【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種用于檢測t-2毒素的光電化學傳感器的制備方法，具體是以鎳酸鑭敏化的硫化銦鎘作為基底材料，以鈦酸鍶作為信號猝滅標記物標記發夾dna-h2，并且通過適配體與t-2毒素識別釋放探針dna激活dna酶識別過程以達到信號放大的目的來制備一種檢測t-2毒素的光電化學傳感器，屬于新型功能材料與生物傳感檢測。
技術介紹
1、t-2毒素被認為是a型單端孢霉毒素中毒性最強的，具有強大的毒性作用，包括消化系統毒性、神經毒性和生殖毒性；t-2毒素廣泛分布在各種谷物中，如玉米、大麥、小麥和某些谷物制品，鑒于t-2毒素對人類健康和繁衍構成的重大風險，迫切需要開發一種快速、靈敏和高選擇性的檢測方法。目前，對t-2毒素已經使用熒光、化學發光、液相色譜-串聯質譜和氣相色譜-質譜儀等進行檢測；然而，色譜分析操作復雜繁瑣；熒光分析可控性差，毒性大；化學發光免疫分析檢測時間長；本專利技術設計了一種控制釋放型光電化學傳感器，傳感器檢測靈敏，干擾少，穩定性好，對t-2毒素的檢測限達到0.021?pg/ml。
2、硫化銦鎘，一種典型的半導體納米光敏材料，制備簡單，成本低，在可見光下具有良好的光電響應，經過鎳酸鑭敏化之后，大幅度提高對可見光的吸收效率，獲得優異的光電流，為后續的測試提供光電響應基礎。作為一種功能材料，鈦酸鍶具有禁帶寬度高（3.2ev）、光催化活性優良等特點，并具有獨特的電磁性質和氧化還原催化活性，鈦酸鍶作為標記物，在檢測目標物的時候，不同濃度的t-2毒素會引入不同數量的鈦酸鍶，從而引起光電流的變化，以實現對目標物的定量檢測。同時，
3、光電化學傳感器是基于物質的光電轉換特性來確定待測物濃度的一類檢測裝置。光電化學檢測方法具有設備簡單、靈敏度高、易于微型化的特點，已經發展成為一種極具應用潛力的分析方法，在食品、環境、醫藥等領域具有廣闊的應用前景。本專利技術基于硫化銦鎘/鎳酸鑭復合材料作為基底材料，以禁帶寬度高的鈦酸鍶作為標記物，根據不同濃度的待測物對光信號強度的影響不同，實現了對t-2毒素的檢測。本專利技術制備的光電化學傳感器具有制作簡單、成本低、檢測快速和靈敏度高等特點，實現了在可見光范圍內對t-2毒素的穩定、靈敏檢測，有效克服了目前對t-2毒素檢測方法的不足。
技術實現思路
1、本專利技術目的之一是采用鎳酸鑭敏化的硫化銦鎘納米半導體光敏材料作為基底材料產生光電響應。鎳酸鑭作為一種良好的敏化劑與硫化銦鎘具有良好的匹配能級，可以提高單純光敏材料的光電性能，為后續測試提供光電流基礎。
2、本專利技術目的之二是采用三螺旋結構用來封裝探針，當t-2毒素存在時，t-2會與三螺旋結構中的適配體反應，結構被破壞，探針得到釋放，在mn2+的存在下，探針激活dnazyme，作用于電極表面的基底dna，使標記物能夠被引入，從而影響光電流響應。
3、本專利技術目的之三是構建一種拼合式的光電化學傳感器，拼合式的傳感器將無機半導體材料的光電測試與生物分子之間的特異性識別免疫反應分開，這樣光電化學測試不會對免疫反應產生干擾，且省去了生物分子對電子傳遞的阻礙作用，對基底材料光電響應要求較低，無其他干擾。
4、本專利技術目的之四是本專利技術基于硫化銦鎘/鎳酸鑭復合材料作為基底材料，以禁帶寬度高的鈦酸鍶作為標記物，根據不同濃度的待測物對光信號強度的影響不同，實現了對t-2毒素的檢測。
5、本專利技術技術方案如下：
6、1、基于一種用于檢測t-2毒素的光電化學傳感器的制備方法，包括以下步驟：
7、（1）硫化銦鎘材料的制備
