【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于微生物肥料與微生物農(nóng)藥領(lǐng)域，涉及一種綠針假單胞菌可濕性粉劑的制備方法，以及制備的可濕性粉劑在番茄苗生長發(fā)育和病害防治中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、假單胞菌廣泛分布于土壤和植物根際，能夠快速產(chǎn)生生物膜，具有營養(yǎng)需求簡單，繁殖快，競爭定殖力強(qiáng)的特點(diǎn)，許多菌株能產(chǎn)生植物生長激素、固氮、溶解無機(jī)磷等能力，并產(chǎn)生水解酶、鐵載體、抗生素等多種活性物質(zhì)，促進(jìn)植物生長的同時(shí)對(duì)植物病害具有較好的防治能力。同時(shí)假單胞菌具有較強(qiáng)的分解代謝和生物轉(zhuǎn)化的能力，以及重金屬耐受等潛能，在植物保護(hù)和環(huán)境修復(fù)等領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價(jià)值。但是，假單胞菌屬于革蘭氏陰性菌，無芽孢休眠體，因而對(duì)高溫、低溫、高鹽、干旱等極端環(huán)境的抵抗能力較差，保藏存活率低。因此，對(duì)農(nóng)業(yè)上具有應(yīng)用價(jià)值的假單胞菌屬菌株進(jìn)行長期保存非常有必要。
2、綠針假單胞菌是植物根際重要的有益生防菌，適應(yīng)性強(qiáng)，可在土壤中快速繁殖，分泌吩嗪類等抗生素類物質(zhì)，具有廣譜抗菌活性，抑制致病菌生長，有效防治鐮刀菌、軟腐病菌、青枯病菌等引起的多種植物病害，并能產(chǎn)生生長素類物質(zhì)，促進(jìn)植物根系生長，同時(shí)還能誘導(dǎo)植株產(chǎn)生系統(tǒng)抗性，是可以開發(fā)應(yīng)用的植物益生菌。可濕性粉劑作為生防菌制劑生產(chǎn)的主要?jiǎng)┬停蓾裥苑蹌┚哂猩a(chǎn)成本低、高產(chǎn)值、高質(zhì)量、高濃度、便于運(yùn)輸和易使用的特點(diǎn)。然而，國內(nèi)登記的假單胞菌可濕性粉劑只有熒光假單胞菌等個(gè)別菌種，尚未見有綠針假單胞菌可濕性粉劑的登記和報(bào)道。針對(duì)以上問題和研究現(xiàn)狀，急需研發(fā)一種具有促生長、防控植物病害等多功能的綠針假單胞菌可濕性粉劑產(chǎn)品。
技術(shù)實(shí)
1、本專利技術(shù)的目的之一是提供一種綠針假單胞菌可濕性粉劑，無毒、安全、使用方便，能夠?qū)崿F(xiàn)綠針假單胞菌的長期保藏并保存活力。
2、本專利技術(shù)的目的之二是提供由上述綠針假單胞菌可濕性粉劑的應(yīng)用。
3、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用的技術(shù)方案如下：
4、第一方面，本專利技術(shù)提供一種綠針假單胞菌可濕性粉劑，由以下質(zhì)量百分比的原料混合組成：綠針假單胞菌csm-70凍干菌粉40-50％、載體30-40％、潤濕劑5-8％、分散劑3-6％、保護(hù)劑1-3％；
5、其中所述綠針假單胞菌csm-70凍干菌粉通過以下步驟制備得到：
6、(1)將綠針假單胞菌csm-70菌株接種到na固體培養(yǎng)基上進(jìn)行活化，所述綠針假單胞菌csm-70為綠針假單胞菌致金色亞種，于2023年4月25日在廣東省微生物菌種保藏中心登記保藏，保藏編號(hào)為gdmcc?no.63397；挑取活化后的綠針假單胞菌csm-70菌體接種至lb液體培養(yǎng)基內(nèi)，28℃、180r/min搖床振蕩培養(yǎng)24h制備種子液；
7、(2)將步驟(1)得到的種子液接種到液體pgy發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并放到恒溫?fù)u床上振蕩，液體發(fā)酵條件為：250ml的容量瓶，培養(yǎng)基裝液量25％-40％、接種量5％-8％、溫度28-32℃、轉(zhuǎn)速180-220r/min，振蕩36-48小時(shí)，即制得活菌數(shù)在109cfu/ml的液體菌劑；
8、(3)將步驟(2)得到的液體菌劑離心后獲得菌體，用0.9％的生理鹽水沖洗菌體，再次離心后，加入無菌水將菌體調(diào)節(jié)至1011cfu/ml，并加入菌種保護(hù)劑，所述菌種保護(hù)劑由以下質(zhì)量百分比的組分組成：脫脂奶粉10-12％，海藻糖5-8％，甘露醇5-7％，其余為水；收集菌懸液，將收集完的菌懸液分裝至菌體凍干管中，放-80℃冰箱中冷藏過夜，送至冷凍干燥機(jī)中，待樣品呈現(xiàn)粉末狀凍干完畢，即得到高濃度凍干菌粉。
9、優(yōu)選的，步驟(2)中所述液體發(fā)酵條件為：250ml的容量瓶，培養(yǎng)基裝液量40％、接種量5％、溫度28℃、轉(zhuǎn)速180r/min。
10、優(yōu)選的，步驟(3)中所述菌種保護(hù)劑由以下質(zhì)量百分比的組分組成：脫脂奶粉10％，海藻糖5％，甘露醇5％，其余為水。
11、優(yōu)選的，步驟(3)中每50ml的發(fā)酵液離心后獲得的菌體加入1ml的菌種保護(hù)劑均勻混合。
12、優(yōu)選的，所述載體為高嶺土，潤濕劑為聚乙二醇，分散劑為聚萘甲醛磺酸鈉鹽，保護(hù)劑為十二烷基硫酸鈉。
13、更優(yōu)選的，所述綠針假單胞菌可濕性粉劑由以下質(zhì)量百分比的原料混合組成：綠針假單胞菌csm-70凍干菌粉54％、高嶺土35％、聚乙二醇6％、聚萘甲醛磺酸鈉鹽4％、十二烷基硫酸鈉1％。
14、第二方面，本專利技術(shù)還提供可濕性粉劑在促進(jìn)番茄植株生長中的應(yīng)用。
