【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及嵌合型抗原受體，尤其涉及一種嵌合型抗原受體及其制備方法和應用。
技術介紹
1、嵌合型抗原受體(chimeric?antigen?receptor，car)是一種合成受體，其主要由四個部分組成：抗原結合域、鉸鏈區、跨膜域和細胞內信號域。以嵌合型抗原受體修飾t(chimeric?antigen?receptor-modified?t,car-t)細胞為代表的免疫療法在血液系統腫瘤治療中顯示出較好的治療效果。多項臨床試驗表明以cd19為靶點的car-t細胞治療在兒童及成人復發/難治性急性b淋巴細胞白血病的完全緩解率為70％-90％以上。
2、car-t細胞在大多數實體腫瘤患者治療中無應答。究其原因，car-t細胞耗竭及微環境的免疫抑制作用是限制實體瘤治療療效的重要因素。其中，t細胞耗竭是由于t細胞長期暴露于慢性感染或抗原刺激，使其失去正常抗病毒或抗腫瘤能力的一種狀態。近年來，研究表明t細胞耗竭是導致免疫療法療效差的一個關鍵問題。目前，已有文獻基于體外及體內小鼠模型建立t細胞耗竭模型并篩選耗竭相關基因，缺乏對臨床真實世界中car-t細胞治療無效患者體內影響其耗竭的關鍵因素。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于克服現有技術中的不足，提供一種嵌合型抗原受體及其制備方法和應用，通過臨床患者標本篩選出h2afy2是抵抗car-t細胞耗竭的關鍵因素；h2afy2能夠通過抑制car-t細胞耗竭而維持其抗腫瘤能力。
2、本專利技術是通過以下技術方案實現的：一方面
3、進一步地，所述h2afy2蛋白的核苷酸序列如seq?id?no.1所示：
4、seq?id?no.1：
5、atgtcgggccggagtgggaagaagaaaatgtccaagctgtcccgttcagctagggcaggtgtcatctttccagtggggaggctgatgcgttatctgaagaaagggacgttcaagtaccggatcagcgtgggcgcccctgtctacatggcggcagtcattgagtacctggcagcggaaattctagaattggccggcaatgccgcgagggacaacaagaaggcccggatagccccgagacacatcttgctggcagttgccaatgacgaggagctcaaccagctgctaaaaggagtgaccatcgccagtggaggcgtcctgcccagaattcaccccgaactgctggccaaaaagcgagggaccaaaggcaagtcggaaacgatcctctccccacccccagagaaaagaggcaggaaggccacgtcaggcaagaagggggggaagaaatccaaggctgccaaaccacggacgtccaaaaagtccaaaccaaaggacagcgataaagaaggaacttcaaattccacctctgaagatgggccaggggatggattcaccattctgtcttctaagagccttgttctgggacagaagctgtccttaacccagagtgacatcagccatattggctccatgagagtggagggcattgtccacccaaccacagccgaaattgacctcaaagaagatataggtaaagccttggaaaaggctgggggaaaagagttcttggaaacggtaaaggagcttcgcaaatcccaaggccctttggaagtcgccgaagccgccgtcagccaatccagtggactcgcagccaaatttgtcatccactgtcacatccctcagtggggctccgacaaatgtgaagaacagcttgaagagaccatcaaaaactgcctgtcagcggcggaggacaagaagctaaagtccgtcgcgttcccgcctttccccagcggcagaaactgctttcccaaacagactgcggcccaggtgaccctcaaagccatctcagcccactttgatgactcgagcgcgtcctcgctgaagaacgtgtacttcctgctcttcgacagcgagagcatcggcatctacgtgcaggagatggccaagctcgacgccaagtag
6、通過上述技術方案，過表達之后能夠增強car-t細胞抵抗耗竭的能力，從而增強其抗腫瘤效應。
