【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
技術介紹
1、編碼作為微管相關蛋白家族的成員的蛋白質微管相關蛋白tau(mapt)的微管相關蛋白tau(mapt)基因定位于染色體區17q21.31(染色體17上的堿基對45,894,382至46,028,334)中。mapt基因由16個外顯子組成。可變mrna剪接產生六種mapt亞型，總共352-441個氨基酸。在六種mapt亞型的三種中，mapt的微管結合結構域含有三個重復區段(3r-tau亞型)，而在其它三種mapt亞型中，對應的結構域含有四個重復區段(4r-tau亞型)。
2、mapt轉錄物在全身，主要在中樞和外周神經系統中差異表達。野生型tau參與穩定神經元軸突中的微管，維持樹狀棘，和調節軸突運輸、微管動力學和細胞分裂。在大約10％的患有原發性tau蛋白病的患者中發現了mapt的致病性變體。變體主要是錯義突變，并且定位于外顯子9-13(微管結合結構域)中，其中許多變體影響外顯子10的可變剪接。
3、tau蛋白病是一類異質性的進行性神經退行性病癥，其病理上特征在于腦中存在tau聚集體。在表型上，tau蛋白病顯示出運動、認知和行為障礙的可變進展。人通常表達相等比率的3r-tau和4r-tau。在一些tau蛋白病如阿爾茨海默病中，死后腦組織的實驗證據表明tau的不溶性聚集體由3r-tau和4r-tau組成。然而，散發性(spad)和快速進行性(rpad)阿爾茨海默病最近已通過4r-tau富集的聚集體表征(參見kim等人，science?translationalmed.2022?14,eabg025
4、目前還沒有針對4r-tau蛋白病的治愈性療法，并且治療僅旨在緩解癥狀和改善患者的生活質量。因此，需要可以有效且優選地優先抑制或調節4r-tau的表達的藥劑，使得可以有效地治療患有4r-tau相關病癥如進行性核上性麻痹(psp)、皮質基底綜合征(cbd)、嗜銀顆粒病(agd)、伴早老性癡呆的多系統tau蛋白病(mstd)、球狀膠質tau蛋白病(ggt)、散發性阿爾茨海默病(spad)、快速進行性阿爾茨海默病(rpad)或另一種4r-tau蛋白病的受試者。
技術實現思路
1、本公開提供了rnai組合物，其通過靶向mapt基因的外顯子10內的特定熱點區域實現對mapt基因的4r-tau?rna轉錄物的rna誘導沉默復合物(risc)介導的切割。mapt基因可以在細胞內，例如，受試者(如人)體內的細胞。這些irna的使用使得能夠在哺乳動物中靶向降解對應基因(mapt基因)的4r-tau?mrna。
2、本公開的irna已被設計成靶向mapt基因的外顯子10內的熱點，例如，在基因的外顯子中具有錯義和/或缺失突變并且具有核苷酸修飾的組合的mapt基因。相對于對照水平，本公開的irna抑制4r-tau轉錄物的表達至少約25％、至少約30％、至少約40％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％或至少約95％，并降低含有義和反義的基因座的水平。不旨在受理論的限制，據信上述特性和特定靶位點的組合或子組合，或者這些irna的特定修飾賦予本公開的irna改善的功效、穩定性、效力、持久性和安全性。前述特性和特定靶位點的組合或亞組合，或者這些irna中的特定修飾也可相對于3r-tau亞型賦予本公開的irna對mapt基因的4r-tau亞型的增強的特異性。
3、在一個方面，本公開提供了一種用于抑制4r-tau的表達的雙鏈核糖核酸(dsrna)劑，其中所述dsrna劑包括形成雙鏈區的有義鏈和反義鏈，且其中所述有義鏈包含與seq?idno:3的核苷酸1009-1053的核苷酸序列相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸，和所述反義鏈包含與seq?id?no:4的核苷酸1007-1053的核苷酸序列相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸。在特定實施方案中，有義鏈包含seq?id?no:3的核苷酸1009-1053的至少15個連續核苷酸，并且反義鏈包含seq?id?no:4的核苷酸1007-1053的至少15個連續核苷酸。
