【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及醫藥，具體涉及一種靈芝三萜類化合物干預糖尿病腎病機制的研究方法。
技術介紹
1、糖尿病腎病(dn)是慢性代謝性疾病的一種罕見并發癥，在全球范圍內造成了重大的公共衛生負擔，而在中國，糖尿病腎病的發病率和患病率在過去十年中急劇上升。據估計，中國糖尿病合并慢性腎臟病(ckd)的患者人數已達2430萬。該病的臨床特征主要是持續蛋白尿和腎功能進行性減退，晚期可發展到需要透析或腎移植等腎臟替代治療。目前對dn病理機制的研究表明，它與多種因素有關：1)多醇途徑的激活、蛋白激酶c的活化以及糖代謝異常導致的糖基化終產物的形成和積累，從而導致疾病早期的腎小球高濾過和晚期的腎小球硬化；2)高血糖引起的高滲透壓導致腎血流量改變、腎小球內皮細胞和上皮細胞受損、angⅱ和tgf-β過度表達。高糖引起的高滲透壓導致腎血流量改變，腎小球內皮細胞和上皮細胞受損，angⅱ和tgf-β過度表達，從而導致細胞外基質增加和腎小球硬化；3)糖尿病患者體內多種炎癥介質導致腎小球損傷，加速腎小球硬化的發展；4)其他因素，包括氧化應激、細胞凋亡、粘附分子等，都參與了dn的發病過程。
2、根據傳統醫學理論，dn屬于“尿濁”、“水腫”、“關格”等范疇。認為其主要病機在于“三焦壅塞”認為其主要病因在于“三焦壅塞，精微代謝失調”。在中醫學體系中，腎不僅與排泄功能有關，還被認為是人體的“先天之精”，與生殖、骨骼、耳等功能密切相關。因此，中醫治療dn的策略是調和陰陽，養護腎陰，通過改善代謝紊亂恢復腎臟健康。
3、靈芝是一種傳統中草藥。在傳統醫學中，靈芝
4、靈芝三萜類化合物通過多種機制顯示出對dn的潛在治療作用。靈芝三萜類化合物可有效調節血糖和血脂水平，減緩糖尿病及其并發癥的進程。研究發現，靈芝三萜類化合物能有效降低大鼠組織中腫瘤壞死因子-α(tnf-α)和白細胞介素-6(il-6)等炎癥因子的水平，同時通過抑制糖皮質激素誘導的磷酸化蛋白激酶b(akt)和核因子-κb(nf-κb)的表達，進一步減輕炎癥反應。此外，研究還發現靈芝三萜類化合物通過抑制氧化應激和減少活性氧(ros)的產生，保護小鼠組織免受損傷。
5、本專利技術利用網絡藥理學和分子對接技術，結合動物實驗，系統地揭示了靈芝三萜類化合物對dn的治療作用及其潛在的作用機制，特別是在抑制炎癥、減輕氧化應激、自噬調節和調控mirna表達等方面的作用機制。這些發現不僅為靈芝三萜類化合物在dn治療領域的應用提供了科學依據，也為后續相關藥物的開發和臨床應用奠定了基礎。此外，本研究采用網絡藥理學與分子對接技術相結合的方法探討中藥成分的作用機制，為今后的中藥研究提供了新的視角和工具。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種靈芝三萜類化合物干預糖尿病腎病機制的研究方法，篩選出akt、mapk、stat3、hsp90等關鍵靶點發揮腎臟保護作用。分子對接結果進一步驗證了靈芝三萜類化合物的有效成分可與核心靶點結合。動物實驗證實，靈芝三萜類提取物能降低糖尿病腎病(dn)小鼠的血糖水平和尿蛋白含量，減輕腎臟損傷和纖維化。
2、為實現上述技術目的，達到上述技術效果，本專利技術是通過以下技術方案實現：
3、一種靈芝三萜類化合物干預糖尿病腎病機制的研究方法，包括以下步驟：
4、s1：篩選活性藥物成分并獲取其靶點；
5、s2：獲取疾病目標和交叉目標，以“糖尿病腎病”為關鍵詞，在genecards、omim和ttd數據庫中搜索目標信息，物種設置為“智人”。以得分(相關性得分)≥8為篩選條件，處理從各數據庫獲得的基因數據，以獲取藥物與疾病之間的交叉靶標信息；
6、s3：構建和分析蛋白質-蛋白質相互作用網絡；
7、s4：go功能和kegg通路富集分析，將交叉靶標導入david數據庫，選擇物種為“人類”，然后從生物過程(bp)、細胞成分(cc)和分子功能(mf)的角度對重疊靶標進行go富集分析。以p≤0.05進行篩選，并使用在線繪圖工具進行可視化分析；
8、s5：從pubchem數據庫中獲取所選物質的二維結構，使用avogadro軟件構建配體的三維框架，然后使用autodocktools-1.5.6軟件添加電荷和顯示可旋轉鍵，并將其導入chimera?1.17.3去除溶劑和配體。使用autodocktools-1.5.6為結構添加氫原子。使用autodock軟件進行分子對接，評估結合能，并記錄每輪的最小結合能作為最終結果；
9、s6：動物分組、建模和給藥，進行尿蛋白檢測、小鼠行為學實驗，基于腎臟病理結果研究相關關鍵靶點蛋白和mrna表達的影響。