15、第三方面，本專利技術(shù)還提供可濕性粉劑在番茄枯萎病防治中的應(yīng)用。
16、進(jìn)一步的，可濕性粉劑應(yīng)用方式為灌根，灌根最佳時(shí)間在番茄移栽后7-10天左右，用水稀釋50-100倍，每株灌根30-50ml稀釋的可濕性粉劑。
17、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具有如下有益效果：
18、1.本專利技術(shù)用液體培養(yǎng)基發(fā)酵制備活菌數(shù)在109cfu/ml的液體菌劑，并篩選出菌種凍干粉保護(hù)劑配方，即脫脂奶粉10％，海藻糖5％，甘露醇5％，制備的高濃度凍干菌粉活菌數(shù)達(dá)1011cfu/ml。之后通過生物相容性測定及國標(biāo)法篩選出適合綠針假單胞菌csm-70的載體和助劑，即載體為高嶺土35％，潤濕劑為聚乙二醇6％，分散劑為聚萘甲醛磺酸鈉鹽4％，保護(hù)劑為十二烷基硫酸鈉1％，其余為菌粉補(bǔ)全至100％，制成了可濕性粉劑。該可濕性粉劑在雜菌率、潤濕時(shí)間、懸浮率、干燥減量、ph值和細(xì)度等質(zhì)量檢測方面均符合農(nóng)藥可濕性粉劑的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，活菌含量達(dá)到3.50×109(cfu/g)，對(duì)盆栽和田間栽培番茄具有顯著的促生效應(yīng)，并對(duì)番茄枯萎病具有較好的防治效果，優(yōu)于化學(xué)農(nóng)藥多菌靈。
19、2.本專利技術(shù)將綠針假單胞菌csm-70制成可濕性粉劑，可以促進(jìn)農(nóng)作物的生長，抑制病原微生物的生長，減少病害發(fā)生，減少化肥農(nóng)藥的使用，且安全綠色無污染，為進(jìn)一步推廣應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。
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1.一種綠針假單胞菌可濕性粉劑，其特征在于，由以下質(zhì)量百分比的原料混合組成：綠針假單胞菌CSM-70凍干菌粉40-50％、載體30-40％、潤濕劑5-8％、分散劑3-6％、保護(hù)劑1-3％；
2.根據(jù)權(quán)利要求1的一種綠針假單胞菌可濕性粉劑，其特征在于，步驟(2)中所述液體發(fā)酵條件為：250mL的容量瓶，培養(yǎng)基裝液量40％、接種量5％、溫度28℃、轉(zhuǎn)速180r/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的一種綠針假單胞菌可濕性粉劑，其特征在于，步驟(3)中所述菌種保護(hù)劑由以下質(zhì)量百分比的組分組成：脫脂奶粉10％，海藻糖5％，甘露醇5％，其余為水。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的一種綠針假單胞菌可濕性粉劑，其特征在于，步驟(3)中每50mL的發(fā)酵液離心后獲得的菌體加入1mL的菌種保護(hù)劑均勻混合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的一種綠針假單胞菌可濕性粉劑，其特征在于，所述載體為高嶺土，潤濕劑為聚乙二醇，分散劑為聚萘甲醛磺酸鈉鹽，保護(hù)劑為十二烷基硫酸鈉。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的一種綠針假單胞菌可濕性粉劑，其特征在于，所述綠針假單胞菌可濕性粉劑由以下質(zhì)量百分比的原料混
7.權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的綠針假單胞菌可濕性粉劑在促進(jìn)番茄植株生長中的應(yīng)用。
8.權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的綠針假單胞菌可濕性粉劑在番茄枯萎病防治中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種綠針假單胞菌可濕性粉劑，其特征在于，由以下質(zhì)量百分比的原料混合組成：綠針假單胞菌csm-70凍干菌粉40-50％、載體30-40％、潤濕劑5-8％、分散劑3-6％、保護(hù)劑1-3％；
2.根據(jù)權(quán)利要求1的一種綠針假單胞菌可濕性粉劑，其特征在于，步驟(2)中所述液體發(fā)酵條件為：250ml的容量瓶，培養(yǎng)基裝液量40％、接種量5％、溫度28℃、轉(zhuǎn)速180r/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的一種綠針假單胞菌可濕性粉劑，其特征在于，步驟(3)中所述菌種保護(hù)劑由以下質(zhì)量百分比的組分組成：脫脂奶粉10％，海藻糖5％，甘露醇5％，其余為水。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的一種綠針假單胞菌可濕性粉劑，其特征在于，步驟(3)中每50...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：秦盛，時(shí)瀟瓊，覃月映，陳樹莓，朱冬桓，邢珂，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：江蘇師范大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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