4、在另一方面，本公開提供了一種用于抑制4r-tau的表達的dsrna劑，其中所述dsrna劑包括形成雙鏈區的有義鏈和反義鏈，其中所述反義鏈包含與編碼4r-tau的mrna的互補區，并且其中所述互補區包含與seq?id?no:4的核苷酸1007-1053的核苷酸序列相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸。在特定實施方案中，互補區包含seq?id?no:4的核苷酸1007-1053的至少15個連續核苷酸。互補區可以完全存在于seq?id?no:4的核苷酸1007-1053內。
5、在又一方面，本公開提供了一種用于抑制4r-tau的表達的dsrna劑，其中所述dsrna劑包括形成雙鏈區的有義鏈和反義鏈，其中所述反義鏈包含與編碼4r-tau的mrna的互補區，并且其中互補區包含與表7或8中的任一反義核苷酸序列相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸。在特定實施方案中，有義鏈和反義鏈的核苷酸序列包含表7或8中的任一雙鏈體的任何有義和反義核苷酸序列。
6、在根據前述任一方面的dsrna劑的一些實施方案，有義鏈包含與以下的任一核苷酸序列相差不超過三個核苷酸的至少15個連續核苷酸：seq?id?no:3的核苷酸1009-1029、1016-1036、1018-1038、1020-1040、1021-1041、1022-1042、1024-1044、1027-1047、1028-1048、1029-1049、1030-1050、1032-1052、1033-1053、1014-1048和1022-1048，并且反義鏈包含seq?id?no:4的對應核苷酸序列的至少15個連續核苷酸。
7、在一些實施方案中，反義鏈包含與選自以下的雙鏈體的任一反義鏈核苷酸序列相差不超過三個核苷酸的至少15個連續核苷酸：ad-1423276、ad-1423283、ad-1423285、ad-1423287、ad-1423288、ad-1423289、ad-1423291、ad-1423294、ad-1423295、ad-1423296、ad-1423297、ad-1423299和ad-1423300。在具體實施方案中，反義鏈包含與選自以下的雙鏈體的任一反義鏈核苷酸序列相差不超過三個核苷酸的至少15個連續核苷酸：ad-1423283、ad-1423291、ad-1423294和ad-1423295。
8、在一些實施方案中，dsrna劑能夠在表達3r-tau和4r-tau亞型兩者的細胞中將4r-tau亞型mrna表達降低至少約50％、55％、60％、65％、70％或75％，同時將3r-tau亞型mrna表達降低不超過約40％、35％、30本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于抑制4R-Tau的表達的雙鏈核糖核酸(dsRNA)劑，其中所述dsRNA劑包含形成雙鏈區的有義鏈和反義鏈，
2.根據權利要求1所述的dsRNA劑，其中所述有義鏈包含SEQ?ID?NO:3的核苷酸1009-1053的至少15個連續核苷酸，并且所述反義鏈包含SEQ?ID?NO:4的核苷酸1007-1053的至少15個連續核苷酸。
3.一種用于抑制4R-Tau的表達的雙鏈核糖核酸(dsRNA)劑，其中所述dsRNA劑包含形成雙鏈區的有義鏈和反義鏈，
