【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物生殖，更具體地說，特別涉及一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法。
技術介紹
1、在牛羊繁殖領域，提高繁殖效率一直是研究者們關注的重點問題。繁殖效率的高低主要取決于卵母細胞的成熟質量、受精率以及后續胚胎發育的潛能等多個關鍵環節。
2、卵母細胞作為生殖過程的核心要素之一，其成熟質量對整個繁殖過程至關重要。高質量的卵母細胞能夠為受精以及胚胎發育提供良好的基礎，然而，在自然條件下或傳統的繁殖操作中，牛羊卵母細胞的成熟往往受到多種因素的限制。例如，在體內環境中，復雜的生理條件和外界因素的干擾可能導致卵母細胞的成熟過程不夠理想；在體外操作中，由于難以完全模擬體內的適宜環境，卵母細胞的成熟率也不盡如人意。
3、從細胞層面來看，蛋白質合成和rna合成在卵母細胞的成熟過程中扮演著關鍵角色。蛋白質的合成對于卵母細胞的生長、發育以及功能的完善不可或缺，但過度的蛋白質合成或者蛋白質合成過程的異常可能會對卵母細胞的成熟產生負面影響。而rna合成的正常進行則是保證細胞遺傳信息傳遞和表達的基礎。
4、從傳統的牛羊繁殖技術來看，在卵母細胞的培養、受精以及受精卵的培養等環節，雖然已經有了一些常規的方法，但這些方法在提高繁殖效率方面仍存在一定的局限性。例如，在卵母細胞培養過程中，對于溫度、氣體環境等條件的控制不夠精準，可能導致卵母細胞的生長和發育受到影響。在受精環節，精子的處理方法可能無法高效地分離出活力好、形態正常的精子，從而影響受精的成功率。
5、另外，在牛羊繁殖領域，對于能夠
6、在這樣的背景下，研究一種新的、高效且低毒的方法來優化牛羊卵母細胞成熟周期顯得尤為必要。放射菌酮作為一種可逆的、低毒的蛋白質合成抑制劑，具有獨特的性質，它能夠抑制牛羊卵母細胞蛋白質的合成但不抑制rna的合成，為優化牛羊卵母細胞成熟周期提供了新的思路和可能性。
技術實現思路
1、為了解決上述技術問題，本專利技術提供一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，以解決上述的問題。
2、一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，調控溶液由1-50微克/毫升放射菌酮組成，包括以下步驟：
3、s1：將40-50枚牛羊卵母細胞培養在含有500微升調控溶液中，進行培養；
4、s2：預處理的培養完成后，將牛羊卵母細胞轉入正常的、不含放射菌酮，但添加促卵泡素(fsh)，促黃體素(lh)及雌二醇(e2)的成熟液中培養18-22小時。
5、優選的，成熟液由m199培養液與10％體積的血清或牛血清白蛋白，或其它類似替代物組成。
6、優選的，成熟液中不含有fsh和lh激素。
7、優選的，培養條件為在38.5℃、5％co2的培養箱中培養22-24小時。
8、優選的，當牛羊卵母細胞成熟完成后，將牛羊卵母細胞轉入正常的受精液中，包括以下步驟：
9、第一步：冷凍精子在40℃水浴中解凍10-15秒，在受精液中稀釋后，1500轉/分鐘，離心10分鐘，去上清，混勻試管底部的精子后小心加入到45％、90％percoll分離液的上層，進行密度梯度離心1500轉/分鐘10分鐘；
10、第二步：取試管底部的精子，小心加入含有牛羊卵母細胞的液滴中，使有效精子的終濃度達到6×106/毫升，然后將含有卵子與精子的培養皿送回培養箱，在38.5℃、5％co2、100％濕度的條件下，培養24小時。
11、優選的，24小時后，將牛羊卵母細胞在改進型sof(輸卵管合成液+氨基酸)液清洗2-4次，然后加入新鮮的改進型sof培養液，于38.5℃、5％co2和5％o2條件下培養，此后，每隔2天，更換新鮮的改進型sof培養液，至第8天。
12、優選的，改進的sof培養液為在原有的sof培養液中加入了1％必需和非必需氨基酸。
13、優選的，所述放射菌酮為可逆的、低毒的、蛋白質的合成抑制劑。
14、優選的，所述調控溶液抑制牛羊卵母細胞蛋白質的合成，但不抑制牛羊卵母細胞rna的合成。
15、與現有技術相比，本專利技術具有如下有益效果：
16、1、提高卵母細胞成熟率方面：本專利技術能夠有效提高牛羊卵母細胞的成熟率。通過精準地使用放射菌酮作為蛋白質合成抑制劑，在特定濃度范圍內對卵母細胞的蛋白質合成進行調控，同時不影響rna的合成，這為卵母細胞的成熟創造了獨特的條件。再結合適宜的培養溫度(38.5℃)、5％co2的氣體環境以及合理的成熟液成分(包含促卵泡素、促黃體素及雌二醇等激素)，從多個方面協同作用。經過預處理和成熟液培養后，通過顯微鏡觀察和染色方法，可以清晰地看到卵母細胞成熟度的提升，成熟的卵母細胞具備明顯特征，如第一極體排出、細胞質均勻和細胞核清晰等，從而使得成熟率得到顯著提高。
