【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及hror1的抗原結合蛋白、雙特異性抗原結合蛋白、編碼該抗原結合蛋白的核酸分子、載體、細胞、藥物分子，以及它們的用途。
技術介紹
1、受體酪氨酸激酶孤兒受體-1(ror1)與同家族成員受體酪氨酸激酶孤兒受體-2(ror2)隸屬于受體酪氨酸激酶(rtks)家族，都是近期受關注的腫瘤靶點。ror1和ror2結構相似，均為i型跨膜蛋白，成熟的全長蛋白包含由3個不同結構域(ig-like、frizzled和kringle結構域)的胞外區、跨膜區和胞內區組成，胞內區包含一個酪氨酸激酶結構域、兩個富含絲氨酸/蘇氨酸的結構域和一個富含脯氨酸的結構域。ror1和ror2都在多種腫瘤組織中高表達，但ror2在一些正常組織中也有低中程度的表達，而ror1盡管在胚胎組織中可檢測，在成年人正常組織中幾乎不表達，除了睪丸、子宮、肺、膀胱和結腸里有很低水平的表達(clin?cancer?res?2008；14(2)，doi:10.1158/1078-0432.ccr-07-1823)，因而被認為是一個很好的腫瘤靶點。
2、ror1在血液瘤和實體瘤中都有較為廣泛的表達。例如，ror1在慢性淋巴細胞白血病(cll)、一些急性淋巴細胞白血病(all)、和慢性套細胞淋巴瘤(cml)等血液瘤中高表達，且ror1在多種實體瘤中如肉瘤、卵巢癌、腎細胞癌、頭頸癌、乳腺癌、肺癌、惡性間皮瘤、結腸癌、神經母細胞瘤、黑色素瘤和其它腫瘤組織中高表達。ror1高表達與癌癥如cll和卵巢癌病程加快及預后不良相關(sci?rep.2014jul24；4:5811
3、如前所述，ror1在腫瘤中有特異性表達且有可能促進腫瘤生長，因而ror1可視為較好的癌癥療法藥物靶標，已有工作開發ror1特異性抗體的靶標。因ror1在不同哺乳動物物種之間具有高同源性，其胞外區氨基酸序列人和食蟹猴完全相同，在人和小鼠之間96.8％相同，人和大鼠之間96.6％相同。因而，通過標準技術如動物免疫產生針對這個靶標的高親和力抗體具有一定的困難。
4、靶向ror1的策略主要包括單抗、雙抗、抗體偶聯藥物和car-t，目前尚無靶向ror1的產品得到臨床確證。此外，ror1的胞外區具有三個不同的結構域，進入臨床研究階段的三個靶向ror1抗體偶聯藥物中vls-101和nbe002靶向ig-like結構域，lcb71靶向frizzled結構域。而特異性識別不同結構域或同一結構域的不同表位有可能帶來不一樣的親和力、內吞效率或生物性功能，特別是識別不同表位的不同抗體組成的雙抗也許會增加抗體的功能特性。另外，現有adc產品都有安全性和耐藥性問題。
技術實現思路
1、本專利技術主要目的在于提供能夠與hror1中特異性結合的抗原結合蛋白，并且具有很好的抗原結合活性。
2、本專利技術的第一方面涉及分離的抗原結合蛋白，能夠結合hror1，含有a～o任一項：
3、a.具有第一重鏈可變區，含有氨基酸序列為tyams的hcdr1，氨基酸序列為sissggstyypdsvkg的hcdr2，氨基酸序列為yslmveahwyfdv的hcdr3，
4、b.具有第二重鏈可變區，含有氨基酸序列為syams的hcdr1，氨基酸序列為sissggstyypdsvkg的hcdr2，氨基酸序列為gysnyvdwyfdv的hcdr3，
5、c.具有第三重鏈可變區，含有氨基酸序列為dytmh的hcdr1，氨基酸序列為gidpnyggtnynekfkd的hcdr2，氨基酸序列為ddgyyedyfdy的hcdr3，
6、d.具有第四重鏈可變區，含有氨基酸序列為sywie的hcdr1，氨基酸序列為eilpgsgntqnnekfkg的hcdr2，氨基酸序列為egrrshffdy的hcdr3，
7、e.具有第五重鏈可變區，含有氨基酸序列為ryams的hcdr1，氨基酸序列為sissggstyypdsvkg的hcdr2，氨基酸序列為gyygnndwyfdv的hcdr3，
8、f.具有第一輕鏈可變區，含有氨基酸序列為kasqdinsyls的lcdr1，氨基酸序列為ranrlvd的lcdr2，氨基酸序列為lqydefpyt的lcdr3，
9、g.具有第二輕鏈可變區，含有氨基酸序列為katqdinsyls的lcdr1，氨基酸序列為rpnrlvd的lcdr2，氨基酸序列為lqydefpyt的lcdr3，
10、h.具有第三輕鏈可變區，含有氨基酸序列為hasqgissnig的lcdr1，氨基酸序列為hgtnled的lcdr2，氨基酸序列為vqyaqfpyt的lcdr3，
11、i.具有第四輕鏈可變區，含有氨基酸序列為kssqsllnssnqknyla的lcdr1，氨基酸序列為fastres的lcdr2，氨基酸序列為qqhysspwt的lcdr3，
12、j.具有第五輕鏈可變區，含有氨基酸序列為kasqdinsyls的lcdr1，氨基酸序列為ranslvd的lcdr2，氨基酸序列為lqfdefpyt的lcdr3，
13、k.具有a項所述的第一重鏈可變區和具有f項所述的第一輕鏈可變區，
14、l.具有b項所述的第二重鏈可變區和具有g項所述的第二輕鏈可變區，
15、m.具有c項所述的第三重鏈可變區和具有h項所述的第三輕鏈可變區，
16、n.具有d項所述的第四重鏈可變區和具有i項所述的第四輕鏈可變區，
17、o.具有e項所述的第五重鏈可變區和具有j項所述的第五輕鏈可變區。
18、本專利技術第一方面的一些實施例中，具有鼠源的框架區或人源的框架區。
19、本專利技術第一方面的一些實施例中，所述的框架區為igg框架區。
20、本專利技術第一方面的一些實施例中，所述的人源的框架區具有相對于鼠源的框架區的一個或多個位點的回復突變。
21、本專利技術第一方面的一些實施例中，還具有恒定區。