4.根據權利要求3所述的dsRNA劑，其中所述互補區包含SEQ?ID?NO:4的核苷酸1007-1053的至少15個連續核苷酸。
5.根據權利要求4所述的dsRNA劑，其中所述互補區完全存在于SEQ?ID?NO:4的核苷酸1007-1053內。
6.一種用于抑制4R-Tau的表達的雙鏈核糖核酸(dsRNA)劑，其中所述dsRNA劑包含形成雙鏈區的有義鏈和反義鏈，
7.根據權利要求6所述的dsRNA劑，其中所述有義鏈和反義鏈的核苷酸序列包含表7或8中的任一雙鏈
8.根據權利要求1-7中任一項所述的dsRNA劑，其中所述有義鏈包含與SEQ?ID?NO:3的核苷酸1009-1029、1016-1036、1018-1038、1020-1040、1021-1041、1022-1042、1024-1044、1027-1047、1028-1048、1029-1049、1030-1050、1032-1052、1033-1053、1014-1048和1022-1048的任一核苷酸序列相差不超過三個核苷酸的至少15個連續核苷酸，并且所述反義鏈包含SEQ?ID?NO:4的對應核苷酸序列的至少15個連續核苷酸。
9.根據權利要求1-7中任一項所述的dsRNA劑，其中所述反義鏈包含與選自以下的雙鏈體的任一反義鏈核苷酸序列相差不超過三個核苷酸的至少15個連續核苷酸：(a)AD-2204877、AD-1597146、AD-2204883、AD-2204885、AD-2204886、AD-1597147、AD-1597148、AD-2126092、AD-2126093、AD-2204890、AD-2204891、AD-1597149和AD-2204893；或(b)AD-1423276、AD-1423283、AD-1423285、AD-1423287、AD-1423288、AD-1423289、AD-1423291、AD-1423294、AD-1423295、AD-1423296、AD-1423297、AD-1423299和AD-1423300。
10.根據權利要求9所述的dsRNA劑，其中所述反義鏈包含與選自以下的雙鏈體的任一反義鏈核苷酸序列相差不超過三個核苷酸的至少15個連續核苷酸：(a)AD-1597146、AD-1597148、AD-2126092和AD-2126093；或(b)AD-1423283、AD-1423291、AD-1423294和AD-1423295。
11.根據權利要求9所述的dsRNA劑，其中所述反義鏈包含與選自以下的雙鏈體的任一反義鏈核苷酸序列相差不超過三個核苷酸的至少15個連續核苷酸：(a)AD-1597146、AD-1597148和AD-2126092；或(b)AD-1423283、AD-1423291和AD-1423294。
12.根據權利要求1-7中任一項所述的dsRNA劑，其中所述dsRNA劑能夠在表達3R-tau和4R-tau亞型兩者的細胞中將4R-tau亞型mRNA表達降低至少約50％、55％、60％、65％、70％或75％，同時將3R-tau亞型mRNA表達降低不超過約40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或5％。
13.根據權利要求1-7中任一項所述的dsRNA劑，其中所述dsRNA劑能夠在表達3R-tau和4R-tau亞型兩者的細胞中將4R-tau亞型mRNA表達降低至少約70％，同時將3R-tau亞型mRNA表達降低不超過約30％。
14.根據權利要求1-13中任一項所述的dsRNA劑，其中所述有義鏈、所述反義鏈或者所述有義鏈和所述反義鏈兩者綴合于一個或多個親脂性部分。
15.根據權利要求14所述的dsRNA劑，其中所述親脂性部分綴合于所述dsRNA劑的所述雙鏈區中的一個或多個內部位置。
16.根據權利要求14或15所述的dsRNA劑，其中所述親脂性部分通過接頭或載體綴合。
17.根據權利要求14-16中任一項所述的d...
