【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥領域，具體地涉及連續殺傷能力增強的工程化til細胞及其應用。
技術介紹
1、過繼性免疫細胞療法(adoptive?cellular?immunotherapy，aci或ait)是指向腫瘤患者傳輸具有抗腫瘤活性的免疫細胞，尤其是經基因工程化改造后的免疫細胞，實現對腫瘤細胞的直接殺傷，或通過激發機體的免疫應答殺傷腫瘤細胞。目前應用較廣的細胞免疫療法包括car-t、tcr-t、car-nk等。til細胞即腫瘤浸潤性淋巴細胞，在機體對腫瘤細胞特異性免疫反應過程中起到重要作用，與其他免疫細胞相比有其突出的優勢。
2、首先，腫瘤浸潤性淋巴細胞til可以識別多個腫瘤特異性的新生抗原及腫瘤相關抗原，使其更有效地應對腫瘤異質性；其次，til通常含有一定效應性記憶性t細胞，在體內被腫瘤抗原刺激后表達趨化因子受體，使其在回輸后更容易定位于腫瘤組織；此外，til來源于患者自身，具有較低的毒性。因此，til療法在實體瘤領域內表現出了巨大的潛力。
3、然而，來源腫瘤組織的til細胞在激活后往往處于終末分化、耗竭狀態，導致til細胞對腫瘤細胞的殺傷能力減弱；體外培養出來的til細胞中有大部分細胞是非腫瘤特異性的旁觀者細胞，如何將旁觀者細胞轉變為對腫瘤細胞具有識別和殺傷功能的效應細胞以提高til細胞治療效果是基因工程化til領域待解決的問題之一。此外，腫瘤細胞往往降低mhc-i分子的表達或tap基因突變等導致抗原遞呈功能喪失等途徑逃逸免疫細胞的殺傷。
4、因此，本領域迫切需要開發具有高效且持久的腫瘤細胞
技術實現思路
1、本專利技術的目的就是提供具有高效且持久的腫瘤細胞殺傷能力的工程化til細胞。
2、在本專利技術的第一方面，提供了一種工程化til細胞，所述工程化til細胞表達一外源的長效激活型蛋白，所述長效激活型蛋白包含dap10元件和長效激活元件，所述長效激活元件的序列如seq?id?no:2所示。
3、在另一優選例中，所述長效激活型蛋白從n端到c端包括融合在一起的以下結構：
4、(1)胞外結構域，所述胞外結構域包含dap10元件或其活性片段；
5、(2)跨膜域；和
6、(3)胞內信號域，所述胞內信號域包含dap10胞內結構域和長效激活元件。
7、在另一優選例中，所述長效激活型蛋白具有如式i所示的結構：
8、l-ecd-tm-icd1-icd2-icd3(式i)
9、式中，
10、“-”各自獨立地為肽鍵或連接肽；
11、l為無或信號肽；
12、ecd為胞外結構域；
13、tm為跨膜域
14、icd1為來自dap10蛋白的胞內結構域；
15、icd2為無或共刺激域；
16、icd3為長效激活元件。
17、在另一優選例中，所述l為無。
18、在另一優選例中，所述l為選自下組蛋白的信號肽：dap10、gm-scf受體α、cd8、cd28。
19、在另一優選例中，所述l的氨基酸序列如seq?id?no:1的第1-18位所示。
20、在另一優選例中，所述ecd為來自dap10蛋白的胞外結構域。
21、在另一優選例中，所述ecd的氨基酸序列如seq?id?no:1的第19-48位所示。
22、在另一優選例中，所述tm為來自dap10、cd8、或cd28的跨膜域。
23、在另一優選例中，所述tm為來自dap10的跨膜域。
24、在另一優選例中，所述tm的氨基酸序列如seq?id?no:1的第49-69位所示。
25、在另一優選例中，所述icd1為dap10蛋白的胞內結構域。
26、在另一優選例中，所述icd1的序列如seq?id?no:1的第70-92位所示。
27、在另一優選例中，所述icd2為無。
28、在另一優選例中，所述icd2為一個、兩個或多個來源于選自下組的蛋白的共刺激域：cd40、cd27、4-1bb、ox40、或其組合。
29、在另一優選例中，所述icd2為來自cd40蛋白的共刺激域。
30、在另一優選例中，所述icd2的序列如seq?id?no:15所示。
31、在另一優選例中，所述icd3的氨基酸序列如seq?id?no:2所示。
32、在另一優選例中，所述長效激活型蛋白的氨基酸序列如seq?id?no:3或seq?idno:4所示。
33、在另一優選例中，所述工程化til細胞的細胞膜上具有所述的長效激活型蛋白。
34、在另一優選例中，所述工程化til細胞具有選自下組的一個或多個性能：
35、(1)持久的腫瘤細胞殺傷能力；
36、(2)減少til細胞的耗竭；
37、(3)減少腫瘤的免疫逃逸和復發；
38、(4)提高的體內擴增能力。
39、在另一優選例中，所述激活為自激活，即表達所述長效激活型蛋白的工程化til細胞被激活。