10、進一步的，所述步驟s1具體包括：通過查閱相關文獻，確定目前從白靈芝三萜類化合物中分離出來的成分。對于每種活性化合物，通過pubchem獲取其canonical?smiles編號，或使用chemdraw繪制其結構并導出canonical?smiles編號。將這些信息上傳到swissadme平臺。首先，將胃腸道吸收(giabsorption)設為“高”，作為藥物被吸收的條件。接著，設置五個藥物相似性預測規則(lipinski、ghose、veber、egan、muegge)，然后將有效三萜化合物的canonical?smiles編號上傳到swisstargetprediction服務器，并在“智人”條件下進行靶點預測。將概率大于0的預測基因靶點視為潛在藥物靶點。
11、進一步的，所述步驟s3具體包括：將交叉靶標和活性成分導入string?11.0數據庫，將物種限定為人類，以獲得靶蛋白之間的相互作用關系，并計算其度和間性中心度值。獲取白靈芝治療dn關鍵靶點的ppi網絡關系，并將結果保存為tsv格式。將string中的ppi網絡導入cytoscape?3.71，使用cytohubba插件查找度值排名前25和前10的關鍵基因，并將分析結果可視化。
12、進一步的，所述步驟s5中動物分組、建模和給藥具體包括：15只spf級8周齡雄性db/db小鼠(40g±5g)和5只spf級8周齡雄性c57bl/6j小鼠(20g±5g)購自北京華富康生物技術有限公司。小鼠飼養在溫度為(22±2)℃、濕度為(50％±10％)的環境控制室中，實驗期間允許小鼠自由飲水和進食。所有動物實驗均經成都醫學院第一附屬醫院實驗動物福利倫理審查委員會審查批準。
13、選取15只db/db小鼠和5只c57bl/6j小鼠，經過一周的適應性喂養后，隨機分為空白組、模型組、靈芝提取物低劑量組(0.58[g/(kg?d)])和靈芝提取物高劑量組(2.3[g/(kgd)])。每組五只動物，連續給藥8周?？瞻捉M為雄性c57bl/6j小鼠，模本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種靈芝三萜類化合物干預糖尿病腎病機制的研究方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的靈芝三萜類化合物干預糖尿病腎病機制的研究方法，其特征在于：所述步驟S1具體包括：通過查閱相關文獻，確定目前從白靈芝三萜類化合物中分離出來的成分；對于每種活性化合物，通過PubChem獲取其Canonical?SMILES編號，或使用ChemDraw繪制其結構并導出Canonical?SMILES編號；將這些信息上傳到SwissADME平臺；首先，將胃腸道吸收設為“高”，作為藥物被吸收的條件；接著，設置五個藥物相似性預測規則Lipinski、Ghose、Veber、Egan、Muegge，然后將有效三萜化合物的Canonical?SMILES編號上傳到SwissTargetPrediction服務器，并在“智人”條件下進行靶點預測；將概率大于0的預測基因靶點視為潛在藥物靶點。
3.如權利要求1所述的靈芝三萜類化合物干預糖尿病腎病機制的研究方法，其特征在于：所述步驟S3具體包括：將交叉靶標和活性成分導入STRING?11.0數據庫，將物種限定為人類，以獲得靶
4.如權利要求1所述的靈芝三萜類化合物干預糖尿病腎病機制的研究方法，其特征在于：所述步驟S5中動物分組、建模和給藥具體包括：選取15只db/db小鼠和5只C57BL/6J小鼠，經過一周的適應性喂養后，隨機分為空白組、模型組、靈芝提取物低劑量組0.58[g/(kgd)]和靈芝提取物高劑量組2.3[g/(kg?d)]；
...【技術特征摘要】
1.一種靈芝三萜類化合物干預糖尿病腎病機制的研究方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述的靈芝三萜類化合物干預糖尿病腎病機制的研究方法，其特征在于：所述步驟s1具體包括：通過查閱相關文獻，確定目前從白靈芝三萜類化合物中分離出來的成分；對于每種活性化合物，通過pubchem獲取其canonical?smiles編號，或使用chemdraw繪制其結構并導出canonical?smiles編號；將這些信息上傳到swissadme平臺；首先，將胃腸道吸收設為“高”，作為藥物被吸收的條件；接著，設置五個藥物相似性預測規則lipinski、ghose、veber、egan、muegge，然后將有效三萜化合物的canonical?smiles編號上傳到swisstargetprediction服務器，并在“智人”條件下進行靶點預測；將概率大于0的預測基因靶點視為潛在藥物靶...
【專利技術屬性】
技術研發人員：謝林伸，毛楠，馬欣，胡婷，龍文杰，陳鴻禧，王曉媛，李汶芯，
申請(專利權)人：四川大學，
類型：發明
國別省市：
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