【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于醫藥領域，具體涉及苦瓜外泌體的應用。
技術介紹
1、外泌體(evs)是由細胞分泌的脂質雙層顆粒，包括微泡、凋亡小體和外泌體。evs的一個重要作用是將生物分子運送至親本細胞的特定遠端位置，其在介導細胞間通訊的生物發生機制和功能方面逐漸被揭示。
2、evs具有脂質雙層結構，可以裝載親水性和疏水性物質，此外，evs不含有毒性因子，沒有潛在的安全風險，具備良好的生物相容性和生物安全性。
3、植物外泌體(pdevs)可以從多種植物細胞中獲得，來源廣泛。相較于動物來源的外泌體，提取和純化pdevs的步驟簡單，容易獲得高產量。此外，pdevs的膜組成與人類細胞相似，因此具有較高的生物相容性和生物安全性。同時，通過表面修飾和基因工程技術，可以改變pdevs表面受體、配體的組成，從而實現更高的靶向性和藥物傳遞效率。因此，pdevs作為藥物制劑在提取、純化、產量、生物相容性和生物安全性等方面具有優勢。未來的研究將重點關注pdevs的制備方法、藥物遞送機制以及在治療各種疾病中的應用潛力。
4、苦瓜外泌體(bmevs)中含有多種活性成分，包括多肽、多糖和黃酮類化合物。這些成分具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化和免疫調節等多種藥理作用。研究顯示，苦瓜來源的外泌體能夠促進放射后h9c2細胞增殖，減少細胞凋亡，抑制放射后h9c2細胞線粒體ros生成，恢復正常線粒體膜電位從而減輕放射誘導的線粒體損傷；還能發揮一定的放射心臟損傷保護作用，減輕心臟纖維化。
5、蛋白質、核酸和小分子藥物，在用于給藥尤其是經胃腸道給
技術實現思路
1、本專利技術旨在提供一種苦瓜外泌體的應用。
2、本專利技術還提供了上述苦瓜外泌體包埋的藥物制劑。
3、本專利技術技術方案為：
4、苦瓜外泌體用于包埋蛋白質、多肽、小分子肽、核酸或小分子化合物的藥劑；所述的苦瓜外泌體來源于苦瓜，平均粒徑為140-180nm。
5、優選的，平均粒徑為150-160nm。
6、優選的，所述的藥劑為口服藥劑，用于腸胃道給藥。
7、優選的，所述的苦瓜外泌體可用于制備口服胰島素制劑。
8、一種口服藥劑，其組成包括苦瓜外泌體和包裹在苦瓜外泌體內的藥物活性成分。所述的藥物活性成分為蛋白質、多肽、小分子肽、核酸或小分子化合物。
9、優選的，所述的藥物活性成分為胰島素。
10、優選的，胰島素載藥率為15％-20％，更優選為17％-18％。
11、所述的苦瓜外泌體的制備方法為：
12、(1)苦瓜去籽擠壓，取苦瓜汁液；
13、(2)離心去除苦瓜汁液中的沉淀，取上清液過濾；
14、(3)步驟(2)的上清液用0.1-0.5μm濾膜過濾，濾液經超高速離心，取沉淀，為苦瓜外泌體。
15、優選的，還包括步驟(4)：將步驟(3)的沉淀溶解于緩沖液或水中，再次超高速離心取沉淀，獲得高純度的苦瓜外泌體。
16、優選的，步驟(1)中，以新鮮苦瓜為原料；苦瓜經破碎、擠壓后，過150-800目濾布或濾網收集汁液；優選方式為過200-600目濾布或濾網，本專利技術的一個優選方式中，過400目濾網或濾布。
17、步驟(2)中，通過多次低速、高速離心去除植物纖維、細胞碎片等沉淀。所述的離心條件為：200-500g，1-3次，每次5-15min；800g-1200g，1-3次，每次5-15min；10000-15000g，1-3次，每次20-40min。優選為，200-400g，2-3次，每次8-12min；800g-1200g，2-3次，每次8-12min；10000-12000g，2-3次，每次25-35min。本專利技術的一個優選方式中，所述差速離心的過程為：300g，10min×2；1000g，10min×2；10000g，30min×2。
18、優選的，步驟(3)中，上清液用0.2-0.5μm濾膜過濾。本專利技術的一個優選方式，上清液用0.22μm濾膜過濾。
