【技術實現步驟摘要】
本申請總體涉及混合載體、多價肺炎球菌綴合物組合物、包含所述組合物的疫苗以及用于在受試者中使用這些組合物和疫苗用于預防肺炎鏈球菌(streptococcuspneumoniae)感染或疾病的方法。
技術介紹
1、肺炎球菌(肺炎鏈球菌)是具有超過90種已知血清型的革蘭氏陽性、柳葉刀形、兼性厭氧性細菌。大多數肺炎鏈球菌血清型已經顯示出會造成疾病，其中23種最常見的血清型在世界各地導致大約90％的侵入性疾病。血清型是根據莢膜多糖(肺炎球菌最重要的毒力因子)的血清學反應進行分類。莢膜多糖是t細胞非依賴性抗原，其在不存在t輔助細胞的情況下誘導抗體產生。t細胞非依賴性抗原通常誘導低親和力抗體和短期免疫反應以及很少甚至于沒有免疫記憶。
2、初始肺炎球菌疫苗包括來自不同血清型的莢膜多糖的組合。這些疫苗可賦予具有發達或健康的免疫系統的患者對抗肺炎鏈球菌的免疫力，然而，它們在缺乏發達的免疫系統的嬰兒和通常免疫功能減弱的老年受試者中沒有效果。為了改善肺炎球菌疫苗的免疫反應，特別是在處于發展肺炎鏈球菌感染較高風險下的嬰兒和老年受試者中，使莢膜多糖與合適的載體蛋白綴合以產生肺炎球菌綴合物疫苗。與合適的載體蛋白綴合使莢膜多糖由t細胞非依賴性抗原改變成t細胞依賴性抗原。確切而言，對抗綴合的莢膜多糖的免疫反應涉及t輔助細胞，所述t輔助細胞在再暴露于莢膜多糖時協助誘導更有力且快速的免疫反應。
3、存在至少兩種開發肺炎球菌綴合物疫苗的方法：單一載體方法和混合載體方法。不同的莢膜多糖綴合物的免疫原性可取決于所用的肺炎球菌血清型和載體蛋白而變化。
4、第二種肺炎球菌疫苗方法是混合載體方法。在混合載體方法中，使用兩種或更多種蛋白質載體，而非使用單一蛋白質載體，其中來自特定血清型的莢膜多糖與第一蛋白質載體綴合并且來自不同血清型的莢膜多糖與至少第二、不同的蛋白質載體綴合。例如，葛蘭素史克(glaxosmithkline)已經開發出雙伏威(synflorix)，一種10價(血清型1、4、5、6b、7f、9v、14、18c、19f和23f)、混合載體、肺炎球菌綴合物疫苗，其使用流感嗜血桿菌蛋白d、破傷風類毒素和白喉類毒素作為蛋白質載體。在雙伏威中，血清型1、4、5、6b、7f、9v、14和23f與蛋白d綴合；血清型18c與破傷風類毒素綴合；并且血清型19f與白喉類毒素綴合[2]。由11價前體部分地去除血清型3成為雙伏威，因為所述血清型3在急性中耳炎試驗中沒有顯示出血清型特異性功效[1]。另一集團，安萬特巴斯德(aventis?pasteur)，開發了一種使用白喉類毒素和破傷風類毒素作為蛋白質載體的11價(血清型1、3、4、5、6b、7f、9v、14、18c、19f和23f)、混合載體、肺炎球菌綴合物疫苗[3]。來自血清型3、9v、14和18c的莢膜多糖在與白喉類毒素綴合時可引起比其與破傷風類毒素綴合時引起的反應更佳的反應[6]。因此，血清型3、6b、14和18c與白喉類毒素綴合并且血清型1、4、5、7f、9v、19f和23f與破傷風類毒素綴合。此混合載體、肺炎球菌疫苗的開發被終止，部分是由于技術因素以及與非細胞性百日咳疫苗一起施用時反應潛力的降低[3]。近來，血清型5和1被報道為具有從所有prevnar?13血清型觀察到的最低opa效價中的一個，其中在igg效價與opa活性之間存在關聯的相關性[4]。還有人建議對于血清型3，保護作用將需要高得多的血清igg濃度[5]。
技術實現思路
1、本申請提供了新且改進的混合載體、多價肺炎球菌綴合物組合物以及包含所述組合物的疫苗。在一個方面，混合載體、多價肺炎球菌綴合物組合物包含21種不同的肺炎球菌莢膜多糖-蛋白質綴合物，其中各肺炎球菌莢膜多糖-蛋白質綴合物包含與來自不同肺炎鏈球菌血清型的莢膜多糖綴合的蛋白質載體，其中肺炎鏈球菌血清型選自1、3、4、5、6a、6b、7f、8、9n、9v、10a、11a、12f、14、15b、18c、19a、19f、22f、23f和33f，其中蛋白質載體是crm197或破傷風類毒素，其中莢膜多糖中的四種與破傷風類毒素綴合并且其余莢膜多糖與crm197綴合，并且其中與破傷風類毒素綴合的四種莢膜多糖中的兩種選自由血清型1、3和5組成的組，并且其余兩種莢膜多糖是血清型15b和22f。
