本發(fā)明專利技術(shù)公開了CENPA融合抗原及其制備方法和應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)的CENPA融合抗原含有CENPA蛋白片段和組蛋白片段，該組蛋白包括組蛋白H3、組蛋白H4中的任意一種，該CENPA融合抗原由CENPA蛋白片段和組蛋白片段連接而成，相比于單CENPA，該CENPA融合抗原的抗原性更優(yōu)，檢測硬皮病的效果更佳；同時，本發(fā)明專利技術(shù)的融合蛋白能在昆蟲細(xì)胞中以分泌的形式表達(dá)，融合蛋白的親水性很好，能夠有效應(yīng)用于CENPA抗體檢測，因此本發(fā)明專利技術(shù)的CENPA融合抗原具有良好的應(yīng)用前景。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物，具體而言，涉及一種cenpa融合抗原及其制備方法和應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、著絲粒蛋白(centromere?protein)是形成或調(diào)節(jié)著絲粒功能的一類蛋白，染色體的中心結(jié)構(gòu)附有紡錘絲和微管蛋白，從而使得染色體在細(xì)胞分裂時得以分離。目前已知的著絲粒蛋白有9種，大多數(shù)著絲粒蛋白是自身抗體和抗著絲?？贵w的靶點(diǎn)。cenpa(centromere?protein?a,cenpa)是除cenpb外中另一重要的著絲粒自身抗原，它的分子量接近于22kda，具有類組蛋白特性，與組蛋白h3和h4形成聚體結(jié)構(gòu)，參與到著絲粒染色質(zhì)的形成中。
2、系統(tǒng)性硬化病(systemic?sclerosis，ssc)是一種結(jié)締組織全身紊亂疾病，以外周動脈粥樣硬化和內(nèi)臟結(jié)構(gòu)纖維化為主要特征，可導(dǎo)致心、肺、腎和腸胃道的纖維化和功能衰退。系統(tǒng)性硬化病ssc常與特異性自身免疫抗體相關(guān)，著絲?？贵w是其中重要的一種自身免疫抗體，因此檢測cenpa抗體對于ssc輔助診斷有重要作用。
3、目前cenpa抗體的檢測主要通過免疫診斷進(jìn)行：固定在載體上的cenpa蛋白能夠特異結(jié)合cenpa抗體，進(jìn)一步通過標(biāo)記抗體識別被固定的cenpa抗體，實現(xiàn)cenpa抗體的檢測。然而，重組cenpa蛋白存在表達(dá)量低、疏水性高和檢測靈敏度低的一系列問題。
4、為此亟待發(fā)掘具有較好的cenpa抗體識別功能，且能夠有效應(yīng)用于cenpa抗體檢測的抗原。
5、鑒于此，特提出本專利技術(shù)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于提供一種cenpa融合抗原及其制備方法和應(yīng)用，該cenpa融合抗原相比于cenpa蛋白具有更高的檢測特異性和靈敏度。
2、本專利技術(shù)是這樣實現(xiàn)的：
3、根據(jù)本專利技術(shù)的一個方面，本專利技術(shù)提供了一種cenpa融合抗原，該cenpa融合抗原含有cenpa蛋白片段和組蛋白片段。
4、cenpa蛋白片段的氨基酸序列優(yōu)選如seq?id?no.3所示。
5、本專利技術(shù)提供的cenpa融合抗原中組蛋白片段來源于組蛋白h3或組蛋白h4，組蛋白h3氨基酸序列如seq?id?no.4所示，組蛋白h4氨基酸序列如seq?id?no.5所示。
6、組蛋白可連在cenpa的c端或n端。在一些優(yōu)選的實施方式中，cenpa蛋白片段融合于組蛋白片段的n端。更優(yōu)選的實施方式是，將cenpa蛋白片段和組蛋白片段通過第一連接肽連接。連接肽能夠提高融合蛋白的穩(wěn)定性、表達(dá)量和生物活性，本專利技術(shù)的第一連接肽的氨基酸序列如seq?id?no.6所示。
7、在一些優(yōu)選的實施方式中，cenpa融合蛋白還含有信號肽，信號肽可使該重組抗原能夠在昆蟲細(xì)胞中有效分泌表達(dá)。信號肽優(yōu)選為gp67信號肽，其氨基酸序列如seq?id?no.8所示，信號肽連接于融合蛋白片段的n端。