19、步驟(3)或步驟(4)中，所述超高速離心條件為：100000-200000g離心0.5-3小時，優選為120000-200000離心1-2小時。本專利技術的一個優選方式中，為150000g離心1.5小時。
20、步驟(4)所述的緩沖液ph＝7-7.4，優選為磷酸鹽緩沖液；更優選為ph＝7.4的磷酸鹽緩沖液。
21、所述口服藥劑的制備方法包括以下步驟：
22、(i)苦瓜外泌體與藥物活性成分混合，孵育20-60min；
23、(ii)超聲分散后，繼續孵育30-120min，去除未包封的藥物活性成分。
24、優選的，步驟(i)中，在室溫下孵育。
25、優選的，步驟(i)中，苦瓜外泌體與藥物活性成分質量比為5-20：1；更優選為8-12：1。
26、步驟(ii)中，在35-38℃下孵育。優選的，在37℃下孵育。
27、優選的，步驟(ii)中，用80-120kda超濾去除未包封的藥物活性成分。在本專利技術的一個優選方式中，用100kda超濾去除未包封的藥物活性成分。
28、本專利技術的有益效果在于：
29、1.采用苦瓜外泌體包埋藥物(如胰島素)后，經口服可產生與注射給藥途徑相似的療效。苦瓜外泌體具有較強的胃酸和消化道蛋白水解酶耐受能力以及腸道屏障透過性，適用于將易被胃腸道破壞、多通過注射途徑給藥的藥物制成口服劑，經口服可產生與注射給藥途徑相似的療效，方便使用。
30、2.所使用的外泌體來源于苦瓜，提取簡單成本低，可進行大規模生產。外泌體及其制備的藥物無免疫原性，還具有較高的生物相容性和生物安全性。
31、本專利技術用苦瓜外泌體包裹蛋白質、核酸、小分子化合物等，尤其是可以將原先容易被消化道破壞、多經過注射途徑給藥的藥物制成口服劑，具有現實的意義和重要性。采用苦瓜外泌體包裹藥物活性成分制成口服藥劑，能夠保護其中活性分子免受胃腸道嚴酷環境的破壞，并高效地穿越腸上皮屏障。并且苦瓜外泌體具有很好的靶向性、生物相容性，并且多種活性成分的存在使其在糖尿病治療、腫瘤治療、炎癥治療和免疫治療等方面具有潛在的應用價值。
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1.苦瓜外泌體在制備包埋蛋白質、多肽、小分子肽、核酸或小分子化合物的藥劑方面的應用；所述的苦瓜外泌體來源于苦瓜，平均粒徑為140-180nm。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的藥劑為口服藥劑。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的苦瓜外泌體來源于苦瓜，平均粒徑為150-160nm。
4.一種口服藥劑，其特征在于，其組成包括苦瓜外泌體和包埋在苦瓜外泌體內的藥物活性成分。
5.根據權利要求4所述的口服藥劑，其特征在于，所述的藥物活性成分為蛋白質、多肽、小分子肽、核酸或小分子化合物。
6.根據權利要求4所述的口服藥劑，其特征在于，所述的藥物活性成分為胰島素。
7.根據權利要求1-3任一項所述的應用或者權利要求4-6任一項所述的口服藥劑，其特征在于，苦瓜外泌體的制備方法包括以下步驟：
8.權利要求4-6任一項所述口服藥劑的制備方法，其特征在于，其包括以下步驟：
【技術特征摘要】
1.苦瓜外泌體在制備包埋蛋白質、多肽、小分子肽、核酸或小分子化合物的藥劑方面的應用；所述的苦瓜外泌體來源于苦瓜，平均粒徑為140-180nm。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的藥劑為口服藥劑。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述的苦瓜外泌體來源于苦瓜，平均粒徑為150-160nm。
4.一種口服藥劑，其特征在于，其組成包括苦瓜外泌體和包埋在苦瓜外泌體內的藥物活性成分。
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉克海，張旺，
申請(專利權)人：上海水大技術轉移有限公司，
類型：發明
國別省市：
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