【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬中藥化學成分質量檢測領域，尤其涉及一種清瘟護肺顆粒指紋圖譜的檢測方法。
技術介紹
1、清瘟護肺顆粒由金銀花、連翹、浙貝母、大青葉、淡竹葉、桔梗、黨參、炒白術、茯苓、玄參、麥冬、苦杏仁、茵陳、防風、紫蘇葉、甘草共16味中藥組成，具有疏解風熱，清肺止咳，固護脾胃之功效，適用于新型冠狀病毒感染的輕癥以及冬春季急性呼吸道感染。
2、本申請人針對該產品布局兩件相關專利申請，其具體為cn111097021a公開了治療新冠肺炎輕癥、疑似者和急性呼吸道感染中藥組合物，該中藥組合物是由下述重量份中藥原材料制成：金銀花10-20g、連翹10-20g、大青葉10-20g、玄參10-20g、炒苦杏仁6-15g、浙貝母10-20g、桔梗6-15g、紫蘇葉6-15g、防風6-15g、麩炒白術10-20g、茯苓10-20g、綿茵陳10-20g、黨參10-20g、淡竹葉6-15g、麥冬10-20g、生甘草4-10g；炒苦杏仁制備方法為將苦杏仁進行炒制；麩炒白術的制法是將生白術進行加熱再加入麥麩炒制；取上述重量份中藥原材料，水煎30分鐘，取汁400ml，即可。該藥具有表里同治、清補兼施、既病防變的特點，對于治療冬春季呼吸道感染性疾病，療效確切，患者服用藥物前后改善的癥狀依次為流涕、發熱、咳嗽、咽干咽痛、咳痰、飲食差、氣短的功效作用。
3、其公開號cn202211478410.8記載一種清瘟護肺顆粒的超高效液相-質譜檢測方法，采用超高效液相色譜-四級桿/靜電場軌道阱高分辨質譜法uhplc-qexactivefocusms/ms技
4、但因清瘟護肺顆粒為中藥復方制劑，該中藥組方中含有的中藥的藥味繁多，其所含有的中藥有效成分十分復雜。目前現有的內控標準中僅有薄層鑒別的方法，但由于薄層鑒別是定性鑒別，其不能充分控制其中藥復方內在質量。中藥指紋圖譜能夠比較全面地反映中藥化學成分的整體特性，是評價中藥材真偽、優劣、質量一致性與穩定性的有效方法。將多指標成分定量法與指紋圖譜相結合，能夠同時提供中藥材的定性和定量信息，是一種有效的中藥材質量控制方法。
技術實現思路
1、本專利技術提供一種清瘟護肺顆粒指紋圖譜的檢測方法，該檢測方法生成標準指紋圖譜共確定了14個共有色譜峰，并鑒定其中7個色譜峰，分別包括新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷a、3,5-o-二咖啡酰奎寧酸、4,5-o-二咖啡酰奎寧酸、安格洛苷指標成分。且本專利技術建立的指紋圖譜檢測方法，14批次的清瘟護肺顆粒進行測定，其相似度值≥0.943。本專利技術還建立新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷a、3,5-o-二咖啡酰奎寧酸、4,5-o-二咖啡酰奎寧酸、安格洛苷7個指標指標成分的含量測定方法，其方法學結果可知，其精密度、穩定性、加樣回收率良好，可用于對清瘟護肺顆粒中藥組合物的內在質量檢測和鑒別，在工業化大生產應用中，有良好的市場前景。
2、本專利技術專利申請的技術方案為：
3、一種清瘟護肺顆粒的指紋圖譜檢測方法，所述檢測方法包括以下步驟：
4、⑴、供試品溶液的制備：稱取本專利技術清瘟護肺顆粒，加入甲醇溶解，超聲處理，冷卻，搖勻，濾過蒸干，定容，過濾，取續濾液，即得；
5、⑵、對照品溶液的制備：稱取新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷a、3,5-o-二咖啡酰奎寧酸、4,5-咖啡酰奎寧酸、安格洛苷c對照品，在加入40～60％甲醇稀釋后定容，即得；
6、⑶、色譜條件為：色譜柱為c18，流動相：0.1％甲酸水為a流動相，乙腈為b流動相；本專利技術采用梯度洗脫方法，洗脫順序為：0～14min，6％～8％b；14～15min，8％～13％b；15～17min，13％～15％b；17～20min，15％～17％b；20～23min，17％～33％b；23～27min，33％b；27～31min，33％～98％b；流速0.2～0.6ml/min；柱溫23～28℃，檢測波長為220～270nm；
7、⑷、建立指紋圖譜：將步驟⑴供試品溶液、步驟⑵對照品溶液，采用步驟⑶項下的色譜條件測定，按步驟⑶項下色譜條件進行檢測，對多批次的清瘟護肺顆粒供試品溶液進樣分析，將數據文件轉換成“aia”格式，導入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統”，生成對照指紋圖譜。
8、作為本專利技術的優選，所述檢測方法步驟⑴所述超聲頻率40～60khz、超聲功率280～320w、超聲處理時間為20～40min。
9、作為本專利技術的優選，所述檢測方法步驟⑵中甲醇的濃度為50％。
10、作為本專利技術的優選，所述檢測方法步驟⑵中新綠原酸的濃度為：0.0467～0.280mg/ml、綠原酸的濃度為：0.0375～0.2250mg/ml、隱綠原酸的濃度為：0.0395～0.2370mg/ml、連翹酯苷a的濃度為：0.0448～0.2688mg/ml、3,5-o-二咖啡酰奎寧酸的濃度為：0.00506～0.03036mg/ml、4,5-咖啡酰奎寧酸的濃度為：0.00396～0.02376mg/ml、安格洛苷c的濃度為：0.00576～0.03456mg/ml。
