【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及植物分子標記，更具體的說是涉及一種用于鑒定茄子品種的結構變異分子標記的引物組合及其應用。
技術介紹
1、茄子(solanum?melongena?l.)屬于茄科茄屬，是世界重要的蔬菜作物之一。我國是茄子生產大國，茄子種植面積和總產量均居于世界第一位。近年來，我國茄子產業規模穩步增長，到2021年我國茄子種植面積80.4萬公頃，總產量3745.9萬噸。我國栽培茄子歷史悠久，栽培茄子形態多樣，按果實的形態可分為圓茄類、長茄類和卵(矮)茄類。
2、在生產上，我國茄子品種繁多，品種的優質與保護是產業持續發展的核心。因此，開發能夠鑒定不同茄子品種的分子標記，構建茄子品種的分子身份證，對品種真實性鑒別、種質資源分類鑒定以及分子育種具有重要的實際應用價值。
3、分子標記(molecular?markers)是根據個體或群體間的核苷酸序列差異作為遺傳標記，可從dna水平直觀地反映生物的多樣性。分子標記在植物遺傳育種中應用非常廣泛，主要包括限制性內切酶片段長度多態性(restriction?fragment?length?polymorphism，rflp)、簡單序列重復(simple?sequence?repeats，ssr)、單核苷酸多態性(singlenucleotide?polymorphism，snp)和插入缺失(insertion-deletion，indel)等類型。然而，rflp和ssr標記數目有限且檢測難度較大，snp標記雖然精準，但開發和檢測成本高，而indel標記在普通瓊脂糖凝膠中難以區
4、因此，提供一種用于鑒定茄子品種的結構變異分子標記的引物組合及其應用是本領域技術人員亟需解決的問題。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術提供了一種用于鑒定茄子品種的結構變異分子標記的引物組合及其應用。
2、為了實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：
3、一種用于鑒定茄子品種的結構變異分子標記的引物組合，所述結構變異分子標記包括分別位于茄子1-12號染色體上的12個結構變異分子標記，分別命名為sv_1_3、sv_2_1、sv_3_7、sv_4_1、sv_5_2、sv_6_4、sv_7_8、sv_8_3、sv_9_1、sv_10_4、sv_11_2、sv_12_2；對應的引物組合序列依次如seq?id?no.1和2、3和4、5和6、7和8、9和10、11和12、13和14、15和16、17和18、19和20、21和22、23和24所示。
4、進一步，一種鑒定茄子品種的方法，包括以下步驟：
5、(1)提取待測茄子品種的基因組dna；
6、(2)利用所述的引物組合對步驟(1)得到的基因組dna進行pcr擴增，得到12份pcr擴增產物；
7、(3)將步驟(2)獲得的pcr擴增產物分別進行瓊脂糖凝膠電泳觀察帶型；
8、(4)根據電泳帶型分別對12份pcr擴增產物進行賦值并依次排列，組合成品種編碼，所述品種編碼作為所述茄子品種的分子身份證。
9、進一步，步驟(2)所述pcr擴增的反應體系為：2×pcr?mix?10μl、dna?1μl、上游引物1μl、下游引物1μl，補充去離子水至20μl。
10、進一步，步驟(2)所述pcr擴增的反應程序為：94℃3min；94℃30sec，56℃30sec，72℃30sec，共35個循環；72℃5min；4℃保存。
11、進一步，步驟(4)中，通過以下方法進行賦值：
12、當擴增產物中僅含a帶時賦值0，僅含b帶時賦值1，含有a帶和b帶時賦值2，既不含a帶又不含b帶時賦值x；
13、其中，標記sv_1_3引物對的擴增產物對應的a帶大小為245bp，b帶大小為612bp；
14、標記sv_2_1引物對的擴增產物對應的a帶大小為274bp，b帶大小為678bp；
15、標記sv_3_7引物對的擴增產物對應的a帶大小為227bp，b帶大小為323bp；
16、標記sv_4_1引物對的擴增產物對應的a帶大小為209bp，b帶大小為287bp；
17、標記sv_5_2引物對的擴增產物對應的a帶大小為229bp，b帶大小為666bp；
18、標記sv_6_4引物對的擴增產物對應的a帶大小為444bp，b帶大小為617bp；
19、標記sv_7_8引物對的擴增產物對應的a帶大小為260bp，b帶大小為500bp；
20、標記sv_8_3引物對的擴增產物對應的a帶大小為319bp，b帶大小為662bp；
