【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物制藥，特別是涉及一種外周血γδt細胞的凍存方法和凍存液。
技術介紹
1、大多數細胞樣品在收集后的幾個月內輸注；然而，需要多次輸注，就需要長期儲存。在所有的病例中，所有的細胞樣品都是在第一次移植前收集的，而隨著疾病晚期和血液毒性增加累積，在治療過程中采集外周血具有挑戰性。
2、外周血γδt細胞低溫保存在氮氣液相或氣相中，直到解凍和再灌注。傳統的低溫保存方法包括控制速率的冷凍和二甲亞砜(dmso)作為低溫保護劑。幾十年來，dmso是一種被驗證的長期骨髓或外周血干細胞儲存的添加劑，保護細胞免受冰晶的形成和由此導致的細胞損傷。在這些條件下，細胞樣品可以長期儲存，從數月到數年不等。
3、生存能力表征依賴于間接的測量，因此，對于其捕獲長期存儲后的γδt細胞的功能完整性和效力的能力仍然存在問題。死亡的細胞被識別出來并被排除在外使用活性染料進行cd3+分析。然而，膜完整性活力測量與解凍后細胞條件和功能相關性較差。染料排除法只檢測細胞死亡的最新階段，而冷凍和解凍可能導致仍在存活的細胞出現更微妙的功能損傷。換句話說，在解凍γδt的標準質量控制標準中使用的可行的cd3+計數并不能保證γδt的功能和效力得到保留。事實上，盡管解凍后活的cd3+計數很高，但移植失敗的病例表明了超低溫保存后γδt細胞功能檢查的錯誤保證問題。γδt細胞計數可以與cfu實驗相結合，進一步評估整個γδt及其單個細胞亞群的功能能力。低溫保存和解凍可能導致有核細胞總數、細胞活力和形成單位(cfu)的顯著損失。
4、目前對于提高γδ
5、需要說明的是，在上述
技術介紹
部分公開的信息僅用于對本申請的背景的理解，因此可以包括不構成對本領域普通技術人員已知的現有技術的信息。
技術實現思路
1、本專利技術的主要目的在于克服上述
技術介紹
的缺陷，提供一種外周血γδt細胞的凍存方法和凍存液，使γδt細胞長期冷凍后仍可很好地保持質量和效力。
2、為實現上述目的，本專利技術采用以下技術方案：
3、一種外周血γδt細胞的凍存方法，包括：
4、將外周血γδt細胞放入凍存液中進行超深低溫冷凍保藏，所述凍存液含有有效量的ossirene和冷凍保護劑。
5、進一步地，所述凍存液含有0.1mm-5mm的ossirene。
6、進一步地，所述凍存液含有0.5mm的ossirene。
7、進一步地，所述冷凍保護劑為dmso，體積比濃度為70％至95％。
8、進一步地，dmso的體積比濃度為90％。
9、進一步地，可安全保存的期限為6年以上。
10、一種外周血γδt細胞的凍存液，含有有效量的ossirene和冷凍保護劑。
11、進一步地，所述凍存液含有0.1mm-5mm的ossirene。
12、進一步地，所述凍存液含有0.5mm的ossirene。
13、進一步地，所述冷凍保護劑為dmso，體積比濃度為70％至95％。
14、本專利技術具有如下有益效果：
15、本專利技術提供了一種創新的外周血γδt細胞凍存方法，該方法通過使用含有有效量的ossirene和冷凍保護劑的凍存液，實現了對γδt細胞的長期低溫安全保存。與傳統的低溫保存方法相比，本專利技術的凍存液不僅能夠保護細胞免受冰晶形成導致的損傷，而且還能在細胞復蘇后顯著提高其活力。實驗結果表明，使用本專利技術的凍存液，即使在長期(6年)低溫保存條件下，γδt細胞的質量和效力也未受到明顯負面影響，細胞的存活率、代謝活性和細胞內ph均保持在良好狀態，凋亡細胞比例與新鮮細胞相比無顯著差異。本專利技術不僅提高了γδt細胞凍存的長期穩定性，還為自體γδt細胞的臨床應用提供了一種安全、可靠的凍存解決方案。
16、本專利技術實施例中的其他有益效果將在下文中進一步述及。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種外周血γδT細胞的凍存方法，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的外周血γδT細胞的凍存方法，其特征在于，所述凍存液含有0.1mM-5mM的Ossirene。
3.根據權利要求2所述的外周血γδT細胞的凍存方法，其特征在于，所述凍存液含有0.5mM的Ossirene。
4.根據權利要求1至3任一項所述的外周血γδT細胞的凍存方法，其特征在于，所述冷凍保護劑為DMSO，體積比濃度為70％至95％。
5.根據權利要求4所述的外周血γδT細胞的凍存方法，其特征在于，DMSO的體積比濃度為90％。
6.根據權利要求1至3任一項所述的外周血γδT細胞的凍存方法，其特征在于，可安全保存的期限為6年以上。
7.一種外周血γδT細胞的凍存液，其特征在于，含有有效量的Ossirene和冷凍保護劑。
8.根據權利要求7所述的外周血γδT細胞的凍存方法，其特征在于，所述凍存液含有0.1mM-5mM的Ossirene。
9.根據權利要求8所述的外周血γδT細胞的凍存方法，其特征在于，所述凍存液含
10.根據權利要求6至9任一項所述的外周血γδT細胞的凍存方法，其特征在于，所述冷凍保護劑為DMSO，體積比濃度為70％至95％。
...【技術特征摘要】
1.一種外周血γδt細胞的凍存方法，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的外周血γδt細胞的凍存方法，其特征在于，所述凍存液含有0.1mm-5mm的ossirene。
3.根據權利要求2所述的外周血γδt細胞的凍存方法，其特征在于，所述凍存液含有0.5mm的ossirene。
4.根據權利要求1至3任一項所述的外周血γδt細胞的凍存方法，其特征在于，所述冷凍保護劑為dmso，體積比濃度為70％至95％。
5.根據權利要求4所述的外周血γδt細胞的凍存方法，其特征在于，dmso的體積比濃度為90％。
6.根據權利要求...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉佳，
申請(專利權)人：深圳市中佳生物醫療科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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