【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及登革病毒ns1基因片段(denv-ns1)的分子生物學檢測領(lǐng)域，特別是一種登革病毒ns1基因片段裸眼檢測平臺在制備登革病毒感染篩查的試劑盒中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、登革熱(dengue?fever，df)是一種經(jīng)伊蚊傳播的急性病毒性傳染病，根據(jù)《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定，被列入乙類傳染病，其所致感染病原為登革病毒(denguevirus，denv)。據(jù)who預(yù)計，每年有超過5000萬人感染登革熱，近25億人面臨感染風險，嚴重影響人類健康和經(jīng)濟發(fā)展。近年來，世界多國出現(xiàn)登革熱疫情，發(fā)病率呈大幅度上升趨勢，主要分布在東南亞、南美洲、非洲及東、西太平洋等地區(qū)。最近幾年，我國多個地區(qū)如廣東、云南、廣西、福建、臺灣和海南陸續(xù)發(fā)生登革熱疫情。由于登革熱發(fā)病早期無典型癥狀，疾病特征信息與其他發(fā)熱疾病區(qū)別不明顯，如診治不當，嚴重者可導致死亡。目前尚無有效的疫苗可對登革熱進行預(yù)防，因此對其早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療，提高治愈率，減輕患者痛苦及經(jīng)濟負擔起到至關(guān)重要的作用。因此，開發(fā)一種簡單、高靈敏、高特異性的分析方法來診斷denv具有非常重要的意義。denv是繼黃熱病毒后，于1903年被證實的第二個人類蚊媒病毒。分別在上世紀40年代中期和80年代中后期，先后分離出了4種血清型denv及完成全基因組序列的測定。denv屬于黃病毒科黃病毒屬，近似二十面體對稱的多層足球狀結(jié)構(gòu)。由外至內(nèi)，依次為包膜蛋白(e蛋白)，膜蛋白(m蛋白)、衣殼蛋白((c蛋白))和rna基因組。denv?rna基因組長度約為10.6kb，包括四個區(qū)，5′端非編碼區(qū)
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種登革病毒ns1基因片段裸眼檢測平臺及制備方法，檢測成本低，無需復雜昂貴的大型儀器及專業(yè)人員即可實現(xiàn)裸眼對denv-ns1核酸檢測，可用于denv感染篩查。
2、本專利技術(shù)的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：
3、一種登革病毒ns1基因片段裸眼檢測平臺，所述裸眼檢測平臺包括雜交液與aunrs溶液；
4、所述雜交液是通過采用dna探針h1和h2對denv-ns1序列進行雜交鏈式反應(yīng)得到雜交反應(yīng)液；向雜交反應(yīng)液加入捕獲探針、信號放大探針以及底物顯色液；對雜交反應(yīng)液進行反應(yīng)終止操作得到的；
5、所述aunrs溶液是通過向種子生長液中加入種子溶液攪拌均勻、孵育并純化得到的；
6、所述裸眼檢測平臺在使用時采用aunrs溶液對雜交液進行aunrs蝕刻并觀察結(jié)果。
7、進一步，所述裸眼檢測平臺在使用時取雜交液加入酶標板中，100μl/每孔，再加入aunrs溶液，100μl/每孔，37℃孵育10min，裸眼觀察和拍照記錄實驗結(jié)果。
8、一種登革病毒ns1基因片段裸眼檢測平臺的制備方法，包括雜交液的制備方法與aunrs溶液的制備方法；
9、所述雜交液的制備方法包括以下步驟：
10、s01：采用dna探針h1和h2對denv-ns1序列進行雜交鏈式反應(yīng)得到雜交反應(yīng)液；
11、s02：向雜交反應(yīng)液加入捕獲探針、信號放大探針以及底物顯色液；
12、s03：對雜交反應(yīng)液進行反應(yīng)終止操作得到雜交液；
13、所述aunrs溶液的制備方法包括以下步驟：
14、(1)制備種子液與種子生長液；
15、(2)所述種子生長液中加入種子溶液攪拌均勻并孵育得到aunrs溶液；
16、(3)對aunrs溶液進行純化。
17、進一步，所述捕獲探針為磁性納米顆粒-鏈霉親和素捕獲探針(mbs-sa)。
18、進一步，所述信號放大探針為辣根過氧化物酶-鏈霉親和素信號放大探針(hrp-sa)；
19、進一步，所述底物顯色液為elisa底物顯示液，所述elisa底物顯示液為3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(tmb)底物溶液；所述底物顯色液中tmb濃度為250μg/ml。
20、進一步，所述步驟s03的反應(yīng)終止操作是向雜交反應(yīng)液加入終止液；
21、所述終止液為elisa終止液，所述elisa終止液為2m硫酸溶液。
22、進一步，所述種子液是通過向十六烷基三甲基溴化銨(ctab)溶液中依次加入氯金酸(haucl4)溶液以及硼氫化鈉溶液制得的。
23、進一步，所述種子生長液是通過向十六烷基三甲基溴化銨(ctab)溶液中依次加入5-溴水楊酸溶液、硝酸銀(agno?3)溶液、氯金酸(haucl4)溶液以及抗壞血酸(aa)溶液制得的。
24、進一步，所述步驟(2)中孵育得到的aunrs溶液為酒紅色溶液。
25、本專利技術(shù)的有益效果是：
26、一種登革病毒ns1基因片段裸眼檢測平臺及制備方法解決了檢測過程中存在依賴大型儀器、高成本、需專業(yè)人員檢測等問題，其檢測成本低，無需復雜昂貴的大型儀器及專業(yè)人員即可實現(xiàn)裸眼對denv-ns1核酸檢測，可用于登革病毒感染篩查。
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1.一種登革病毒NS1基因片段裸眼檢測平臺在制備登革病毒感染篩查的試劑盒中的應(yīng)用，其特征在于，所述裸眼檢測平臺包括雜交液與AuNRs溶液；
【技術(shù)特征摘要】
1.一種登革病毒ns1基因片段裸眼檢測平臺在制備登革病毒感染篩查的試劑...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：鄔強，喬斌，王媛媛，陳倩，趙宣，姜成龍，
申請(專利權(quán))人：海南醫(yī)學院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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