【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本公開涉及治療性囊泡及其處理方法。
技術介紹
1、細胞外囊泡(evs)是細胞分泌的天然延伸顆粒存在于大多數生物體內。最近發現，evs的重要生物功能包括通過充當運輸重要細胞成分(例如可溶性蛋白質或活性酶、脂質和核酸，如mrnas、微rnas、長鏈非編碼rnas和代謝物)的貨物集合體，促進細胞間通信過程。evs的這種運輸能力促使探索利用evs將藥劑(如治療劑)運送到靶細胞或其內部。
2、與其他眾所周知的合成藥物遞送載體(如脂質體、脂質納米粒子或病毒載體等)相比，evs作為藥物載體，由于其特點提供許多優勢：i)來自細胞的天然分泌物，可進行短距離或長距離的細胞間通信；ii)期望通過與特定表面受體結合對特定器官或細胞具有趨向性；iii)由于具有多種細胞攝取途徑，其中可包括內吞、吞噬、微噬或直接與受體細胞膜融合，因此具有更高的貨物運輸效率；以及iv)由于載體的內在性質，可避免免疫清除。
3、然而，盡管有上述優點，但目前可用的evs作為藥物遞送載體仍存在許多缺點，涉及潛在毒性和較低的裝載效率，最終導致較低療效。特別是，已知的evs活性裝載策略包括電穿孔、超聲、凍融和化學品輔助裝載，其中每種方法都存在化學或生物毒性和裝載效率低下的問題。
4、因此，本領域需要提供改進的evs結合方法，以生產具有卓越裝載能力和減少副作用的evs，用于遞送治療劑或任何感興趣的分子。
技術實現思路
1、本說明書公開了制造細胞外囊泡的方法。本說明書還公開了一種試劑盒，用于在使用至少一種去
2、在一些實施例中，本說明書提供了一種處理evs的方法。所述方法包括以下步驟：將包含多個細胞外囊泡的生物樣本與貨物分子和去污劑接觸，形成去污劑混合物溶液；以及從所述去污劑混合物溶液中去除所述去污劑，得到多個裝載貨物的細胞外囊泡。
3、在一些實施例中，所述包含細胞外囊泡的生物樣本可通過同時加入所述貨物分子和所述去污劑，來接觸所述貨物分子和所述去污劑。在一些實施例中，所述包含細胞外囊泡的生物樣本可通過依次添加貨物分子和去污劑，來接觸貨物分子和去污劑。在一些實施例中，所述方法包括通過在添加所述去污劑之前，添加所述貨物分子，使包含多個ev的所述生物樣本與所述貨物分子和所述去污劑接觸的步驟。在其他實施例中，所述方法包括通過在加入貨物分子之前加入去污劑，使包含多個ev的生物樣本與貨物分子和去污劑接觸的步驟。
4、在一些實施例中，所述去污劑包括表面活性劑。在一些實施例中，所述表面活性劑為非離子表面活性劑。在一些實施例中，表面活性劑包括親水基團和疏水基團。在一些實施例中，所述表面活性劑的所述親水基團包括聚乙烯氧化物鏈。在一些實施例中，所述表面活性劑是2-[4-(2,4,4-三甲基戊-2-基)苯氧基]乙醇。在一些實施例中，所述表面活性劑是十二烷基辛二醇或八甘醇單十二烷基醚。
5、在一些實施例中，所述貨物分子包括活性藥物成分(active?pharmaceuticalingredient,api)。在一些實施例中，所述貨物分子包括小分子治療藥物。在一些實施例中，所述貨物分子包括多肽、蛋白質、脂質、核酸、碳水化合物、脂質、代謝物或其任何組合。在一些實施例中，所述核酸包括dna。在一些實施例中，所述核酸包括肽核酸(pnas)。在一些實施例中，所述核酸包括rna。在一些實施例中，所述rna選自mrna、小干擾rna(sirna)、短發夾rna(shrna)、piwi相互作用rna(pirna)、小核仁rnas(snornas)、反義rna、微rna(mi-rna)和長鏈非編碼rna(lncrna)組成的組。在一些實施例中，所述蛋白質包括抗體或酶。在一些實施例中，所述貨物分子包括反義寡核苷酸。在一些實施例中，貨物分子包括嗎啉低聚物。在一些實施例中，貨物分子包括基因編輯系統的一個或多個組件。在一些實施例中，所述基因編輯系統選自crispr/cas、鋅指核酸酶、轉錄激活因子樣效應物核酸酶(talen)組成的組。
6、在一些實施例中，所述多個細胞外囊泡包括外泌體、微囊泡、凋亡體或其任意組合。在一些優選實施例中，所述多個細胞外囊泡包括外泌體。在一些實施例中，使用透析或超離心法從去污劑混合物溶液中去除去污劑。在一些實施例中，通過將所述去污劑混合物溶液與去污劑去除劑接觸，從所述去污劑混合物溶液中去除去污劑。在一些實施例中，所述去污劑去除劑包括非極性聚合物吸附劑。在一些實施例中，所述非極性聚合物吸附劑包括聚苯乙烯珠。在一些實施例中，所述非極性聚合物吸附劑包括sm-2樹脂。
