【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，尤其涉及一種突變腈水解酶afanit2-t48a及其在硫苷衍生腈降解中的應用。
技術介紹
1、常規動物飼料原料為玉米和大豆。我國是世界上大豆進口量最大的國家，對于進口大豆、玉米的依賴度非常高。在這樣的背景下，對非常規飼料原料的深入挖掘與有效利用，已成為緩解飼料資源短缺的關鍵途徑之一。菜籽粕是菜籽榨油后副產物，富含蛋白質，是動物非常規飼料的良好原料。值得注意的是，菜籽粕中含有抗營養因子硫代葡糖苷(硫苷)。硫苷本身無毒，但其降解產物如腈類化合物，對動物生長發育有害，導致菜籽粕不能直接用于大量生產動物飼料。硫苷衍生的腈類化合物主要包括3-丁烯腈和4-戊烯腈等。
2、傳統的腈類化合物水解方法需要強堿或強酸，但不適合應用在飼料加工。腈水解酶能夠高效催化腈類化合物生成無毒的羧酸和氨。因此，通過腈水解酶生物分解腈類化合物，是一種溫和、環保的可行方法。然而，目前還沒有專門針對非常規飼料用的商業腈水解酶制劑。因此，急需開發高效水解硫苷衍生的腈類化合物的腈水解酶。
技術實現思路
1、本專利技術要解決的技術問題是提供一種突變腈水解酶afanit2-t48a及其在硫苷衍生腈降解中的應用，該突變腈水解酶水解條件溫和、活性和效率較高。
2、為解決上述技術問題，本專利技術采用以下技術方案：
3、突變腈水解酶afanit2-t48a，由野生腈水解酶在第48位t進行點突變為a獲得的。
4、上述突變腈水解酶afanit2-t48a，具有序列表seq.
5、突變腈水解酶afanit2-t48a的編碼基因。
6、編碼基因，具有序列表seq.id.no.1的堿基序列。
7、含有上述編碼基因的重組質粒。
8、由上述重組質粒構建的重組基因工程菌。
9、上述突變腈水解酶afanit2-t48a的制備方法，將上述重組基因工程菌進行培養并誘導腈水解酶突變體的表達，所得培養液分離純化即得突變腈水解酶afanit2-t48a。
10、突變腈水解酶afanit2-t48a在硫苷衍生腈降解中的應用。
11、根硫苷衍生腈為3-丁烯腈、4-戊烯腈。
12、降解的反應條件為ph?7.5、溫度50℃、
13、針對目前高效水解硫苷衍生的腈類化合物的腈水解酶缺乏的問題，專利技術人采用定點突變技術獲得了一種突變腈水解酶afanit2-t48a，由野生腈水解酶在第48位t進行點突變為a獲得的。本專利技術突變腈水解酶基因全長為1068bp，從第一個堿基起至第1068個堿基止，起始密碼子為atg，終止密碼子為taa。具體是將來自糞產堿菌(alcaligenes?faecalis)的腈水解酶第48位進行點突變而得，然后將突變基因克隆到表達載體上，產生重組突變質粒。繼而，將獲得的重組突變質粒轉入大腸桿菌bl21(de3)感受態細胞中。研究表明，本專利技術的突變腈水解酶水解條件溫和、活性和效率較高，在商業腈水解酶制劑應用方面具有潛力。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.突變腈水解酶AfaNit2-T48A，其特征在于由野生腈水解酶在第48位T進行點突變為A獲得的。
2.根據權利要求1所述的突變腈水解酶AfaNit2-T48A，其特征在于具有序列表SEQ.ID.NO.2所述的氨基酸序列。
3.權利要求1所述突變腈水解酶AfaNit2-T48A的編碼基因。
4.根據權利要求3所述的編碼基因，其特征在于具有序列表SEQ.ID.NO.1所述的堿基序列。
5.含有權利要求3所述編碼基因的重組質粒。
6.由權利要求5所述重組質粒構建的重組基因工程菌。
7.權利要求1所述突變腈水解酶AfaNit2-T48A的制備方法，其特征在于：將權利要求6所述的重組基因工程菌進行培養并誘導腈水解酶突變體的表達，所得培養液分離純化即得突變腈水解酶AfaNit2-T48A。
8.權利要求1所述突變腈水解酶AfaNit2-T48A在硫苷衍生腈降解中的應用。
9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于：所述硫苷衍生腈為3-丁烯腈、4-戊烯腈。
10.根據權利要求9所述的應
...【技術特征摘要】
1.突變腈水解酶afanit2-t48a，其特征在于由野生腈水解酶在第48位t進行點突變為a獲得的。
2.根據權利要求1所述的突變腈水解酶afanit2-t48a，其特征在于具有序列表seq.id.no.2所述的氨基酸序列。
3.權利要求1所述突變腈水解酶afanit2-t48a的編碼基因。
4.根據權利要求3所述的編碼基因，其特征在于具有序列表seq.id.no.1所述的堿基序列。
5.含有權利要求3所述編碼基因的重組質粒。
6.由權利要求5所述重組質粒構建的重...
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。