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.一種用于抑制4r-tau的表達的雙鏈核糖核酸(dsrna)劑，其中所述dsrna劑包含形成雙鏈區的有義鏈和反義鏈，
2.根據權利要求1所述的dsrna劑，其中所述有義鏈包含seq?id?no:3的核苷酸1009-1053的至少15個連續核苷酸，并且所述反義鏈包含seq?id?no:4的核苷酸1007-1053的至少15個連續核苷酸。
3.一種用于抑制4r-tau的表達的雙鏈核糖核酸(dsrna)劑，其中所述dsrna劑包含形成雙鏈區的有義鏈和反義鏈，
4.根據權利要求3所述的dsrna劑，其中所述互補區包含seq?id?no:4的核苷酸1007-1053的至少15個連續核苷酸。
5.根據權利要求4所述的dsrna劑，其中所述互補區完全存在于seq?id?no:4的核苷酸1007-1053內。
6.一種用于抑制4r-tau的表達的雙鏈核糖核酸(dsrna)劑，其中所述dsrna劑包含形成雙鏈區的有義鏈和反義鏈，
7.根據權利要求6所述的dsrna劑，其中所述有義鏈和反義鏈的核苷酸序列包含表7或8中的任一雙鏈體的任何有義和反義鏈核苷酸序列。
8.根據權利要求1-7中任一項所述的dsrna劑，其中所述有義鏈包含與seq?id?no:3的核苷酸1009-1029、1016-1036、1018-1038、1020-1040、1021-1041、1022-1042、1024-1044、1027-1047、1028-1048、1029-1049、1030-1050、1032-1052、1033-1053、1014-1048和1022-1048的任一核苷酸序列相差不超過三個核苷酸的至少15個連續核苷酸，并且所述反義鏈包含seq?id?no:4的對應核苷酸序列的至少15個連續核苷酸。
9.根據權利要求1-7中任一項所述的dsrna劑，其中所述反義鏈包含與選自以下的雙鏈體的任一反義鏈核苷酸序列相差不超過三個核苷酸的至少15個連續核苷酸：(a)ad-2204877、ad-1597146、ad-2204883、ad-2204885、ad-2204886、ad-1597147、ad-1597148、ad-2126092、ad-2126093、ad-2204890、ad-2204891、ad-1597149和ad-2204893；或(b)ad-1423276、ad-1423283、ad-1423285、ad-1423287、ad-1423288、ad-1423289、ad-1423291、ad-1423294、ad-1423295、ad-1423296、ad-1423297、ad-1423299和ad-1423300。
10.根據權利要求9所述的dsrna劑，其中所述反義鏈包含與選自以下的雙鏈體的任一反義鏈核苷酸序列相差不超過三個核苷酸的至少15個連續核苷酸：(a)ad-1597146、ad-1597148、ad-2126092和ad-2126093；或(b)ad-1423283、ad-1423291、ad-1423294和ad-1423295。
11.根據權利要求9所述的dsrna劑，其中所述反義鏈包含與選自以下的雙鏈體的任一反義鏈核苷酸序列相差不超過三個核苷酸的至少15個連續核苷酸：(a)ad-1597146、ad-1597148和ad-2126092；或(b)ad-1423283、ad-1423291和ad-1423294。
12.根據權利要求1-7中任一項所述的dsrna劑，其中所述dsrna劑能夠在表達3r-tau和4r-tau亞型兩者的細胞中將4r-tau亞型mrna表達降低至少約50％、55％、60％、65％、70％或75％，同時將3r-tau亞型mrna表達降低不超過約40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或5％。
13.根據權利要求1-7中任一項所述的dsrna劑，其中所述dsrna劑能夠在表達3r-tau和4r-tau亞型兩者的細胞中將4r-tau亞型mrna表達降低至少約70％，同時將3r-tau亞型mrna表達降低不超過約30％。