21、標記sv_9_1引物對的擴增產物對應的a帶大小為318bp，b帶大小為855bp；
22、標記sv_10_4引物對的擴增產物對應的a帶大小為470bp，b帶大小為885bp；
23、標記sv_11_2引物對的擴增產物對應的a帶大小為250bp，b帶大小為426bp；
24、標記sv_12_2引物對的擴增產物對應的a帶大小為345bp，b帶大小為923bp。
25、進一步，所述的引物組合在茄子品種育種中的應用。
26、進一步，所述的引物組合在茄子品種鑒定中的應用。
27、進一步，所述的引物組合在構建茄子分子身份證中的應用。
28、進一步，一種用于茄子品種鑒定的試劑盒，包括所述的引物組合。
29、進一步，所述的試劑盒在構建茄子分子身份證中的應用。
30、經由上述的技術方案可知，與現有技術相比，本專利技術公開提供了一種用于鑒定茄子品種的結構變異分子標記的引物組合及其應用，本專利技術基于大片段的結構變異，在茄子基因組的1-12號染色體上各開發了1個分子標記，每個位點可產生3種基因型，總計312＝531441種基因型，以此用于構建茄子分子身份證，可有效辨別品種真實性，追溯品種來源，在茄子種質資源分類鑒定、分子育種等方面具有重要應用價值。本專利技術開發的分子標記采用普通瓊脂糖凝膠即可完成檢測，操作簡便，成本低廉，檢測效率高。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種用于鑒定茄子品種的結構變異分子標記的引物組合，其特征在于，所述結構變異分子標記包括分別位于茄子1-12號染色體上的12個結構變異分子標記，分別命名為SV_1_3、SV_2_1、SV_3_7、SV_4_1、SV_5_2、SV_6_4、SV_7_8、SV_8_3、SV_9_1、SV_10_4、SV_11_2、SV_12_2；對應的引物組合序列依次如SEQ?ID?NO.1和2、3和4、5和6、7和8、9和10、11和12、13和14、15和16、17和18、19和20、21和22、23和24所示。
2.一種鑒定茄子品種的方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的一種鑒定茄子品種的方法，其特征在于，步驟(2)所述PCR擴增的反應體系為：2×PCR?Mix?10μL、DNA?1μL、上游引物1μL、下游引物1μL，補充去離子水至20μL。
4.根據權利要求2所述的一種鑒定茄子品種的方法，其特征在于，步驟(2)所述PCR擴增的反應程序為：94℃3min；94℃30sec，56℃30sec，72℃30sec，共35個循環；72℃5mi
5.根據權利要求2所述的一種鑒定茄子品種的方法，其特征在于，步驟(4)中，通過以下方法進行賦值：
6.權利要求1所述的引物組合在茄子品種育種中的應用。
7.權利要求1所述的引物組合在茄子品種鑒定中的應用。
8.權利要求1所述的引物組合在構建茄子分子身份證中的應用。
9.一種用于茄子品種鑒定的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物組合。
10.權利要求9所述的試劑盒在構建茄子分子身份證中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種用于鑒定茄子品種的結構變異分子標記的引物組合，其特征在于，所述結構變異分子標記包括分別位于茄子1-12號染色體上的12個結構變異分子標記，分別命名為sv_1_3、sv_2_1、sv_3_7、sv_4_1、sv_5_2、sv_6_4、sv_7_8、sv_8_3、sv_9_1、sv_10_4、sv_11_2、sv_12_2；對應的引物組合序列依次如seq?id?no.1和2、3和4、5和6、7和8、9和10、11和12、13和14、15和16、17和18、19和20、21和22、23和24所示。
2.一種鑒定茄子品種的方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的一種鑒定茄子品種的方法，其特征在于，步驟(2)所述pcr擴增的反應體系為：2×pcr?mix?10μl、dna?1μl、上游引物1μ...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張磊，侯文倩，張洪永，曾麗倩，徐濤，
申請(專利權)人：江蘇師范大學，
類型：發明
國別省市：
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