2、在混合載體、21價肺炎球菌綴合物組合物的一個實施方案中，來自血清型1、5、15b和22f的莢膜多糖與破傷風類毒素綴合，并且來自血清型3、4、6a、6b、7f、8、9n、9v、10a、11a、12f、14、18c、19a、19f、23f和33f的莢膜多糖與crm197綴合。
3、在混合載體、21價肺炎球菌綴合物組合物的另一個實施方案中，來自血清型1、3、15b和22f的莢膜多糖與破傷風類毒素綴合，并且來自血清型4、5、6a、6b、7f、8、9n、9v、10a、11a、12f、14、18c、19a、19f、23f和33f的莢膜多糖與crm197綴合。
4、在混合載體、21價肺炎球菌綴合物組合物的另一個實施方案中，來自血清型3、5、15b和22f的莢膜多糖與破傷風類毒素綴合，并且來自血清型1、4、6a、6b、7f、8、9n、9v、10a、11a、12f、14、18c、19a、19f、23f和33f的莢膜多糖與crm197綴合。
5、在另一方面，本申請提供了一種混合載體、多價肺炎球菌綴合物組合物，其包含21種不同的肺炎球菌莢膜多糖-蛋白質綴合物，其中各肺炎球菌莢膜多糖-蛋白質綴合物包含與來自不同肺炎鏈球菌血清型的莢膜多糖綴合的蛋白質載體，其中肺炎鏈球菌血清型選自1、3、4、5、6a、6b、7f、8、9n、9v、10a、11a、12f、14、15b、18c、19a、19f、22f、23f和33f，其中蛋白質載體是crm197或破傷風類毒素，其中莢膜多糖中的三種與破傷風類毒素綴合并且其余莢膜多糖與crm197綴合，并且其中與破傷風類毒素綴合的三種莢膜多糖選自由血清型1、3、5、15b和22f組成的組。在某些實施方案中，與破傷風類毒素綴合的三種莢膜多糖中的兩種選自由血清型1、3和5組成的組，并且與破傷風類毒素綴合的其余莢膜多糖是血清型15b或22f。
6、在一些實施方案中，混合載體、多價肺炎球菌綴合物組合物還包含佐劑，諸如鋁基(aluminum-bas本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種免疫原性血清型9N綴合物，其包含與來自肺炎鏈球菌血清型9N莢膜多糖綴合的蛋白質載體，其中所述蛋白質載體是CRM197，并且其中血清型9N莢膜多糖與CRM197綴合，所述血清型9N莢膜多糖的狀態是被活化具有2-19或5-10的氧化程度以及200-700kDa的分子量。
2.根據權利要求1所述的免疫原性血清型9N綴合物，其分子量為500-4000kDa。
3.根據權利要求1所述的免疫原性血清型9N綴合物，其中所述免疫源性血清型9N綴合物中所述血清型9N莢膜多糖與CRM197的比例為0.1-5(w/w)。
4.根據權利要求3所述的免疫原性血清型9N綴合物，其中所述免疫源性血清型9N綴合物中所述血清型9N莢膜多糖與CRM197的比例為0.5-2.5(w/w)。
5.根據權利要求1所述的免疫原性血清型9N綴合物，其中15-60％的所述免疫源性血清型9N綴合物在CL-4B柱中測量的Kd為0.3或更低。
6.根據權利要求1所述的免疫原性血清型9N綴合物，其中所述免疫原性血清學型9N綴合物用被活化具有2-19氧化程度的血清型9N
7.根據權利要求6所述的免疫原性血清型9N綴合物，其中所述氧化程度為5-10。
8.根據權利要求1所述的免疫原性血清型9N綴合物，其中，通過每1μg糖添加0.02-0.19μg過碘酸鹽，將所述血清型9N莢膜多糖與CRM197綴合，并且其中，所述免疫原性的血清型9N綴合物的分子量為500-4000kDa，分子量分布為15-60％，在CL-4B柱中測量的Kd為0.3或更低，糖/蛋白比為0.5-2.5。
