【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種非靶向巨噬細(xì)胞，涉及生物醫(yī)藥，具體涉及一種含有包裹mms6?mrna的脂質(zhì)納米顆粒的非靶向巨噬細(xì)胞及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、脊髓損傷是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的急性創(chuàng)傷性疾病，由直接或間接施加于脊髓的外力引起，并導(dǎo)致?lián)p傷部位的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在幾分鐘到幾小時(shí)內(nèi)死亡。細(xì)胞死亡之后的延遲性、繼發(fā)性損傷階段，表現(xiàn)為持續(xù)存在的神經(jīng)炎癥反應(yīng)，以免疫細(xì)胞激活和炎性細(xì)胞因子釋放為特征，最終導(dǎo)致永久性的神經(jīng)功能缺損。
2、研究如何根據(jù)sci(spinal?cord?injury)局部損傷免疫微環(huán)境改變的規(guī)律，通過提高具有抗炎作用的巨噬細(xì)胞的功能，提高sci的修復(fù)效應(yīng)，具有重要理論探索意義和潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。sci后繼發(fā)性損傷的病理生理過程中，神經(jīng)炎癥反應(yīng)具有神經(jīng)損傷與保護(hù)雙重效果，其中抗炎型巨噬細(xì)胞具有保護(hù)作用，是促進(jìn)修復(fù)的關(guān)鍵。研究發(fā)現(xiàn)sci后巨噬細(xì)胞數(shù)量減少的原因是因?yàn)榘l(fā)生了鐵死亡。
3、為了應(yīng)對(duì)脊髓損傷(sci)后繼發(fā)性損傷的挑戰(zhàn)，先前的研究表明，轉(zhuǎn)染mm6基因的巨噬細(xì)胞移植可以改善sci后的運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)。然而，體外擴(kuò)增病人自身的巨噬細(xì)胞消耗成本高，同時(shí)存在一定的免疫原性。為了解決這些問題，并考慮到臨床應(yīng)用的便捷性，研究者選擇了將mm6基因載體包裹在納米顆粒中進(jìn)行遞送。這一方法的目標(biāo)是通過最佳的治療效果來應(yīng)對(duì)sci后繼發(fā)性損傷的挑戰(zhàn)，這一挑戰(zhàn)在于神經(jīng)炎癥反應(yīng)的持續(xù)存在和永久性的神經(jīng)功能缺損。
4、mrna(messenger?rna)治療已成為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的熱門話題。然而，裸露mrna的
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為了解決
技術(shù)介紹
中的問題，本專利技術(shù)所提供一種含有包裹mms6?mrna的脂質(zhì)納米顆粒的非靶向巨噬細(xì)胞及其應(yīng)用。該mrna能夠生成具有清除胞內(nèi)游離fe2+的磁性納米顆粒，并且通過作用于巨噬細(xì)胞的lnp遞送至體內(nèi)，從而生產(chǎn)出表達(dá)mms6蛋白的巨噬細(xì)胞，進(jìn)一步增強(qiáng)脊髓內(nèi)源性修復(fù)能力。
2、本專利技術(shù)采用的技術(shù)方案是：
3、一、一種非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)mms6?mrna的小鼠模型的構(gòu)建方法：
4、所述的構(gòu)建方法將包裹有編碼mms6?mrna的脂質(zhì)納米顆粒lnp(lipidnanoparticles)通過尾靜脈注射導(dǎo)入到小鼠的巨噬細(xì)胞中，最終構(gòu)建出非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)mms6?mrna的小鼠模型；所述的構(gòu)建方法的具體步驟包括：
5、1)利用含有編碼mms6的mrna和脂質(zhì)納米顆粒lnp的各組分一起通過微流泵獲得包裹mms6?mrna的脂質(zhì)納米顆粒lnp。
6、2)將步驟1)得到的包裹mms6?mrna的脂質(zhì)納米顆粒lnp通過尾靜脈注射導(dǎo)入到小鼠的巨噬細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，從而構(gòu)建出非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)mms6mrna的小鼠模型。
7、所述的脂質(zhì)納米顆粒lnp的各組分包括可電離陽離子脂質(zhì)、膽固醇、中性輔助磷脂和聚乙二醇化peg脂質(zhì)(pegylated?lipids)。
8、所述的含有編碼mms6?mrna的脂質(zhì)納米顆粒lnp具體為具有轉(zhuǎn)染特性的脂質(zhì)納米顆粒lnp載體。
9、二、一種用于構(gòu)建非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)mms6?mrna的小鼠模型的mms6mrna核苷酸序列：
10、所述的mms6?mrna核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
11、三、一種非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)mms6?mrna的小鼠模型：
12、所述的非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)mms6?mrna的小鼠模型由上述所述的構(gòu)建方法構(gòu)建獲得。
13、四、一種非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)mms6?mrna的小鼠模型的應(yīng)用：
14、所述的應(yīng)用包括在制備用于預(yù)防和/或治療由炎癥引起的疾病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
15、所述的應(yīng)用包括在制備具有抑制炎癥反應(yīng)和/或促進(jìn)損傷組織修復(fù)的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
16、所述的應(yīng)用包括在抑制炎癥反應(yīng)和/或促進(jìn)損傷組織修復(fù)的研究中的應(yīng)用。
17、五、一種包裹mms6?mrna的脂質(zhì)納米顆粒lnp：
18、所述的包裹mms6?mrna的脂質(zhì)納米顆粒lnp由上述所述的構(gòu)建方法制備獲得。
19、六、一種包裹mms6?mrna的脂質(zhì)納米顆粒lnp的應(yīng)用：
