【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物醫(yī)藥，尤其涉及艾曲波帕(eltrombopag)作為smyd4蛋白(甲基轉(zhuǎn)移酶)靶向抑制劑的應(yīng)用及其在抗腫瘤(尤其是治療肝癌)中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、甲基化是參與表觀遺傳調(diào)控的一種主要細(xì)胞修飾類型，，在幾乎所有生物過程中都發(fā)揮著關(guān)鍵作用。dna和蛋白質(zhì)的甲基化異常會導(dǎo)致包括癌癥在內(nèi)的病理變化。具有甲基轉(zhuǎn)移酶或去甲基轉(zhuǎn)移酶功能的蛋白質(zhì)是甲基化的核心調(diào)控因子，被認(rèn)為是有前景的治療靶標(biāo)。
2、含set和mynd結(jié)構(gòu)域的蛋白(smyd)家族是一類特殊的蛋白賴氨酸脫甲基轉(zhuǎn)移酶。mynd結(jié)構(gòu)域是一種保守的鋅結(jié)構(gòu)，由7個保守的半胱氨酸殘基和1個組氨酸殘基組成，介導(dǎo)蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用。而set結(jié)構(gòu)域在結(jié)構(gòu)上被mynd結(jié)構(gòu)域分為兩部分，將甲基基團(tuán)從s-腺苷蛋氨酸轉(zhuǎn)移到目標(biāo)蛋白質(zhì)的賴氨酸殘基上。目前已發(fā)現(xiàn)smyd家族共有五個成員(smyd1、smyd2、smyd3、smyd4和smyd5)，其中smyd1、smyd2和smyd3已被廣泛研究。與smyd相關(guān)的疾病包括：smyd1基因的轉(zhuǎn)錄被抑制從而導(dǎo)致心力衰竭，smyd1是心臟離子通道形成所必需的；smyd2在食管鱗狀細(xì)胞癌或p53相關(guān)癌癥中過度表達(dá)；smyd3在超過14種癌癥(包括乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、肺癌和胰腺癌等)中過表達(dá)導(dǎo)致預(yù)后不良。現(xiàn)有小分子抑制劑(如lly-507和bci-121)分別靶向smyd2和smyd3，可有效抑制腫瘤生長。
3、smyd4與其他smyd家族蛋白具有高度的序列同源性，其可能與心臟發(fā)育和腫瘤發(fā)生有關(guān)。smyd
4、虛擬篩選是高通量篩選(hts)的一種重要工具，用于識別潛在的生物活性化合物，已被廣泛應(yīng)用于藥物開發(fā)領(lǐng)域，其可以探索靶向蛋白結(jié)合口袋中具有高結(jié)合能的小分子。分子靶向藥物的應(yīng)用越來越普遍，虛擬篩選通常用于尋找針對腫瘤治療的特殊蛋白的小分子。計算機(jī)科學(xué)的快速發(fā)展使得預(yù)測沒有晶體結(jié)構(gòu)報道的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)成為可能。分子對接方法在藥物設(shè)計中取得了巨大成功，已成為藥物設(shè)計中最重要的方法之一。
5、作為一種甲基轉(zhuǎn)移酶蛋白，smyd4蛋白可能具有小分子的潛在活性位點。但迄今為止，還沒有針對smyd4蛋白的小分子先導(dǎo)化合物的研究報道。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的至少一個問題，基于已有研究發(fā)現(xiàn)smyd4參與了腫瘤的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移，但目前還沒有關(guān)于smyd4的靶向抑制劑或藥物的報道，本專利技術(shù)篩選了可能靶向smyd4的小分子，并驗證了艾曲波帕(eltrombopag)在腫瘤治療(尤其是抗肝癌)中的作用。本專利技術(shù)通過虛擬篩選和功能分析在2110個獲得fda批準(zhǔn)的小分子中篩選了與smyd4蛋白結(jié)合的小分子，其中艾曲波帕顯示了smyd4蛋白的靶向能力，且其與smyd4蛋白的結(jié)合能力最強(qiáng)；經(jīng)過實驗驗證發(fā)現(xiàn)：艾曲波帕抑制了肝癌體外和體內(nèi)的癌細(xì)胞增殖和腫瘤生長，其是通過增強(qiáng)甲狀腺激素受體互作因子12(trip12)對smyd4蛋白的泛素化作用，誘導(dǎo)smyd4蛋白降解，從而實現(xiàn)抗腫瘤作用，這表明艾曲波帕可作為一種smyd4蛋白靶向抑制劑，是治療腫瘤的新型先導(dǎo)化合物。
2、為實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案：
3、本專利技術(shù)的第一個方面是提供艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽作為smyd4蛋白靶向抑制劑的應(yīng)用，其中所述艾曲波帕的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下所示：
4、
5、上述“藥學(xué)上可接受的鹽”為化合物與酸形成的酸加成鹽，或為化合物與堿形成的堿加成鹽；其中，所述酸包括但不限于：鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、酒石酸、水楊酸、檸檬酸、蘋果酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、乳酸、丙酮酸、馬來酸、琥珀酸；所述堿加成鹽包括從無機(jī)堿衍生的鹽和從有機(jī)無毒堿衍生的鹽，所述從無機(jī)堿衍生的鹽包括但不限于：鋁、銨、鉀、鈉、鐵、銅、鈣、亞鐵、鎂、鋰、錳，所述從有機(jī)無毒堿衍生的鹽包括但不限于：一級、二級和三級胺鹽、取代胺包括天然取代胺、環(huán)胺、乙醇胺、n-乙基嗎啉、n-乙基哌啶、葡萄胺。具體地，上述艾曲波帕藥學(xué)上可接受的鹽包括艾曲波帕乙醇胺鹽。
6、進(jìn)一步地，所述艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽與所述smyd4蛋白結(jié)合，用于誘導(dǎo)smyd4蛋白的降解。
7、進(jìn)一步地，所述艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽通過增強(qiáng)trip12對smyd4的泛素化從而促進(jìn)smyd4降解。
8、本專利技術(shù)的第二個方面是smyd4蛋白靶向抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述smyd4蛋白靶向抑制劑用于降低腫瘤組織中smyd4蛋白的表達(dá)水平。
