【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥，具體涉及一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法及應用。
技術介紹
1、環抱菌素a(cyclosporina，csa)是一種能夠與親環蛋白家族結合的免疫抑制劑，通過與線粒體中的cypd蛋白結合，抑制線粒體通透性轉換孔(mptp)的開放。有研究表明，mptp的開放和過表達是缺血性損傷過程中線粒體功能障礙級聯的重要上游信號通路，能夠引起三磷酸腺苷(atp)產生減少、ros過量增加，最終導致細胞功能失調甚至死亡。因此，mptp被認為是缺血性疾病藥物作用的潛在靶點。csa具有明確的抑制mptp開放作用，能夠減少線粒體的損傷，改變線粒體atp能量代謝，維持線粒體穩態，可能是減輕器官缺血再灌注損傷的有效策略。
2、腦缺血再灌注損傷(ciri)的藥物治療面臨多個連續障礙(血腦屏障(bbb)、病變部位識別等)使藥物遞送具有挑戰性。對ciri的腦部微環境研究證明，ciri后會出現繼發性炎癥反應，包括將白細胞募集到卒中核心和半暗帶區。中性粒細胞(pmn)是人類中最豐富的白細胞(50％至70％)，其通過吞噬、脫顆粒等方式對感染或組織損傷的先天免疫反應行使功能。因此可利用pmn負載藥物分子，憑借其自身的趨炎性和跨bbb作用，自主引導靶向遞送藥物應用于具有炎癥反應的ciri過程。另外，ciri過程中，缺血損傷部位金屬基質蛋白酶mmp-9含量顯著上升，是潛在的藥物釋放觸發因素。
3、基于此，我們提出一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法及應用。
技術實現思路>
1、針對現有技術的不足，本專利技術提出一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法及應用。
2、本專利技術的目的可以通過以下技術方案實現：
3、一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法，所述制備方法包括下述步驟：
4、s1、將具有靶向中性粒細胞的nebp肽(序列為cgeaipmsippevk)、mmp9響應肽(序列為pvglig)和線粒體靶向的多肽ss-31(序列為h2n-darg-dmt-lys-phe-nh2)進行偶聯得到具有mmp9響應并同時靶向中性粒細胞和線粒體的多肽nemss(序列為darg-dmt-lys(cys)-phe-pvglig-geaipmsi?ppevk)；
5、s2、以dspe-peg2k-maleimide為原料，在dspe-peg2k-maleimide表面修飾具有mmp9響應并靶向中性粒細胞和線粒體的多肽nemss形成聚合物；
6、s3、將聚合物與環抱菌素a(csa)、cy5染料和膽固醇、脂質混溶于有機溶劑中，真空旋干成薄膜，再加入磷酸鹽緩沖液pbs，超聲10分鐘，得到中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統。
7、優選地，所述nebp肽、mmp9響應肽和線粒體靶向的多肽ss-31的摩爾比為1：1：1。
8、優選地，所述dspe-peg2k-maleimide和nemss多肽的摩爾比為1：1。
9、優選地，所述聚合物、csa藥物、cy5染料的摩爾比為5：1：0.2
10、優選地，所述有機溶劑為二氯甲烷。
11、一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統由上述所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法制備而成。
12、優選地，所述csa-m-neu-nps納米藥物呈現類球形結構，所述csa-m-neu-nps納米藥物的粒徑為90～200nm。
13、上述所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統在制備治療腦缺血再灌注損傷的藥物中的應用。
14、上述一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統在制備靶向中性粒細胞的藥物載體中的應用。
15、本專利技術的有益效果：
16、1、本專利技術通過動物實驗、免疫熒光、磁共振成像、透射電鏡、細胞實驗技術手段，成功構建一種具有mmp-9響應的中性粒細胞和線粒體的靶向多肽nemss，并裝載mptp抑制劑csa自組裝形成csa-m-neu-nps納米藥物，通過細胞實驗驗證了其靶向中性粒細胞和線粒體的能力，為治療與中性粒細胞相關的腫瘤、炎癥、免疫等疾病提供新思路；同時驗證了csa-m-neu-nps納米藥物對腦缺血再灌注損傷的治療具有積極效果。
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1.一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法，其特征在于，所述制備方法包括下述步驟：
2.根據權利要求1所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法，其特征在于，所述NEBP肽、MMP9響應肽和線粒體靶向的多肽SS-31的摩爾比為1：1：1。
3.根據權利要求1所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法，其特征在于，所述DSPE-PEG2K-Maleimide和NEMSS多肽的摩爾比為1：1。
4.根據權利要求1所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法，其特征在于，所述聚合物、CsA藥物、Cy5染料的摩爾比為：5：1：0.2。
5.根據權利要求1所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法，其特征在于，所述有機溶劑為二氯甲烷。
6.一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統由權利要求1～5任一所述的制備方法制備而成。
7.根據權利要求6所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統，其特征在于，所述CsA-M-Neu-NPs納米藥物呈現類球形結構，所述CsA-M-Neu-NPs脂質納米
8.如權利要求6或7所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統在制備治療腦缺血再灌注損傷的藥物中的應用。
9.如權利要求6或7所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統在制備治療炎癥相關疾病的藥物中的應用。
10.如權利要求6或7所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統在制備靶向中性粒細胞的藥物載體中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法，其特征在于，所述制備方法包括下述步驟：
2.根據權利要求1所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法，其特征在于，所述nebp肽、mmp9響應肽和線粒體靶向的多肽ss-31的摩爾比為1：1：1。
3.根據權利要求1所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法，其特征在于，所述dspe-peg2k-maleimide和nemss多肽的摩爾比為1：1。
4.根據權利要求1所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法，其特征在于，所述聚合物、csa藥物、cy5染料的摩爾比為：5：1：0.2。
5.根據權利要求1所述的一種中性粒細胞級聯靶向的藥物遞送系統制備方法，其特征在...
【專利技術屬性】
技術研發人員：牟青春，唐龍光，柏合，
申請(專利權)人：蘇州大學附屬第二醫院，
類型：發明
國別省市：
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