14.根據權利要求1-13中任一項所述的dsrna劑，其中所述有義鏈、所述反義鏈或者所述有義鏈和所述反義鏈兩者綴合于一個或多個親脂性部分。
15.根據權利要求14所述的dsrna劑，其中所述親脂性部分綴合于所述dsrna劑的所述雙鏈區中的一個或多個內部位置。
16.根據權利要求14或15所述的dsrna劑，其中所述親脂性部分通過接頭或載體綴合。
17.根據權利要求14-16中任一項所述的dsrna劑，其中通過logkow測量的，所述親脂性部分的親脂性超過0。
18.根據權利要求1-17中任一項所述的dsrna劑，其中通過所述雙鏈rna劑的血漿蛋白結合測定中的未結合部分測量的，所述雙鏈rna劑的疏水性超過0.2。
19.根據權利要求18所述的dsrna劑，其中所述血漿蛋白結合測定是使用人血清白蛋白的電泳遷移率變動測定。
20.根據權利要求1-19中任一項的dsrna劑，其中所述dsrna劑包含至少一個修飾的核苷酸。
21.根據權利要求20所述的dsrna劑，其中所述有義鏈的不超過5個核苷酸和所述反義鏈的不超過5個核苷酸是未修飾的核苷酸。
22.根據權利要求20所述的dsrna劑，其中所述有義鏈的所有核苷酸和所述反義鏈的所有核苷酸是修飾的核苷酸。
23.根據權利要求20-22中任一項所述的dsrna劑，其中所述修飾的核苷酸中的至少一個選自脫氧核苷酸、3'-末端脫氧胸苷(dt)核苷酸、2'-o-甲基修飾的核苷酸、2'-脫氧-2'-氟修飾的核苷酸、2'-脫氧修飾的核苷酸、鎖核苷酸、解鎖核苷酸、2'-5'連接的核苷酸(3'-rna)、構象限制性核苷酸、約束乙基核苷酸、無堿基核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-o-烯丙基修飾的核苷酸、2'-c-烷基修飾的核苷酸、2'-羥基修飾的核苷酸、2'-甲氧基乙基修飾的核苷酸、2'-o-烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸、氨基磷酸酯、包含非天然堿基的核苷酸、四氫吡喃修飾的核苷酸、1,5-脫水己糖醇修飾的核苷酸、環己烯基修飾的核苷酸、包含5’-硫代磷酸酯基的核苷酸、包含5’-甲基膦酸酯基的核苷酸、包含5’磷酸酯或5'磷酸酯模擬物的核苷酸、包含乙烯基膦酸酯的核苷酸、包含5’-乙烯基膦酸酯的核苷酸、二醇核酸(gna)、二醇核酸s-異構體(s-gna)、包含2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯的核苷酸、包含2'-脫氧胸苷-3'磷酸酯的核苷酸、包含2'-脫氧鳥苷-3'-磷酸酯的核苷酸和與膽甾醇基衍生物和十二烷酸雙癸酰胺基團連接的末端核苷酸；及其組合。
24.根據權利要求23所述的dsrna劑，其中所述修飾的核苷酸選自2'-脫氧-2'-氟修飾的核苷酸、2'-脫氧修飾的核苷酸、3'-末端脫氧胸苷核苷酸(dt)、鎖核苷酸、無堿基核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸、氨基磷酸酯和包含非天然堿基的核苷酸。
25.根據權利要求23所述的dsrna劑，其中所述修飾的核苷酸包括3'-末端脫氧胸苷核苷酸(dt)的短序列。
26.根據權利要求23所述的dsrna劑，其中所述核苷酸上的修飾選自2'-o-甲基修飾、2'-脫氧修飾、gna修飾和2'-脫氧-2'-氟修飾。
27.根據權利要求1-26中任一項所述的dsrna劑，其進一步包含至少一個硫代磷酸酯核苷酸間鍵。
28.根據權利要求27所述的dsrna劑，其中所述dsrna劑包含6-8個硫代磷酸酯核苷酸間鍵。
29.根據權利要求1-28中任一項所述的dsrna劑，其中每條鏈的長度不超過30個核苷酸。
30.根據權利要求1至29中任一項所述的dsrna劑，其中至少一條鏈包含至少1個核苷酸的3'突出端。
31.根據權利要求1至30中任一項所述的dsrna劑，其中至少一條鏈包含至少2個核苷酸的3'突出端。
32.根據權利要求1至31中任一項所述的dsrna劑，其中所述雙鏈區的長度為15-30個核苷酸對。
33.根據權利要求32所述的dsrna劑，其中所述雙鏈區的長度為17-23個核苷酸對。
34.根據權利要求32所述的dsrna劑，其中所述雙鏈區的長度為17-25個核苷酸對。
