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【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及免疫診斷,具體涉及一種微球與蛋白偶聯的方法。
技術介紹
1、納米微球一般是高分子聚合而成,例如聚苯乙烯,殼聚糖、聚丙烯酸、二氧化硅等材料聚合成納米級別的微球。納米微球被廣泛應用到體外診斷試劑中,納米微球通常通過化學鍵結合、物理吸附以及生物親和等方式偶聯蛋白。其中,化學鍵結合方式主要是通過在納米微球表面修飾一些反應基團,例如羧基、羥基、醛基等,再通過活化劑,例如edc、nhs、戊二醛、nabh3cn等活化劑將反應基團活化,再與抗體/抗原上的氨基進行化學鍵結合,即微球與抗體/抗原進行偶聯,之后再用帶有特定基團的化學物質對未進行偶聯的多余結合位點進行封閉。物理吸附法是通過納米微球與蛋白之間的非特異性相互作用,如靜電吸附、疏水相互作用等,實現兩者的偶聯。生物親和法利用生物分子之間的特異性識別作用,如抗原和抗體反應、生物素和親和素系統等,實現納米微球與蛋白的偶聯。
2、采用化學方法進行偶聯時,為了實現免疫反應后的檢測需求,納米微球中會通過包埋法、自組裝法、化學鍵合法、共聚法等方法吸附或包埋熒光染料分子、光敏劑等化學物質。而這些有機物質通常有較強疏水性,即使納米微球表面修飾有親水基團,也可能在偶聯抗體過程中因為出現團聚、沉降的現象。由于物理吸附的作用力相對較弱,在外界環境的影響下,如溫度、離子強度的變化,容易導致納米微球與蛋白的團聚。采用生物親和法中所使用的特異性生物分子,如抗體、親和素等,通常制備成本較高,這增加了整個偶聯過程的經濟成本,不適用于生產應用。
技術實現思路
...【技術保護點】
1.一種微球與蛋白偶聯的方法,其特征在于,包括如下步驟:
2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,每100mL所述清洗液中包含0.0001~0.01g十二烷基苯磺酸鈉和0.0001~0.01g膽酸鈉。
3.根據權利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述步驟1中,所述微球包括熒光微球、供體微球和受體微球中的至少一種。
4.根據權利要求1~3任一項所述的方法,其特征在于,所述步驟1和步驟3中,所述超聲清洗后還包括取所述微球離心并棄上清,所述離心的速度為10000~20000rpm,所述離心的時間為10~15min。
5.根據權利要求1~4任一項所述的方法,其特征在于,所述步驟2中,所述活化包括取所述微球和所述稀釋液超聲混勻后,再加入活化劑混合、震蕩孵育。
6.根據權利要求5所述的方法,其特征在于,所述活化劑包括EDC、NHS、戊二醛和NaBH3CN中的至少一種,所述稀釋液包括MES緩沖液、Hepes緩沖液和PBS緩沖液中的至少一種;
7.根據權利要求1~6任一項所述的方法,其特征在于,所述步驟4中,所述偶聯反應
8.根據權利要求7所述的方法,其特征在于,所述偶聯緩沖液包括Hepes緩沖液、PBS緩沖液和硼酸緩沖液中的至少一種,所述蛋白包括抗體或抗原;
9.根據權利要求1~8任一項所述的方法,其特征在于,所述步驟5中,所述封閉包括取所述微球經封閉液震蕩孵育,其中,所述封閉液包括BSA、甘氨酸、乙醇胺、酪蛋白和羧基甲氧基胺中的至少一種,所述封閉的反應溫度為25~40℃,所述封閉采用500~1000rmp震蕩孵育15~30min。
10.根據權利要求1~9任一項所述的方法,其特征在于,所述封閉后的溶液經離心、棄上清后,采用水再次超聲清洗、離心,所得沉淀與緩沖液混合保存,其中,所述緩沖液包括Tris緩沖液、Hepes緩沖液和PBS緩沖液中的至少一種,所述保存的溫度為2~8℃。
...【技術特征摘要】
1.一種微球與蛋白偶聯的方法,其特征在于,包括如下步驟:
2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,每100ml所述清洗液中包含0.0001~0.01g十二烷基苯磺酸鈉和0.0001~0.01g膽酸鈉。
3.根據權利要求1或2所述的方法,其特征在于,所述步驟1中,所述微球包括熒光微球、供體微球和受體微球中的至少一種。
4.根據權利要求1~3任一項所述的方法,其特征在于,所述步驟1和步驟3中,所述超聲清洗后還包括取所述微球離心并棄上清,所述離心的速度為10000~20000rpm,所述離心的時間為10~15min。
5.根據權利要求1~4任一項所述的方法,其特征在于,所述步驟2中,所述活化包括取所述微球和所述稀釋液超聲混勻后,再加入活化劑混合、震蕩孵育。
6.根據權利要求5所述的方法,其特征在于,所述活化劑包括edc、nhs、戊二醛和nabh3cn中的至少一種,所述稀釋液包括mes緩沖液、hepes緩沖液和pbs緩...
【專利技術屬性】
技術研發人員:趙院,李宗祥,彭琳,戴斌,楊賽男,
申請(專利權)人:三諾生物傳感股份有限公司,
類型:發明
國別省市:
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