7、進一步地，所述meso的單鏈抗體scfv的氨基酸序列如seq?id?no.2所示；所述cd19的單鏈抗體scfv的氨基酸序列如seq?id?no.3所示。
8、seq?id?no.2：
9、qvqlvqsgaevkrpgasvqvscrasgysintyymqwvrqapgaglewmgvinpsgvtsyaqkfqgrvtltndtstntvymqlnsltsadtavyycarwalwgdfgmdvwgkgtlvtvssggggsggggsggggsggggsdiqmtqspstlsasigdrvtitcrasegiyhwlawyqqkpgkapklliykasslasgapsrfsgsgsgtdftltisslqpddfatyycqqysnypltfgggtkleiktttpaprpptpaptiasqplslrpeacrpaaggavhtrgldfacdseq?idno.3：
10、evklqesgpglvapsqslsvtctvsgvslpdygvswirqpprkglew
11、lgviwgsettyynsalksrltiikdnsksqvflkmnslqtddtaiyycakh
12、yyyggsyamdywgqgtsvtvssggggsggggsggggsdiqmtqttssls
13、aslgdrvtiscrasqdiskylnwyqqkpdgtvklliyhtsrlhsgvpsrfs
14、gsgsgtdysltisnleqediatyfcqqgntlpytfgggtkleit
15、進一步地，所述p2a核苷酸序列如seq?id?no.4所示。
16、seq?id?no.4：
17、ggaagcggagctactaacttcagcctgctgaagcaggctggagacgtg
18、gaggagaaccctggacct
19、又提供了一種核酸，其編碼如上述的嵌合型抗原受體。
20、還提供了一種含有上述核酸的重組表達載體或宿主細胞。
21、進一步地，本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種嵌合型抗原受體，其特征在于，從N端到C端依次拼接靶向CD19和/或MESO的單鏈抗體ScFv、CD28跨膜區、CD28胞內結構域和CD3ζ鏈、P2A自切割肽、GFP；在所述CD3ζ鏈的C端拼接有P2A核苷酸序列和能夠過表達H2AFY2蛋白的核苷酸序列。
2.根據權利要求1所述嵌合型抗原受體，其特征在于，所述H2AFY2蛋白的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
3.根據權利要求1所述嵌合型抗原受體，其特征在于，所述MESO的單鏈抗體ScFv的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；所述CD19的單鏈抗體ScFv的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。
4.根據權利要求1所述嵌合型抗原受體，其特征在于，所述P2A核苷酸序列如SEQ?IDNO.4所示。
5.一種核酸，其特征在于，其編碼如權利要求1-4任一項所述的嵌合型抗原受體。
6.一種含有權利要求5所述核酸的重組表達載體或宿主細胞。
7.根據權利要求6所述重組表達載體或宿主細胞，所述載體為慢病毒載體，其還含有復制起始位點3’LTR和5’LTR。<...
【技術特征摘要】
1.一種嵌合型抗原受體，其特征在于，從n端到c端依次拼接靶向cd19和/或meso的單鏈抗體scfv、cd28跨膜區、cd28胞內結構域和cd3ζ鏈、p2a自切割肽、gfp；在所述cd3ζ鏈的c端拼接有p2a核苷酸序列和能夠過表達h2afy2蛋白的核苷酸序列。
2.根據權利要求1所述嵌合型抗原受體，其特征在于，所述h2afy2蛋白的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
3.根據權利要求1所述嵌合型抗原受體，其特征在于，所述meso的單鏈抗體scfv的氨基酸序列如seq?id?no.2所示；所述cd19的單鏈抗體scfv的氨基酸序列如seq?id?no.3所示。
4.根據權利要求1所述嵌合型抗原受體，其特征在于，所述p2a核苷酸序列如seq?idno.4所示。
【專利技術屬性】
技術研發人員：張毅，張震，李聰聰，
申請(專利權)人：鄭州大學第一附屬醫院，
類型：發明
國別省市：
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