35.根據權利要求32所述的dsrna劑，其中所述雙鏈區的長度為23-27個核苷酸對。
36.根據權利要求32所述的dsrna劑，其中所述雙鏈區的長度為19-21個核苷酸對。
37.根據權利要求32所述的dsrna劑，其中所述雙鏈區的長度為21-23個核苷酸對。
38.根據權利要求1-37中任一項所述的dsrna劑，其中每條鏈具有19-30個核苷酸。
39.根據權利要求1-37中任一項所述的dsrna劑，其中每條鏈具有19-23個核苷酸。
40.根據權利要求1-37中任一項所述的dsrna劑，其中每條鏈具有21-23個核苷酸。
41.根據權利要求15-40中任一項所述的dsrna劑，其中一個或多個親脂性部分綴合于至少一條鏈上的一個或多個內部位置。
42.根據權利要求41所述的dsrna劑，其中所述一個或多個親脂性部分通過接頭或載體綴合于至少一條鏈上的一個或多個內部位置。
43.根據權利要求42所述的dsrna劑，其中所述內部位置包括除了所述至少一條鏈的每一端的末端兩個位置以外的所有位置。
44.根據權利要求42所述的dsrna劑，其中所述內部位置包括除了所述至少一條鏈的每一端的末端三個位置以外的所有位置。
45.根據權利要求42-44所述的dsrna劑，其中所述內部位置不包括所述有義鏈的切割位點區。
46.根據權利要求45所述的dsrna劑，其中所述內部位置包括除了從所述有義鏈的5'-端計數的位置9-12以外的所有位置。
47.根據權利要求45所述的dsrna劑，其中所述內部位置包括除了從所述有義鏈的3'-端計數的位置11-13以外的所有位置。
48.根據權利要求42-44所述的dsrna劑，其中所述內部位置不包括所述反義鏈的切割位點區。
49.根據權利要求48所述的dsrna劑，其中所述內部位置包括除了從所述反義鏈的5'-端計數的位置12-14以外的所有位置。
50.根據權利要求42-44所述的dsrna劑，其中所述內部位置包括除了從3'-端計數的所述有義鏈上的位置11-13和從5'-端計數的所述反義鏈上的位置12-14以外的所有位置。
51.根據權利要求15-50中任一項所述的dsrna劑，其中所述一個或多個親脂性部分綴合于選自以下的一個或多個內部位置：從每條鏈的5'-端計數的所述有義鏈上的位置4-8和13-18，以及所述反義鏈上的位置6-10和15-18。
52.根據權利要求51所述的dsrna劑，其中所述一個或多個親脂性部分綴合于選自以下的一個或多個內部位置：從每條鏈的5'-端計數的所述有義鏈上的位置5、6、7、15和17，以及所述反義鏈上的位置15和17。
53.根據權利要求15所述的dsrna劑，其中所述雙鏈區中的所述內部位置不包括所述有義鏈的切割位點區。
54.根據權利要求14-53中任一項所述的dsrna劑，其中所述有義鏈的長度為21個核苷酸，所述反義鏈的長度為23個核苷酸，并且所述親脂性部分綴合于所述有義鏈的位置21、位置20、位置15、位置1、位置7、位置6或位置2或者所述反義鏈的位置16。
55.根據權利要求54所述的dsrna劑，其中所述親脂性部分綴合于所述有義鏈的位置21、位置20、位置15、位置1或位置7。
56.根據權利要求54所述的dsrna劑，其中所述親脂性部分綴合于所述有義鏈的位置21、位置20或位置15。
57.根據權利要求54所述的dsrna劑，其中所述親脂性部分綴合于所述有義鏈的位置20或位置15。
58.根據權利要求54所述的dsrna劑，其中所述親脂性部分綴合于所述反義鏈的位置16。
59.根據權利要求14-58中任一項所述的dsrna劑，其中所述親脂性部分是脂族、脂環族或多脂環族化合物。
60.根據權利要求59所述的dsrna劑，其中所述親脂性部分選自脂質、膽固醇、視黃酸、膽酸、金剛烷乙酸、1-芘丁酸、二氫睪酮、1,3-雙-o(十六烷基)甘油、香葉基氧基己醇、十六烷基甘油、冰片、薄荷醇、1,3-丙二醇、十七烷基、棕櫚酸、肉豆蔻酸、o3-(油酰基)石膽酸、o3-(油酰基)膽烯酸...
【專利技術屬性】
技術研發人員：J·祖貝，J·E·法利，A·卡斯托雷諾，J·海因斯，S·甘農，
申請(專利權)人：阿爾尼拉姆醫藥品有限公司，
類型：發明
國別省市：
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