20、所述的應(yīng)用包括在制備用于治療脊髓損傷的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
21、本專利技術(shù)的有益效果是：
22、本專利技術(shù)的含有包裹mms6?mrna的脂質(zhì)納米顆粒的非靶向巨噬細(xì)胞，具有增強(qiáng)脊髓損傷的功能，并能夠應(yīng)用于脊髓損傷的緩解和治療；本專利技術(shù)技術(shù)立足于臨床需求，構(gòu)建了基于mms6?mrna的lnp轉(zhuǎn)染載體，通過靜脈注射包裹mms6mrna的lnp，降低了成本并簡化了嵌合抗原受體-巨噬細(xì)胞car-m(chimeric?antigen?receptor-macrophage)制備流程，以替代臨床細(xì)胞治療。
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1.一種非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)Mms6mRNA的小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括：所述的構(gòu)建方法將包裹有編碼Mms6mRNA的脂質(zhì)納米顆粒LNP通過尾靜脈注射導(dǎo)入到小鼠的巨噬細(xì)胞中，最終構(gòu)建出非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)Mms6mRNA的小鼠模型；所述的構(gòu)建方法的具體步驟包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)Mms6mRNA的小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述的脂質(zhì)納米顆粒LNP的各組分包括可電離陽離子脂質(zhì)、膽固醇、中性輔助磷脂和聚乙二醇化PEG脂質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)Mms6mRNA的小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述的含有編碼Mms6mRNA的脂質(zhì)納米顆粒LNP具體為具有轉(zhuǎn)染特性的脂質(zhì)納米顆粒LNP載體。
4.一種用于構(gòu)建非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)Mms6mRNA的小鼠模型的Mms6mRNA核苷酸序列，其特征在于：所述的Mms6mRNA核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
5.一種非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)Mms6mRNA的小鼠模型，其特征在于：所述的非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)Mms6mRNA的小鼠模型由權(quán)利要求1-
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)Mms6mRNA的小鼠模型的應(yīng)用，其特征在于：所述的應(yīng)用包括在制備用于預(yù)防和/或治療由炎癥引起的疾病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)Mms6mRNA的小鼠模型的應(yīng)用，其特征在于：所述的應(yīng)用包括在制備具有抑制炎癥反應(yīng)和/或促進(jìn)損傷組織修復(fù)的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)Mms6mRNA的小鼠模型的應(yīng)用，其特征在于：所述的應(yīng)用包括在抑制炎癥反應(yīng)和/或促進(jìn)損傷組織修復(fù)的研究中的應(yīng)用。
9.一種包裹Mms6mRNA的脂質(zhì)納米顆粒LNP，其特征在于：所述的包裹Mms6mRNA的脂質(zhì)納米顆粒LNP由權(quán)利要求1-3任一所述的構(gòu)建方法制備獲得。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的包裹Mms6mRNA的脂質(zhì)納米顆粒LNP的應(yīng)用，其特征在于：所述的應(yīng)用包括在制備用于治療脊髓損傷的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)mms6mrna的小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括：所述的構(gòu)建方法將包裹有編碼mms6mrna的脂質(zhì)納米顆粒lnp通過尾靜脈注射導(dǎo)入到小鼠的巨噬細(xì)胞中，最終構(gòu)建出非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)mms6mrna的小鼠模型；所述的構(gòu)建方法的具體步驟包括：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)mms6mrna的小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述的脂質(zhì)納米顆粒lnp的各組分包括可電離陽離子脂質(zhì)、膽固醇、中性輔助磷脂和聚乙二醇化peg脂質(zhì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)mms6mrna的小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述的含有編碼mms6mrna的脂質(zhì)納米顆粒lnp具體為具有轉(zhuǎn)染特性的脂質(zhì)納米顆粒lnp載體。
4.一種用于構(gòu)建非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)mms6mrna的小鼠模型的mms6mrna核苷酸序列，其特征在于：所述的mms6mrna核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
5.一種非靶向巨噬細(xì)胞表達(dá)mms6mrna的小鼠模型，其特征在于：...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：伏春艷，王琳琳，陳瑩瑩，鐘近潔，沈岳良，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：浙江大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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