22、本專利技術第一方面的一些實施例中，所述的恒定區具有lala突變。
23、本專利技術第一方面的一些實施例中，所述的a～e、k～o中的任一項的重鏈恒定區含有c220s、a121c、v205c、k149c、d265c、s239c、a330c、s44本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.分離的抗原結合蛋白，能夠結合hROR1，其特征在于含有a～o任一項：
2.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于具有鼠源的框架區或人源的框架區。
3.如權利要求2所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的框架區為IgG框架區。
4.如權利要求2所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的人源的框架區具有相對于鼠源的框架區的一個或多個位點的回復突變。
5.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于還具有恒定區。
6.如權利要求5所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的a～e、k～o中的任一項的重鏈恒定區含有C220S、A121C、V205C、K149C、D265C、S239C、A330C、S442C中的一個或多個突變。
7.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的抗原結合蛋白包括抗體或其抗原結合片段。
8.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的重鏈可變區具有S62Q、S62A、S62N、S62E、S62V、S62Y、S62F或S62K突變。
9.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其
10.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的輕鏈可變區具有D56E、D56Q、D56T或D56Y突變。
11.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的輕鏈可變區具有S31A、S31Q、S31L、S31V、S31E、S31Y、S31F或S31K突變。
12.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的輕鏈可變區具有T57A、T57Q、T57L、T57V、T57E、T57Y、T57F或T57K突變。
13.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的輕鏈可變區具有S27A、S27Q、S27L、S27V、S27E、S27Y、S27F、S27K突變。
14.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于具有氨基酸序列如SEQ?ID?No.53、54、55、56、57、58、59、60、62、63、65、73、75、78、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、90、91、92、93、134或135任一所示的重鏈，和氨基酸序列如SEQ?ID?No.64、66、67、68、70、71、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、105、106、108、109、110、112、113、114、115、116、117、119、120、121、122或123任一所示的輕鏈。
15.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于選自抗體Ab-1～5中的任一項，其中，
16.分離的雙特異性抗原結合蛋白，能夠結合hROR1，其特征在于具有：
17.如權利要求16所述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于具有鼠源的框架區或人源的框架區。
18.如權利要求17所述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于所述的框架區為IgG框架區。
19.如權利要求17所述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于所述的人源的框架區具有相對于鼠源的框架區的一個或多個位點的回復突變。
20.如權利要求16所述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于還具有恒定區。
21.如權利要求20所述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于所述的第一抗原結合片段的重鏈恒定區含有C220S、A121C、V205C、K149C、D265C、S239C、A330C、S442C中的一個或多個突變。
22.如權利要求20所述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于所述的第二抗原結合片段的重鏈恒定區含有C220S、A121C、V205C、K149C、D265C、S239C、A330C、S442C中的一個或多個突變。
23.如權利要求16所述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于所述的雙特異性抗原結合蛋白為IgG樣或非IgG樣。