9、進(jìn)一步地，所述腫瘤細(xì)胞包括肝癌細(xì)胞，所述腫瘤組織包括肝癌組織。可理解的是，也可包括受smyd4的表達(dá)水平影響的其他類型的腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織。
10、進(jìn)一步地，所述smyd4蛋白靶向抑制劑為如第一個方面中任一所述的艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽。可理解的是，上述smyd4蛋白靶向抑制劑也可為其他可降低腫瘤組織中smyd4蛋白的表達(dá)水平的任一合適的小分子或大分子。
11、進(jìn)一步地，所述應(yīng)用為艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽作為smyd4蛋白靶向抑制劑在制備用于治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
12、進(jìn)一步地，所述艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽具有以下作用的中的至少一種：抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和凋亡、減緩腫瘤生長、抑制肝細(xì)胞癌生長。
13、進(jìn)一步地，所述艾曲波帕對huh7細(xì)胞的ic50值為9.042μg/ml，對hepa1-6細(xì)胞的ic50值為7.734μg/ml。
14、進(jìn)一步地，所述艾曲波帕的體內(nèi)施用濃度為2.5～5mg/kg小鼠，具體可為2.5、3、3.5、4、4.5、5mg/kg等。上述艾曲波帕的施用頻率為每周兩次。
15、進(jìn)一步地，所述艾曲波帕的體外施用濃度為2.5～20μg/ml，具體可為2.5、5、7.5、10、12.5、15、17.5、20μg/ml等。
16、進(jìn)一步地，所述藥物的劑型包括：液體劑、固體劑、乳劑等。具體可為艾曲波帕片劑或粉末劑；在施用時可將其溶于pbs溶液或其他合適的溶劑制成液體劑。
17、進(jìn)一步地，所述藥物還包含藥學(xué)上可接受的載體。可理解的是，基于藥物劑型的不同，其所選擇的載體或賦形劑的種類和用量也進(jìn)行適應(yīng)性調(diào)整選擇，上述載體或賦形劑均為本領(lǐng)域常規(guī)常用的試劑。
18、上述“藥學(xué)上可接受的載體”為一種或多種相容性固體或液體填料或乳膏狀本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
1.艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽作為SMYD4蛋白靶向抑制劑的應(yīng)用，其特征在于，所述艾曲波帕的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下所示：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽與所述SMYD4蛋白結(jié)合，用于誘導(dǎo)SMYD4蛋白的降解。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽通過增強(qiáng)TRIP12對SMYD4的泛素化從而促進(jìn)SMYD4降解。
4.SMYD4蛋白靶向抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述SMYD4蛋白靶向抑制劑用于降低腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織中SMYD4蛋白的表達(dá)水平。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤細(xì)胞包括肝癌細(xì)胞，所述腫瘤組織包括肝癌組織。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述SMYD4蛋白靶向抑制劑為如權(quán)利要求1～3中任一所述的艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽作為SMYD4蛋白靶向抑制劑在制備用于治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
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9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述艾曲波帕對Huh7細(xì)胞的IC50值為9.042μg/mL，對Hepa1-6細(xì)胞的IC50值為7.734μg/mL。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述艾曲波帕的體內(nèi)施用濃度為2.5～5mg/kg小鼠，體外施用濃度為2.5～20μg/mL。
...【技術(shù)特征摘要】
1.艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽作為smyd4蛋白靶向抑制劑的應(yīng)用，其特征在于，所述艾曲波帕的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下所示：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽與所述smyd4蛋白結(jié)合，用于誘導(dǎo)smyd4蛋白的降解。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述艾曲波帕或其藥學(xué)上可接受的鹽通過增強(qiáng)trip12對smyd4的泛素化從而促進(jìn)smyd4降解。
4.smyd4蛋白靶向抑制劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述smyd4蛋白靶向抑制劑用于降低腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織中smyd4蛋白的表達(dá)水平。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤細(xì)胞包括肝癌細(xì)胞，所述腫瘤組織包括肝癌組織。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述smyd...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王俊杰，劉淑鵬，李家樂，張放，王啟星，
申請(專利權(quán))人：上海市第十人民醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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