【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及一種用于大規(guī)模培養(yǎng)的誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞的凍存液及其制備方法。
技術(shù)介紹
1、潛在的臨床應(yīng)用需要大量的誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(induced?pluripotent?stemcells，ipscs)作為治療性細(xì)胞(109-1010)，其通過從主細(xì)胞庫或工作細(xì)胞庫中解凍和培養(yǎng)ipscs而制備。在這一過程中，大規(guī)模細(xì)胞庫(4×109)的質(zhì)量影響了ipscs解凍后的擴(kuò)增和隨后的譜系特異性分化的效率。因此，在細(xì)胞庫建設(shè)中，一個(gè)穩(wěn)健和高效的深低溫(例如-196℃液氮環(huán)境)保存過程成為ipscs制備的關(guān)鍵一步。
2、傳統(tǒng)的ipscs深低溫保存技術(shù)中，包括玻璃化或慢冷技術(shù)等方法，雖然ipscs作為簇或貼壁細(xì)胞等顯示出良好的細(xì)胞存活率，但這些方法由于可擴(kuò)展性差，僅適合科研實(shí)驗(yàn)室少量培養(yǎng)，不適合工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。以往為了解決可擴(kuò)展性，將ipscs深低溫保存在rho相關(guān)激酶抑制劑(rocki)中，如y-27632分離單細(xì)胞，以提高細(xì)胞存活。然而，這些方案要求ipscs在貼附的單層培養(yǎng)中復(fù)蘇，并且不能與大規(guī)模培養(yǎng)如生物反應(yīng)器中的細(xì)胞擴(kuò)增聚集形式契合。
3、為了提高工藝效率和可靠性，需要推動(dòng)基于微載體培養(yǎng)中聚集的ipscs擴(kuò)增和深低溫保存策略的發(fā)展。與基于單細(xì)胞或貼壁細(xì)胞的深低溫保存相比，大規(guī)模培養(yǎng)的ipscs細(xì)胞形成的聚集物的大小已被證明會(huì)影響深低溫保存效率。
4、除了ipscs聚集物的大小外，凍存液的配方也是影響細(xì)胞存活和臨床安全性的另一個(gè)重要參數(shù)。大規(guī)模培養(yǎng)如生物反應(yīng)器培養(yǎng)的ipsc
5、需要說明的是，在上述
技術(shù)介紹
部分公開的信息僅用于對本申請的背景的理解，因此可以包括不構(gòu)成對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的現(xiàn)有技術(shù)的信息。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)提供一種用于大規(guī)模培養(yǎng)的誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞的凍存液及其制備方法。
2、本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案：
3、第一方面，提供了一種用于大規(guī)模培養(yǎng)的誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞的凍存液，所述凍存液包括溶劑和以所述凍存液的終體積計(jì)的如下含量的各組分：白樺脂醛4-6mm、沙苑子苷1.5-2.5mm和香草醇丁醚7-13mm。
4、第二方面，提供了一種第一方面所述的用于大規(guī)模培養(yǎng)的誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞的凍存液的制備方法，其包括如下步驟：將所述凍存液的各組分按所需濃度配制混合即得。
5、本專利技術(shù)具有如下優(yōu)點(diǎn)：
6、本專利技術(shù)的凍存液是沒有動(dòng)物血清病原體傳播風(fēng)險(xiǎn)的無蛋白配方，適用于大規(guī)模培養(yǎng)的分解離散成小尺寸(平均直徑為109±56μm)聚集形式的ipscs的深低溫(例如-196℃液氮環(huán)境)保存，尤其適用于大規(guī)模培養(yǎng)的分解離散成小尺寸聚集形式的尿液來源ipscs的深低溫保存。本專利技術(shù)的凍存液為大規(guī)模培養(yǎng)的分解離散成小尺寸聚集形式的尿液來源ipscs提供了有效的保存方案，可明顯促進(jìn)復(fù)蘇后ipscs的恢復(fù)，且無蛋白配方的凍存液最大限度降低了含動(dòng)物血清的凍存液配方作為潛在臨床應(yīng)用時(shí)的病原體傳播風(fēng)險(xiǎn)和所需的廣泛的檢測。本專利技術(shù)開發(fā)的凍存液可在ipscs深低溫保存大規(guī)模ipscs庫中發(fā)揮重要作用。
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1.一種用于大規(guī)模培養(yǎng)的誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞的凍存液，其特征在于，所述凍存液包括溶劑和以所述凍存液的終體積計(jì)的如下含量的各組分：白樺脂醛4-6mM、沙苑子苷1.5-2.5mM和香草醇丁醚7-13mM。
2.如權(quán)利要求1所述的凍存液，其特征在于：所述溶劑為DMSO。
3.如權(quán)利要求1所述的凍存液，其特征在于：所述凍存液中，所述溶劑的體積分?jǐn)?shù)為80％(v/v)。
4.如權(quán)利要求1所述的凍存液，其特征在于：所述凍存液包括以所述凍存液的終體積計(jì)的如下含量的各組分：白樺脂醛5mM、沙苑子苷2mM和香草醇丁醚10mM。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的用于大規(guī)模培養(yǎng)的誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞的凍存液的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：將所述凍存液的各組分按所需濃度配制混合即得。
6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟S1中，所述白樺脂醛母液是用DMSO配制的，于-20℃下保存?zhèn)溆茫诓襟ES4中，用DMSO稀釋成所需濃度。
8.如權(quán)利要求6所述的制備方法
9.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟S3中，所述香草醇丁醚母液是用DMSO配制的，于25℃下保存?zhèn)溆茫诓襟ES4中，用DMSO稀釋成所需濃度。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于大規(guī)模培養(yǎng)的誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞的凍存液，其特征在于，所述凍存液包括溶劑和以所述凍存液的終體積計(jì)的如下含量的各組分：白樺脂醛4-6mm、沙苑子苷1.5-2.5mm和香草醇丁醚7-13mm。
2.如權(quán)利要求1所述的凍存液，其特征在于：所述溶劑為dmso。
3.如權(quán)利要求1所述的凍存液，其特征在于：所述凍存液中，所述溶劑的體積分?jǐn)?shù)為80％(v/v)。
4.如權(quán)利要求1所述的凍存液，其特征在于：所述凍存液包括以所述凍存液的終體積計(jì)的如下含量的各組分：白樺脂醛5mm、沙苑子苷2mm和香草醇丁醚10mm。
5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的用于大規(guī)模培養(yǎng)的誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞的凍存液的制備方法，其特...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉佳，
申請(專利權(quán))人：深圳市中佳生物醫(yī)療科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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