24.如權利要求23述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于所述的IgG樣抗原結合蛋白選自DVD-Ig雙特異性抗原結合蛋白、IgG-scFv雙特異性抗原結合蛋白或CrossMAb雙特異性抗原結合蛋白。
25.如權利要求16所述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于具有p、q、r、s中的任一項：
26.如權利要求16所述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于選自抗體Ab-6～9中的任一項，其中，
27.核酸分子，其特征在于用于編碼權利要求1～15任一所述的抗原結合蛋白或用于編碼權利要求16～...
【技術特征摘要】
1.分離的抗原結合蛋白，能夠結合hror1，其特征在于含有a～o任一項：
2.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于具有鼠源的框架區或人源的框架區。
3.如權利要求2所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的框架區為igg框架區。
4.如權利要求2所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的人源的框架區具有相對于鼠源的框架區的一個或多個位點的回復突變。
5.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于還具有恒定區。
6.如權利要求5所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的a～e、k～o中的任一項的重鏈恒定區含有c220s、a121c、v205c、k149c、d265c、s239c、a330c、s442c中的一個或多個突變。
7.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的抗原結合蛋白包括抗體或其抗原結合片段。
8.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的重鏈可變區具有s62q、s62a、s62n、s62e、s62v、s62y、s62f或s62k突變。
9.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的輕鏈可變區具有g57a、g57s、g57n或g57l突變。
10.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的輕鏈可變區具有d56e、d56q、d56t或d56y突變。
11.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的輕鏈可變區具有s31a、s31q、s31l、s31v、s31e、s31y、s31f或s31k突變。
12.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的輕鏈可變區具有t57a、t57q、t57l、t57v、t57e、t57y、t57f或t57k突變。
13.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于所述的輕鏈可變區具有s27a、s27q、s27l、s27v、s27e、s27y、s27f、s27k突變。
14.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于具有氨基酸序列如seq?id?no.53、54、55、56、57、58、59、60、62、63、65、73、75、78、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、90、91、92、93、134或135任一所示的重鏈，和氨基酸序列如seq?id?no.64、66、67、68、70、71、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、105、106、108、109、110、112、113、114、115、116、117、119、120、121、122或123任一所示的輕鏈。
15.如權利要求1所述的抗原結合蛋白，其特征在于選自抗體ab-1～5中的任一項，其中，
16.分離的雙特異性抗原結合蛋白，能夠結合hror1，其特征在于具有：
17.如權利要求16所述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于具有鼠源的框架區或人源的框架區。
18.如權利要求17所述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于所述的框架區為igg框架區。
19.如權利要求17所述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于所述的人源的框架區具有相對于鼠源的框架區的一個或多個位點的回復突變。
20.如權利要求16所述的雙特異性抗原結合蛋白，其特征在于還具有恒定區。
21.如權利要求20所述的雙特異...
【專利技術屬性】
技術研發人員：鄒斌，鐘琛，劉紹軍，杜平，
申請(專利權)人：泰誠思上海生物醫藥有限公司，
類型：發明
國別省市：
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