17、2、提升受精率方面：在受精環節，該專利技術具有顯著的有益效果。首先，對冷凍精子的解凍處理進行了優化，在40℃水浴中解凍10-15秒，能夠快速恢復精子活力且減少損傷。然后，通過45％和90％濃度的percoll分離液進行密度梯度離心，有效地將活力較好、形態正常的精子分離出來。接著，將經過處理的精子以特定濃度(6×106/毫升)加入含有牛羊卵母細胞的液滴中，避免了多精受精現象。在38.5℃、5％co2、100％濕度的條件下進行培養，為精子和卵子的結合提供了適宜的環境。通過顯微鏡觀察受精卵中原核的數量和形態以及分子生物學方法檢測，可判斷受精情況，使得受精率得到有效提升。
18、3、促進胚胎發育率方面：此專利技術對受精卵的培養條件進行了精心設計，從而大大促進了胚胎發育率。在受精卵培養階段，先在改進型sof(輸卵管合成液+氨基酸)液中清洗2-4次，去除雜質和有害物質。之后在38.5℃、5％co2和5％o2條件下培養，該培養液和培養條件專門為受精卵發育而設。每隔2天更換新鮮的改進型sof培養液，確保受精卵在發育過程中營養充足、環境穩定。通過觀察胚胎發育的不同階段，如2-細胞期、4-細胞期等，以及利用影像學技術和生化指標檢測，可評估胚胎發育情況，為胚胎的正常發育提供了有力保障。
19、4、實驗環境穩定性方面：在整個實驗過程中，對溫度和氣體環境的嚴格控制保證了實驗環境的穩定性。無論是卵母細胞的培養、精子的處理還是受精和受精卵的培養，都將溫度嚴格控制在特定范圍內，如卵母細胞和受精卵的培養溫度穩定在38.5℃，這近似牛羊體內生理溫度，有利于細胞正常代謝和發育。同時，對培養箱進行定期校準和維護，確保溫度傳感器正常工作。對于氣體環境，5％co2的環境對卵母細胞培養、受精和受精卵培養至關重要，能維持培養液ph值穩定；受精卵培養時5％o2的環境也得到精確控制，從而減少了因環境波動對實驗造本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于：調控溶液由1-50微克/毫升放射菌酮組成。
2.如權利要求1所述一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.如權利要求2所述一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，成熟液由M199培養液與10％體積的血清或牛血清白蛋白，或其它類似替代物組成。
4.如權利要求2所述一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，成熟液中不含有FSH和LH激素。
5.如權利要求2所述一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，培養條件為在38.5℃、5％CO2的培養箱中培養22-24小時。
6.如權利要求2所述一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，當牛羊卵母細胞成熟完成后，將牛羊卵母細胞轉入正常的受精液中，包括以下步驟：
7.如權利要求6所述一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，24小
8.如權利要求7所述一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，改進的SOF培養液為在原有的SOF培養液中加入了1％必需和非必需氨基酸。
9.如權利要求1-8任一項所述的一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，所述放射菌酮為可逆的、低毒的、蛋白質的合成抑制劑。
10.如權利要求1-8任一項所述的一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，所述調控溶液抑制牛羊卵母細胞蛋白質的合成，但不抑制牛羊卵母細胞RNA的合成。
...【技術特征摘要】
1.一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于：調控溶液由1-50微克/毫升放射菌酮組成。
2.如權利要求1所述一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.如權利要求2所述一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，成熟液由m199培養液與10％體積的血清或牛血清白蛋白，或其它類似替代物組成。
4.如權利要求2所述一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，成熟液中不含有fsh和lh激素。
5.如權利要求2所述一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，培養條件為在38.5℃、5％co2的培養箱中培養22-24小時。
6.如權利要求2所述一種以放射菌酮為核心的牛羊卵母細胞成熟周期精準優化方法，其特征在于，當牛羊卵母細胞成熟完成后，將牛羊卵母細胞轉入正常的受精液...
【專利技術屬性】
技術研發人員：鄧錚，田樹軍，鄧克路，馬愛新，
申請(專利權)人：上海六驥元支生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。