8、在一些優(yōu)選的實施方式中，cenpa融合蛋白中還含有標(biāo)簽，標(biāo)簽用于cenpa融合蛋白的分離和純化。標(biāo)簽可選擇本領(lǐng)域常規(guī)的蛋白標(biāo)簽，標(biāo)簽可以添加在cenpa融合蛋白的氨基端和/或羧基端，本專利技術(shù)選擇his標(biāo)簽(hhhhhh，seq?id?no.7)，其可以與ni+結(jié)合，且該標(biāo)簽長度較短，對cenpa融合蛋白的結(jié)構(gòu)影響較小，因此具有較好的純化效果。優(yōu)選將his標(biāo)簽連接于cenpa融合蛋白的c端。
9、在一些優(yōu)選的實施方式中，組蛋白片段和his標(biāo)簽之間通過第二連接肽連接，更利于標(biāo)簽展示。由n端至c端依次為信號肽、cenpa蛋白片段、第一連接肽、組蛋白片段、第二連接肽和his標(biāo)簽。其中的第一連接肽和第二連接肽的序列可以相同，也可以是不同的兩種序列。在一些優(yōu)選的實施方式中，第二連接肽的序列為：sgg。
10、具有上述結(jié)構(gòu)的cenpa融合蛋白表達(dá)后的氨基酸序列優(yōu)選為seq?id?no.1或seqid?no.2所示序列，抗原性更優(yōu)，能夠在昆蟲細(xì)胞中可溶性表達(dá)。
11、根據(jù)本專利技術(shù)的另一個方面，本專利技術(shù)還提供了編碼上述cenpa融合蛋白的基因。所述基因優(yōu)選為如seq?id?no.9或seq?id?no.10所示序列，或為和seq?id?no.9或seq?id?no.10所示序列90％以上同源性的序列。和seq?id?no.9或seq?id?no.10所示序列90％以上同源性的序列指的是通過核苷酸的缺失、突變、減少或增加導(dǎo)致序列與seq?id?no.9或seq?idno.10所示序列有一定的差異，但是至少90％以上相似，且具有相同功能的核酸序列。所述同源性例如可以為但不限于為90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。
12、根據(jù)本專利技術(shù)的另一個方面，本專利技術(shù)還提供了一種生物材料，該生物材料包括多核苷酸、表達(dá)盒、載體、重組微生物或細(xì)胞系中的至少一種。該生物材料能夠表達(dá)cenpa融合蛋白，和/或含有編碼cenpa融合蛋白的基因。生物材料例如為編碼cenpa融合蛋白的基因；含有上述編碼cenpa融合蛋白的基因的表達(dá)盒；或者例如為含有編碼cenpa融合蛋白的基因的載體，使上述編碼cenpa融合蛋白的基因能夠在宿主中進(jìn)行復(fù)制或者表達(dá)，或者能夠?qū)⑸鲜龌蛘线M(jìn)入宿主細(xì)胞中的介質(zhì)，載體的實例包括但不限于質(zhì)粒、噬菌粒、噬菌體和病毒基因組。生物材料還可以為重組微生物，該重組微生物中含有編碼cenpa融合蛋白的基因的載體，所述基因能夠在微生物中克隆，以增加基因的拷貝量。生物材料還可以為細(xì)胞系，所述細(xì)胞系中含有編碼cenpa融合蛋白的基因的表達(dá)載體，所述細(xì)胞系能夠表達(dá)cenpa融合蛋白。
13、根據(jù)本專利技術(shù)的另一個方面，本專利技術(shù)還提供了cenpa融合蛋白的制備方法，該制備方法包括在宿主中表達(dá)編碼cenpa融合蛋白的基因。該方法操作簡單，適合大規(guī)模生產(chǎn)cenpa融合蛋白。
14、根據(jù)本專利技術(shù)的另一個方面，本專利技術(shù)還提供了一種多肽偶聯(lián)物，其包括上述cenpa融合抗原以及與其連接的偶聯(lián)物。偶聯(lián)物包括固相載體。優(yōu)選地，固相載體選自磁微粒、板和膜中的任意一種。更加優(yōu)選地，固相載體為磁微粒。
15、根據(jù)本專利技術(shù)的另一個方面，本專利技術(shù)還提供了cenpa融合抗原、生物材料或多肽偶聯(lián)物在制備用于檢測cenpa抗體的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
16、根據(jù)本專利技術(shù)的另一個方面，本專利技術(shù)還提供了一種試劑盒，該試劑盒包含cenpa融合抗原、生物材料和多肽偶聯(lián)物中的至少一種。
17、在一些實施例中，該試劑盒包含cenpa融合抗原，以用于檢測cenpa抗體，該試劑盒可選的為elisa試劑盒，因此上述試劑盒還可以包含用于進(jìn)行elisa實驗的試劑和耗材等。