7、在一些實施例中，所述用于處理ev的方法進一步包括從細胞培養基中獲得所述多個細胞外囊泡。在一些實施例中，所述細胞培養基來源于生長多個培養細胞。在一些實施例中，多個培養細胞包括干細胞、人胚胎腎293(hek?293)細胞、hek?293t細胞或其任意組合。在一些實施例中，干細胞包括角質細胞干細胞。在一些實施例中，所述處理evs的方法進一步包括通過離心純化所述多個細胞外囊泡。
8、在一些實施例中，本說明書提供了一種用于處理細胞外囊泡的試劑盒，所述試劑盒包括本說明書一些實施例所述的去污劑和去污劑去除劑。在一些實施例中，所述試劑盒進一步包括所述貨物分子。
9、在一些實施例中，提供了一種組合物，所述組合物包含多個本說明書一些實施例所示的裝載貨物的細胞外囊泡。在一些實施例中，所述組合物還包含一種藥學上可接受的賦形劑。
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1.一種處理細胞外囊泡的方法，包括：
2.根據權利要求1所述的方法，其中所述將所述生物樣本與所述貨物分子和所述去污劑接觸，包括同時或依次加入所述貨物分子和所述去污劑。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述將所述生物樣本與所述貨物分子和所述去污劑接觸，包括在加入所述去污劑之前加入所述貨物分子，或相反。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述去污劑包括表面活性劑。
5.根據權利要求4所述的方法，其中所述表面活性劑為非離子表面活性劑。
6.根據權利要求4所述的方法，其中所述表面活性劑包括親水基團和疏水基團。
7.根據權利要求6所述的方法，其中所述親水基團包括聚乙烯氧化鏈。
8.根據權利要求4所述的方法，其中所述表面活性劑為2-[4-(2,4,4-三甲基戊-2-基)苯氧基]乙醇。
9.根據權利要求4所述的方法，其中所述表面活性劑為十二烷基辛二醇或八甘醇單十二烷基醚。
10.根據權利要求1-9中任一項所述的方法，其中所述貨物分子包括活性藥物成分(activephar
11.根據權利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述貨物分子包括小分子治療藥物。
12.根據權利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述貨物分子包括多肽、蛋白質、脂質、核酸、碳水化合物、脂質、代謝物或其任意組合。
13.根據權利要求12所述的方法，其中所述核酸包括DNA。
14.根據權利要求12所述的方法，其中所述核酸包括肽核酸(PNAs)。
15.根據權利要求12所述的方法，其中所述核酸包括RNA。
16.根據權利要求15所述的方法，其中所述RNA選自mRNA、小干擾RNA(siRNA)、短發夾RNA(shRNA)、piwi相互作用RNA(piRNA)、小核仁RNA(snoRNA)、反義RNA、微RNA(mi-RNA)和長鏈非編碼RNA(lncRNA)組成的組。
17.根據權利要求12所述的方法，其中所述蛋白質包括抗體或酶。
18.根據權利要求1-17中任一項所述的方法，其中所述貨物分子包括反義寡核苷酸。
19.根據權利要求1-18中任一項所述的方法，其中所述貨物分子包括嗎啉低聚物。
20.根據權利要求1-19中任一項所述的方法，其中所述貨物分子包括基因編輯系統的一個或多個組件。
21.根據權利要求20所述的方法，其中所述基因編輯系統選自CRISPR/Cas、鋅指核酸酶、轉錄激活因子樣效應物核酸酶(TALEN)組成的組。
22.根據權利要求1-21中任一項所述的方法，其中所述多個細胞外囊泡包括外泌體、微囊泡、凋亡體或其任意組合。
23.根據權利要求22所述的方法，其中所述多個細胞外囊泡包括外泌體。
24.根據權利要求1-23中任一項所述的方法，包括使用透析或超離心法從所述去污劑混合物溶液中去除所述去污劑。
