【技術實現步驟摘要】
本申請涉及生物醫學，特別涉及一種檢測膀胱癌或者尿路上皮癌的核酸組合產品及其應用。
技術介紹
1、全球膀胱癌(bc)是第10位常見的癌癥，每年約有570,000例新病例和超過210,000例死亡病例。臨床上膀胱癌常規檢查包括尿常規、b超、尿液脫落細胞學檢查和膀胱內窺鏡檢查fish等。膀胱鏡檢查可能導致尿路感染、尿道損傷、膀胱損傷等風險。普通的膀胱鏡檢使患者的依從性差，而無痛膀胱鏡檢查會有麻醉風險，收費較高，且無法避免尿路感染風險。b超、尿液脫落細胞學檢查方法靈敏度或特異性不高，無法準確識別尤其是癌癥早期患者。
2、傳統早篩手段有諸多局限性，如果想有效提高膀胱癌的早期診斷率，臨床需要有新的技術來破冰。液體活檢是近些年來備受期待的一種癌癥早診技術，通過使用非侵入性方法采集人身上的體液dna來診斷腫瘤的一種基因檢測方法，主要的生物標志物包括循環腫瘤細胞(ctc)、ctdna和外泌體(exosome)。如通過檢測尿液脫落的腫瘤細胞的基因甲基化狀態輔助評估膀胱癌的發生、復發、用藥療效等。
3、多種因素與膀胱癌的復發、進展相關，并影響患者生存。目前已有多種分子標記物用于檢查膀胱癌，但其價值非常有限。因此，需要新的分子標記檢測出膀胱癌患者(特別是進展和復發風險高的患者)。最近表觀遺傳學的標記可作為進展為癌癥高風險的評估，為治療和預防提供了新的機會。dna甲基化作為一種生物標志物近年來受到越來越多的關注，因為異常的dna甲基化是膀胱癌的主要特征，在膀胱癌的發生和進展中發揮著關鍵作用。
4、遺傳學是在基因的基礎上
5、膀胱癌的表觀遺傳學研究取得很大進展。由于抑癌基因啟動子高甲基化在膀胱癌中很常見，潛在的dna甲基化標記在血清、膀胱沖洗液、尿液樣本和癌癥組織中已被鑒定出。因此，dna甲基化可以作為膀胱早期發現、有效治療和準確預后的生物學標志物。
6、有單中心研究通過ms-qpcr檢測4個甲基化位點(vim、rassf1a、gdf15和tmeff2)來診斷膀胱癌，敏感性為82％，特異性為53％。既往研究結果表明，尿液中的dna甲基化是診斷膀胱癌的有效標志物，但其敏感性和特異性仍有待提高。
7、近日，黃健/林天歆團隊在《journal?of?clinical?investigation》雜志上由陳旭執筆發表題為《urine?dna?methylation?assay?enables?early?detection?andrecurrence?monitoring?for?bladder?cancer》的研究報道，該研究通過對3個隊列的膀胱癌測序數據進行整合分析，鑒定出26個膀胱癌特異性的甲基化位點，再通過單中心313例和前瞻性多中心175例的隊列，對2個甲基化位點進行建模和驗證，訓練組和驗證組的auc分別為0.919和0.903，對膀胱癌患者的總體準確性為86.7％，敏感性為90.0％，特異性為83.1％。
8、整體上，目前膀胱癌無創的尿液生物標志物檢測方法，無論敏感性還是特異性都不夠理想，漏診率和誤診率較高，難以滿足臨床需求，臨床實際應用率很低。
9、尿路上皮癌(urothelial?carcinoma,uc)是一種在全球范圍內較為常見的惡性腫瘤。早期診斷對于尿路上皮癌患者的預后至關重要，因為局限期尿路上皮癌患者的五年生存率可以超過90％，而一旦發生肌層浸潤或轉移，患者的生存期和生活質量會顯著下降。
10、目前，尿路上皮癌的診斷方法包括膀胱鏡檢查、尿脫落細胞學檢查、熒光原位雜交(fish)等，但這些方法存在一定的局限性。例如，膀胱鏡聯合活檢作為尿路上皮癌診斷的“金標準”，雖然準確性高，但因其侵入性強、價格昂貴，不適合作為大規模篩查手段。因此，研究者們在尋找更加便捷、無創、敏感性和特異性雙優的早期診斷方法。
11、近年來，尿液dna檢測作為一種非侵入性檢測手段顯示出巨大的潛力。通過檢測尿液中的dna拷貝數變異和甲基化變異，可以精確地預測腫瘤及正常組織。北京大學附屬第一醫院何志嵩教授團隊、上海復旦腫瘤醫院葉定偉教授團隊等與金橡醫學合作，發表了全球首個尿路上皮癌尿液早篩與療效監控產品的數據，滿足了尿路上皮癌診療路徑更準確、更便捷、無創的需求。此外，中國臨床腫瘤學會(csco)尿路上皮癌專家委員會發布了《尿路上皮癌診療指南(2020版)》，為國內尿路上皮癌診療領域提供了重要的參考依據，其中包括了對早期診斷的指導。
12、總的來說，尿路上皮癌早期診斷的研究背景集中在提高診斷的準確性、降低侵入性以及增加患者的依從性，同時強調了結合國內外的研究成果和中國的臨床實際情況，以期改善患者的預后和生活質量。
13、有鑒于此，特提出本申請。
技術實現思路
1、本申請的一個或者多個實施例提供一種檢測膀胱癌或者尿路上皮癌的核酸組合產品及其應用，該核酸組合產品能夠用于膀胱癌、尿路上皮癌的診斷，特異性好，靈敏度高。