11、作為本專利技術的優選，所述檢測方法步驟⑵中新綠原酸的濃度為：0.2802mg/ml、綠原酸的濃度為：0.2250mg/ml、隱綠原酸的濃度為：0.2370mg/ml、連翹酯苷a的濃度為：0.1344mg/ml、3,5-o-二咖啡酰奎寧酸的濃度為：0.03036mg/ml、4,5-咖啡酰奎寧酸的濃度為：0.02376mg/ml、安格洛苷c的濃度為：0.03456mg/ml。
12、作為本專利技術的優選，所述檢測方法步驟⑶色譜柱c18型號：agilent?zorbaxeclipse?plus，色譜柱規格為250mm×4.6mm,5μm。
13、作為本專利技術的優選，所述檢測方法步驟⑶中色譜柱溫為25℃，流速為0.3ml/min，檢測波長為254nm。
14、所述多批次為10批以上。
15、作為本專利技術的優選，所述采用步驟⑶色譜條件進行檢測清瘟護肺中藥供試品溶液，將生成高效液相色譜峰與對照指紋圖譜比較，計算其相似度在0.94～1.00。
16、作為本專利技術的優選，所述檢測方法可用于清瘟護肺顆粒中藥的質量檢測及成分鑒定中應用。
17、為了進一步說明，本專利技術清瘟護肺顆粒指紋圖譜的檢測方法的創造性，現將本專利技術技術方案篩選的部分實驗內容整理如下。...
【技術保護點】
1.一種清瘟護肺顆粒的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括以下步驟：
2.如權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述檢測方法步驟⑴所述超聲頻率40~60kHz、超聲功率280~320W、超聲處理的時間20~40min。
3.如權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述檢測方法步驟⑵中甲醇的濃度為50%。
4.如權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述檢測方法步驟⑵中新綠原酸的濃度為：?0.0467～0.280mg/mL、綠原酸的濃度為：0.0375～0.2250mg/mL、隱綠原酸的濃度為：0.0395～0.2370mg/mL、連翹酯苷A?的濃度為：0.0448～0.2688mg/mL、3,5-O-二咖啡酰奎寧酸的濃度為：0.00506～0.03036mg/mL、4,5-咖啡酰奎寧酸的濃度為：0.00396～0.02376mg/mL、安格洛苷C?的濃度為：0.00576～0.03456mg/mL。
5.如權利要求4所述檢測方法，其特征在于，所述檢測方法步驟⑵中新綠原酸的濃度為：?0.2802mg/mL、綠原酸的濃度為：0.2
6.如權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述檢測方法步驟⑶色譜柱C18型號：Agilent?ZORBAX?Eclipse?Plus，色譜柱規格為250?mm×4.?6?mm,?5μm。
7.如權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述檢測方法步驟⑶中色譜柱溫為25°C，流速為0.3?mL/min，檢測波長為254?nm。
8.如權利要求1所述指紋圖譜檢測方法，其特征在于，所述采用步驟⑶色譜條件進行檢測清瘟護肺中藥供試品溶液，將生成高效液相色譜峰與對照指紋圖譜比較，計算其相似度在0.94～1.00。
9.如權利要求1~8所述的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法可用于清瘟護肺顆粒中藥的質量檢測及成分鑒定中應用。
...【技術特征摘要】
1.一種清瘟護肺顆粒的指紋圖譜檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括以下步驟：
2.如權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述檢測方法步驟⑴所述超聲頻率40~60khz、超聲功率280~320w、超聲處理的時間20~40min。
3.如權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述檢測方法步驟⑵中甲醇的濃度為50%。
4.如權利要求1所述檢測方法，其特征在于，所述檢測方法步驟⑵中新綠原酸的濃度為：?0.0467～0.280mg/ml、綠原酸的濃度為：0.0375～0.2250mg/ml、隱綠原酸的濃度為：0.0395～0.2370mg/ml、連翹酯苷a?的濃度為：0.0448～0.2688mg/ml、3,5-o-二咖啡酰奎寧酸的濃度為：0.00506～0.03036mg/ml、4,5-咖啡酰奎寧酸的濃度為：0.00396～0.02376mg/ml、安格洛苷c?的濃度為：0.00576～0.03456mg/ml。
5.如權利要求4所述檢測方法，其特征在于，所述檢測方法步驟⑵中新綠原酸的濃度為：?0.2802mg/...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張紅，龍凱花，劉洋，李曄，王園，楊允，楊栓柱，曹利平，
申請(專利權)人：陜西省中醫藥研究院，
類型：發明
國別省市：
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