25.根據權利要求1-24中任一項所述的方法，其中從所述去污劑混合物溶液中去除所述去污劑，包括將所述去污劑混合物溶液與去污劑去除劑接觸。
26.根據權利要求25所述的方法，其中所述去污劑去除劑包括非極性聚合物吸附劑。
27.根據權利要求26所述的方法，其中所述非極性聚合物吸附劑包括聚苯乙烯珠。
28.根據權利要求26所述的方法，其中所述非極性聚合物吸附劑包括SM-2樹脂。
29.根據權利要求1-28中任一項所述的方法，進一步包括從細胞培養基中獲得所述多個細胞外囊泡。
30.根據權利要求29所述的方法，其中所述細胞培養基是通過培養多個培養細胞得到的。
31.根據權利要求30所述的方法，其中所述多個培養細胞包括干細胞、人胚胎腎293(HEK293)細胞、HEK293T細胞或其任何組合。
32.根據權利要求31所述的方法，其中所述干細胞包括角質細胞干細胞。
33.根據權利要求1-32中任一項所述的方法，進一步包括通過離心純化所述多個細胞外囊泡。
34.一種用于處理細胞外囊泡的試劑盒，包括權利要求1-33中任一項所述的去污劑和去污劑去除劑。
35.根據權利要求34所述的試劑盒，進一步包括所述貨物分子。
36.一種組合物，包括由權利要求1-35中的任一項產生的多個裝載貨物的細胞外囊泡。
37.根據權利要求36所述的組合物，進一步包括藥學上可接受的賦形劑。
...【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.一種處理細胞外囊泡的方法，包括：
2.根據權利要求1所述的方法，其中所述將所述生物樣本與所述貨物分子和所述去污劑接觸，包括同時或依次加入所述貨物分子和所述去污劑。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述將所述生物樣本與所述貨物分子和所述去污劑接觸，包括在加入所述去污劑之前加入所述貨物分子，或相反。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中所述去污劑包括表面活性劑。
5.根據權利要求4所述的方法，其中所述表面活性劑為非離子表面活性劑。
6.根據權利要求4所述的方法，其中所述表面活性劑包括親水基團和疏水基團。
7.根據權利要求6所述的方法，其中所述親水基團包括聚乙烯氧化鏈。
8.根據權利要求4所述的方法，其中所述表面活性劑為2-[4-(2,4,4-三甲基戊-2-基)苯氧基]乙醇。
9.根據權利要求4所述的方法，其中所述表面活性劑為十二烷基辛二醇或八甘醇單十二烷基醚。
10.根據權利要求1-9中任一項所述的方法，其中所述貨物分子包括活性藥物成分(activepharmaceuticalingredient，api)。
11.根據權利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述貨物分子包括小分子治療藥物。
12.根據權利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述貨物分子包括多肽、蛋白質、脂質、核酸、碳水化合物、脂質、代謝物或其任意組合。
13.根據權利要求12所述的方法，其中所述核酸包括dna。
14.根據權利要求12所述的方法，其中所述核酸包括肽核酸(pnas)。
15.根據權利要求12所述的方法，其中所述核酸包括rna。
16.根據權利要求15所述的方法，其中所述rna選自mrna、小干擾rna(sirna)、短發夾rna(shrna)、piwi相互作用rna(pirna)、小核仁rna(snorna)、反義rna、微rna(mi-rna)和長鏈非編碼rna(lncrna)組成的組。
17.根據權利要求12所述的方法，其中所述蛋白質包括抗體或酶。
18.根據權利要求1-17中任一項所述的方法，其中所述貨物分子包括反義寡核苷酸。
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【專利技術屬性】
技術研發人員：趙彤，王睿寧，
申請(專利權)人：思珞賽生物科技香港有限公司，
類型：發明
國別省市：
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