18、根據(jù)本專利技術(shù)的另一個方面，本專利技術(shù)還提供了一種非診斷目的檢測cenpa抗體的方法，其包括：將待測樣本與包被于固相載體上的cenpa融合抗原接觸，通過標(biāo)記抗體識別被cenpa融合抗原捕獲的cenpa抗體。
19、本專利技術(shù)具有以下有益效果：
20、本專利技術(shù)的cenpa融合抗原由cenpa蛋白片段和組蛋白片段連接而成，相本文檔來自技高網(wǎng)
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【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種CENPA融合抗原，其特征在于，含有CENPA蛋白片段和組蛋白片段；所述組蛋白包括組蛋白H3、組蛋白H4中的任意一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CENPA融合抗原，其特征在于，所述CENPA蛋白片段的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的CENPA融合抗原，其特征在于，所述CENPA融合抗原還含有標(biāo)簽；
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的CENPA融合抗原，其特征在于，所述CENPA融合抗原還含有信號肽；
5.生物材料，所述生物材料包括多核苷酸、表達(dá)盒、載體、重組微生物或細(xì)胞系中的至少一種；
6.權(quán)利要求1-4任一項所述CENPA融合抗原的制備方法，其特征在于，包括：在宿主細(xì)胞中表達(dá)所述CENPA融合抗原；
7.多肽偶聯(lián)物，其特征在于，包含如權(quán)利要求1-3任一項所述CENPA融合抗原，以及與其連接的偶聯(lián)物；
8.權(quán)利要求1-4任一項所述CENPA融合抗原、權(quán)利要求5所述的生物材料、或權(quán)利要求7所述的多肽偶聯(lián)物在制備用于檢測CENPA抗體的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
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p>9.一種檢測CENPA抗體的試劑盒，其特征在于，包含權(quán)利要求1-4任一項所述的CENPA融合抗原、權(quán)利要求5所述的生物材料和權(quán)利要求7所述的多肽偶聯(lián)物中的至少一種；10.一種非診斷目的檢測CENPA抗體的方法，其特征在于，包括：將待測樣本與包被于固相載體上的所述CENPA融合抗原接觸，通過標(biāo)記抗體識別被所述CENPA融合抗原捕獲的CENPA抗體。
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【技術(shù)特征摘要】
1.一種cenpa融合抗原，其特征在于，含有cenpa蛋白片段和組蛋白片段；所述組蛋白包括組蛋白h3、組蛋白h4中的任意一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的cenpa融合抗原，其特征在于，所述cenpa蛋白片段的氨基酸序列如seq?id?no.3所示；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的cenpa融合抗原，其特征在于，所述cenpa融合抗原還含有標(biāo)簽；
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的cenpa融合抗原，其特征在于，所述cenpa融合抗原還含有信號肽；
5.生物材料，所述生物材料包括多核苷酸、表達(dá)盒、載體、重組微生物或細(xì)胞系中的至少一種；
6.權(quán)利要求1-4任一項所述cenpa融合抗原的制備方法，其特征在于，包括：在宿主細(xì)胞...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：胡志強(qiáng)，徐亮，曾敏霞，
申請(專利權(quán))人：珠海麗禾醫(yī)療診斷產(chǎn)品有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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