鼠通過crispr靶向c57bl/6小鼠基因組11號染色體h11位點(diǎn)cag-loxp-zsgreen-stop-loxp-tdtomato序列信息的方法構(gòu)建獲得。
4、優(yōu)選的，所述cag-loxp-zsgreen-stop-loxp-tdtomato的完整序列信息如seq?idno：1所示。
5、優(yōu)選的，所述g-r小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型在篩選治療帕金森的藥物和其他干預(yù)手段研究中的應(yīng)用。
6、優(yōu)選的，所述g-r小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型在篩選多巴胺能神經(jīng)元內(nèi)存活、改善帕金森病理學(xué)及行為學(xué)改變研究中的應(yīng)用。
7、優(yōu)選的，所述g-r小鼠構(gòu)建方法如下：在zsgreen兩側(cè)埋設(shè)了loxp位點(diǎn)，然后將綠色熒光蛋白zsgreen與紅色熒光蛋白tdtomato相結(jié)合，同時(shí)敲入到鼠源的h11基因位點(diǎn)。
8、優(yōu)選的，所述g-r小鼠在示蹤特異性cre表達(dá)位置中的應(yīng)用。
9、本申請通過行為學(xué)、分子生物學(xué)和病理學(xué)的典型的pd樣改變等具體驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，明確了g-r小鼠在帕金森病、阿爾茲海默病及衰老模型中的應(yīng)用，為帕金森病、阿爾茲海默病的治療及衰老的抑制提供新的研究策略，為進(jìn)一步篩選治療帕金森病、阿爾茲海默病的藥物和其他干預(yù)手段研究提供研究模型；本申請中所采用的轉(zhuǎn)基因小鼠模型可用于進(jìn)一步篩選促進(jìn)多巴胺能神經(jīng)元內(nèi)存活、改善帕金森病病理學(xué)及行為學(xué)改變的研究。也是該技術(shù)在帕金森病基礎(chǔ)研究領(lǐng)域中的創(chuàng)新性應(yīng)用，可為臨床上篩選帕金森病新的治療藥物或干預(yù)手段提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具有潛在臨床應(yīng)用價(jià)值。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.G-R小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型、阿爾茲海默病小鼠模型及衰老模型中的應(yīng)用，其特征在于：所述G-R小鼠通過CRISPR靶向C57BL/6小鼠基因組11號染色體H11位點(diǎn)CAG-LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato序列信息的方法構(gòu)建獲得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的G-R小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型、阿爾茲海默病小鼠模型及衰老模型中的應(yīng)用，其特征在于：所述CAG-LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato的完整序列信息如SEQ?ID?NO：1所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的G-R小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型、阿爾茲海默病小鼠模型及衰老模型中的應(yīng)用，其特征在于：所述G-R小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型在篩選治療帕金森的藥物和其他干預(yù)手段研究中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的G-R小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型、阿爾茲海默病小鼠模型及衰老模型中的應(yīng)用，其特征在于：所述G-R小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型在篩選多巴胺能神經(jīng)元內(nèi)存活、改善帕金森病理學(xué)及行為學(xué)改變研究中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的G-R小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型、阿爾茲海默病小鼠模型及衰老模型中的應(yīng)用，其特征在于：所述G-R小鼠在示蹤特異性Cre表達(dá)位置中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.g-r小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型、阿爾茲海默病小鼠模型及衰老模型中的應(yīng)用，其特征在于：所述g-r小鼠通過crispr靶向c57bl/6小鼠基因組11號染色體h11位點(diǎn)cag-loxp-zsgreen-stop-loxp-tdtomato序列信息的方法構(gòu)建獲得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的g-r小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型、阿爾茲海默病小鼠模型及衰老模型中的應(yīng)用，其特征在于：所述cag-loxp-zsgreen-stop-loxp-tdtomato的完整序列信息如seq?id?no：1所示。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的g-r小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型、阿爾茲海默病小鼠模型及衰老模型中的應(yīng)用，其特征在于：所述g-r小鼠作為轉(zhuǎn)基因帕金森小鼠模型在篩選治療帕金森的藥物和其他干預(yù)手段...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：薛成斌，朱慧，穆黎，王穎，孫秋文，曹茂紅，
申請(專利權(quán))人：南通大學(xué)附屬醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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