8、將0.10?~?0.50?g?四水合硝酸鎘溶解于150?~?200?ml去離子水中，再緩慢加入0.30?~?0.60?g?水合硝酸銦和0.20?~?0.50?g硫代乙酰胺，在室溫下攪拌0.5?~?2?h后，將混合溶液轉移至高壓反應釜中于120?~?160?℃反應10?~?14?h，反應結束后自然冷卻至室溫，沉積物用去離子水和乙醇各洗滌3次，洗滌結束后，將得到的沉淀物在40?~?80?℃真空干燥10?~?12?h，制得黃色的硫化銦鎘材料；
9、（2）鎳酸鑭材料的制備
10、取0.30?~?0.60?g六水合硝酸鑭和0.20?~?0.30?g六水合硝酸鎳溶于80?~?100?ml去離子水中，于室溫下攪拌均勻，迅速加入20?~?30?ml濃度為0.30?~?0.40?mol/l氫氧化鈉水溶液，在室溫下攪拌10?~?30?min后，將該混合溶液于40?~?60?℃反應4?~?6?h，反應結束后自然冷卻至室溫，沉積物用去離子水和乙醇各洗滌3次，洗滌結束后，將得到的沉淀物在40?~?60?℃真空干燥，再將干燥后的樣品在600?~?650?℃下煅燒2?~?3?h，制得黑色的鎳酸鑭納米材料；
11、（3）鈦酸鍶納米材料的制備
12、取3?~?4?ml濃度為2.5?~?3.0?mol/l的鈦酸四丁酯溶于40?~?60?ml乙醇胺中，隨后向溶液中加入30?~?40?ml濃度為1?~?3?mol/l的氫氧化鈉水溶液，再逐步加入10?~20?ml濃度為1?~?3?mol/l的醋酸鍶水溶液，將上述懸浮液轉移至高壓滅菌器中于160?~?180?℃下反應20?~?24?h，產品用無水乙醇和超純水各洗滌3次，洗滌結束后，產品于50?~?60?°c下真空干燥過夜，制得鈦酸鍶納米材料；
13、（4）鈦酸鍶連接的發夾dna（h2）的制備
14、取濃度為6?~?8?μmol/l的h2在95?~?100?℃下加熱5?~?10?min，避光條件下加入濃度為3?~?6?mmol/l的三（2-氯乙基）磷酸酯?常溫下靜置2?~?4?h?，以減少二硫鍵。h2和鈦酸鍶由金屬硫醇連接，具體步驟為:?取80?~?120?μl濃度為5?~?10?mg/ml的鈦酸鍶與80?~120?μl濃度為6?~?8?μmol/l的h2混合，在35?~?40?℃下振蕩10?~?15?h，離心后加入100?~300?μl三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽和40?~?60?μl的牛血清白蛋白溶液，在35?~?40?℃下繼續振蕩30?~?60?min后，產物于4?°c下儲存備用；
15、（5）三螺旋結構與雙螺旋結構的制備
16、取6?~?10?μmol/l的h1和6?~?10?μmol/l的h2在95?~?100?℃下加熱5?~?10?min，在室溫下自然冷卻2?~?6?h，得到發夾結構，將6?~?10?μmol/l的t-2毒素的適配體和6?~?10μmol/l的探針按等比例混合在結合緩沖液中，95?~?100?℃下加熱5?~?10?min，室溫冷卻2~?8?h，形成三螺旋結構（thms），dna酶（dnazyme）與捕獲dna（cdna）按等比例體積進行混合，加熱至95?~?100?℃保持5?~?10?min后冷卻至室本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.基于一種用于檢測T-2毒素的光電化學傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.如權利要求1所述制備的光電化學傳感器的檢測方法，步驟如下：
【技術特征摘要】
1.基于一種用于檢測t-2毒素的光電化學傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步...
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