2、本申請的一個或者多個實施例提供一種核酸組合產品，其包括檢測生物標志物的引物對和探針；
3、所述檢測生物標志物的引物對和探針包括：檢測twist1基因的引物對和探針，還包括檢測penk基因和nid2基因中一個或者多個的引物對和探針；
4、所述檢測twist1基因的引物對和探針包括：seq?id?no.1、seq?id?no.4、seq?idno.7、seq?id?no.10和seq?id?no.13中任一序列所示的正向引物，seq?id?no.2、seq?idno.5、seq?id?no.8、seq?id?no.11和seq?id?no.14中任一序列所示的反向引物，以及，seqid?no.3、seq?id?no.6、seq?id?no.9、seq?id?no.12和seq?id?no.15中任一序列所示的探針；
5、所述檢測penk基因的引物對和探針包括：seq?id?no.16、seq?id?no.19、seq?idno.22、seq?id?no.25和seq?id?no.28中任一序列所示的正向引物，seq?id?no.17、seq?idno.20、seq?本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.核酸組合產品，其包括檢測生物標志物的引物對和探針；
2.根據權利要求1所述的核酸組合產品，其中，所述檢測TWIST1基因的引物對和探針包括：
3.根據權利要求1所述的核酸組合產品，其中，所述檢測PENK基因的引物對和探針包括：
4.根據權利要求1所述的核酸組合產品，其中，所述檢測NID2基因的引物對和探針包括：
5.根據權利要求1至4中任一項所述的核酸組合產品，其中，所述檢測生物標志物的引物對和探針由所述檢測TWIST1基因的引物對和探針以及所述檢測PENK基因的引物對和探針組成，或者，由所述檢測TWIST1基因的引物對和探針以及所述檢測NID2基因的引物對和探針組成。
6.根據權利要求1至4中任一項所述的核酸組合產品，其中，所述檢測生物標志物的引物對和探針中，探針的5’端標記熒光基團，3’端標記淬滅基團。
7.根據權利要求6所述的核酸組合產品，其中，檢測不同生物標志物的探針的熒光基團的激發光波不同。
8.根據權利要求1至4以及7中任一項所述的核酸組合產品，其還包括檢測內參基因的引物對和探針。
9.根據權利要求8所述的核酸組合產品，其中，所述檢測內參基因的引物對和探針包括SEQ?ID?NO.37所示的正向引物，SEQ?ID?NO.38所示的反向引物，以及SEQ?ID?NO.39所示的探針。
10.根據權利要求9所述的核酸組合產品，其中，所述檢測內參基因的引物對和探針中，探針的5’端標記熒光基團，3’端標記淬滅基團。
11.根據權利要求10所述的核酸組合產品，其中，所述檢測內參基因的引物對和探針中的探針以及所述檢測生物標志物的引物對和探針中的探針具有不同激發光波的熒光基團。
12.權利要求1至11中任一項所述的核酸組合產品在制備膀胱癌診斷試劑盒或者尿路上皮癌診斷試劑盒中的應用。
13.試劑盒，其包括權利要求1至11中任一項所述的核酸組合產品。
14.根據權利要求13所述的試劑盒，其還包括DNA擴增試劑、將未甲基化的胞嘧啶堿基轉化為尿嘧啶的試劑、DNA提取試劑和DNA純化試劑中的一種或者多種。
...【技術特征摘要】
1.核酸組合產品，其包括檢測生物標志物的引物對和探針；
2.根據權利要求1所述的核酸組合產品，其中，所述檢測twist1基因的引物對和探針包括：
3.根據權利要求1所述的核酸組合產品，其中，所述檢測penk基因的引物對和探針包括：
4.根據權利要求1所述的核酸組合產品，其中，所述檢測nid2基因的引物對和探針包括：
5.根據權利要求1至4中任一項所述的核酸組合產品，其中，所述檢測生物標志物的引物對和探針由所述檢測twist1基因的引物對和探針以及所述檢測penk基因的引物對和探針組成，或者，由所述檢測twist1基因的引物對和探針以及所述檢測nid2基因的引物對和探針組成。
6.根據權利要求1至4中任一項所述的核酸組合產品，其中，所述檢測生物標志物的引物對和探針中，探針的5’端標記熒光基團，3’端標記淬滅基團。
7.根據權利要求6所述的核酸組合產品，其中，檢測不同生物標志物的探針的熒光基團的激發光波不同。
8.根據權利要求1至4以及7中任一項所...
【專利技術屬性】
技術研發人員：韓達，劉振彬，馬倩，
申請(專利權)人：臻智達生物技術上海有限公司，
類型：發明
國別省市：
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