40、在另一優選例中，所述激活的工程化til細胞可通過nkg2d-nkg2dl的相互作用對靶細胞進行有效殺傷。
41、在另一優選例中，所述工程化til細胞含有一多核苷酸，所述多核苷酸編碼所述的長效激活型蛋白。
42、在另一優選例中，所述多核苷酸為dna、rna、或其組合。
43、在另一優選例中，所述工程化til細胞含有一載體，所述載體包含：編碼所述的長效激活型蛋白的多核苷酸。
44、在另一優選例中，所述的載體包括質粒、病毒載體。
45、在另一優選例中，所述的病毒載體包括：慢病毒載體、腺病毒載體、黃熱病毒載體。
46、在另一優選例中，所述載體為質粒。
47、在另一優選例中，所述工程化til細胞還表達膜結合型il-15融合多肽，其包括融合在一起的以下元件：
48、(i)白細胞介素15(il-15)；
49、(ii)cd86跨膜域和cd86胞內域。
50、在另一優選例中，所述il-15的氨基酸序列如seq?id?no:7所示。
51、在另一優選例中，所述元件(i)和元件(ii)直接可選地包含連接子和/或鉸鏈區。
52、在另一優選例中，所述連接子的氨基酸序列如為seq?id?no:8所示。
53、在另一優選例中，所述鉸鏈區的氨基酸序列如seq?id?no:9所示。
54、在另一優選例中，所述cd86跨膜域和胞內域的氨基酸序列如seq?id?no:10所示。
55、在另一優選例中，所述融合多肽的n端可選地包含信號肽，所述信號肽的氨基酸序列如seq?id?no:6所示。
56、在另一優選例中，所述工程化t本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種工程化TIL細胞，其特征在于，所述工程化TIL細胞表達一外源的長效激活型蛋白，所述長效激活型蛋白包含DAP10元件和長效激活元件，所述長效激活元件的序列如SEQID?NO:2所示。
2.如權利要求1所述的工程化TIL細胞，其特征在于，所述長效激活型蛋白具有如式I所示的結構：
3.如權利要求1所述的工程化TIL細胞，其特征在于，所述長效激活型蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:3或SEQ?ID?NO:4所示。
4.如權利要求1所述的工程化TIL細胞，其特征在于，所述工程化TIL細胞含有一多核苷酸，所述多核苷酸編碼所述的長效激活型蛋白。
5.如權利要求1所述的工程化TIL細胞，其特征在于，所述工程化TIL細胞含有一載體，所述載體包含：編碼所述的長效激活型蛋白的多核苷酸。
6.如權利要求1所述的工程化TIL細胞，其特征在于，所述工程化TIL細胞還表達膜結合型IL-15融合多肽，其包括融合在一起的以下元件：
7.如權利要求1所述的工程化TIL細胞，其特征在于，所述工程化TIL細胞含有一核酸構建物，所述核酸構
8.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包含如權利要求1所述的工程化TIL細胞，以及藥學上可接受的載體。
9.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含如權利要求1所述的工程化TIL細胞，或用于制備如權利要求1所述的工程化TIL細胞的試劑，其中，所述試劑選自下組：
10.如權利要求1所述的工程化TIL細胞在制備藥物中的用途，其特征在于，所述藥物用于預防、緩解和/或治療腫瘤。
...【技術特征摘要】
1.一種工程化til細胞，其特征在于，所述工程化til細胞表達一外源的長效激活型蛋白，所述長效激活型蛋白包含dap10元件和長效激活元件，所述長效激活元件的序列如seqid?no:2所示。
2.如權利要求1所述的工程化til細胞，其特征在于，所述長效激活型蛋白具有如式i所示的結構：
3.如權利要求1所述的工程化til細胞，其特征在于，所述長效激活型蛋白的氨基酸序列如seq?id?no:3或seq?id?no:4所示。
4.如權利要求1所述的工程化til細胞，其特征在于，所述工程化til細胞含有一多核苷酸，所述多核苷酸編碼所述的長效激活型蛋白。
5.如權利要求1所述的工程化til細胞，其特征在于，所述工程化til細胞含有一載體，所述載體包含：編碼所述的長效激活型蛋白的多核苷...
【專利技術屬性】
技術研發人員：許傲天，于忠杰，蔣彬，朱月姝，邵琳，李斌，劉文娜，朱文述，趙毅，高青，
申請(專利權)人：青島華賽伯曼醫學細胞生物有限公司，
類型：發明
國別省市：
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