9.一種混合載體、多價肺炎球菌綴合物組合物，其包含根據權利要求1-8中任一項所述的免疫原性血清型9N綴合物。
10.根據權利要求9所述的混合載體、多價肺炎球菌結合物組合物，還包含佐劑。
11.一種制備肺炎鏈球菌血清型9N的免疫原性綴合物的方法，所述方法包括：
12.根據權利要求11所述的方法，其中在步驟(d)中混合的CRM197與還原劑反應，以與活化的肺炎鏈球菌血清型9N莢膜多糖形成綴合物。
13.根據權利要求11所述的方法，其中在步驟(c)中，將0.02-0.19μg過碘酸鹽與1μg肺炎鏈球菌血清型9N莢膜多糖在20-25℃下反應15-20小時。
14.根據權利要求11所述的方法，其中在步驟(c)中與氧化劑反應的肺炎鏈球菌血清型9N莢膜多糖的分子量為400-900kDa。
15.根據權利要求11所述的方法，其中在步驟(d)中與CRM197混合的活化的肺炎鏈球菌血清型9N莢膜多糖的分子量為200-700kDa。
16.根據權利要求11所述的方法，其中步驟(d)中形成的免疫原性血清型9N綴合物的分子量為500-4000kDa。
17.根據權利要求11所述的方法，其中CRM197與活化的血清型9N莢膜多糖的初始投入比率為0.5-2.5:1。
18.根據權利要求11所述的方法，其中至少15-60％的免疫原性血清型9N綴合物在CL-4B柱中測量的Kd為0.3或更低。
19.根據權利要求11-18中任一項所述的方法，其中在步驟(c)中，0.02-0.19μg的過碘酸鹽與1μg的肺炎鏈球菌血清型9N莢膜多糖反應，并且其中步驟(d)中形成的免疫原性血清型9N綴合物的分子量為500-4000kDa，分子量分布為15-60％，在CL-4B柱中測量的Kd為0.3或更低，CRM197/多糖比為0.5-2.5。
20.根據權利要求11-18中任一項所述的方法，其中所述氧化程度為5-10。
...【技術特征摘要】
1.一種免疫原性血清型9n綴合物，其包含與來自肺炎鏈球菌血清型9n莢膜多糖綴合的蛋白質載體，其中所述蛋白質載體是crm197，并且其中血清型9n莢膜多糖與crm197綴合，所述血清型9n莢膜多糖的狀態是被活化具有2-19或5-10的氧化程度以及200-700kda的分子量。
2.根據權利要求1所述的免疫原性血清型9n綴合物，其分子量為500-4000kda。
3.根據權利要求1所述的免疫原性血清型9n綴合物，其中所述免疫源性血清型9n綴合物中所述血清型9n莢膜多糖與crm197的比例為0.1-5(w/w)。
4.根據權利要求3所述的免疫原性血清型9n綴合物，其中所述免疫源性血清型9n綴合物中所述血清型9n莢膜多糖與crm197的比例為0.5-2.5(w/w)。
5.根據權利要求1所述的免疫原性血清型9n綴合物，其中15-60％的所述免疫源性血清型9n綴合物在cl-4b柱中測量的kd為0.3或更低。
6.根據權利要求1所述的免疫原性血清型9n綴合物，其中所述免疫原性血清學型9n綴合物用被活化具有2-19氧化程度的血清型9n多糖制備。
7.根據權利要求6所述的免疫原性血清型9n綴合物，其中所述氧化程度為5-10。
8.根據權利要求1所述的免疫原性血清型9n綴合物，其中，通過每1μg糖添加0.02-0.19μg過碘酸鹽，將所述血清型9n莢膜多糖與crm197綴合，并且其中，所述免疫原性的血清型9n綴合物的分子量為500-4000kda，分子量分布為15-60％，在cl-4b柱中測量的kd為0.3或更低，糖/蛋白比為0.5-2.5。
9.一種混合載體、多價肺炎球菌綴合物組合物，其包含根據權利要求1-8中任一項所述的免疫原性血清型9n綴合物。
10.根據權利要求...
【專利技術屬性】
技術研發人員：安京軍，韓東蘇，金洪，金宋憲，申金煥，羅伯特·霍普弗，理查德·D·肯辛格，莫·基烏，菲利普·塔拉加，
申請(專利權)人：賽諾菲巴斯德有限公司，
類型：發明
國別省市：
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