【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物，特別涉及一種用于檢測pogz基因致病突變的引物組合及試劑盒。
技術介紹
1、神經發育障礙(ndds)是一類復雜的疾病，涵蓋了從智力障礙(id)到自閉癥譜系障礙(asd)等多種神經發育異常。這類疾病的病因復雜，且表現出顯著的表型和基因型異質性，因此診斷較為困難。近年來，基因組學技術的進步為揭示ndds的遺傳基礎提供了新的途徑，其中pogz(pogo?transposable?element?with?znf?domain)基因的研究引起了廣泛關注。pogz基因位于1號染色體的q21.3區域，基因大小約為57kb，編碼序列4223bp。它編碼的蛋白質屬于鋅指蛋白家族，具有多個功能域，如c端的轉座酶結構域。pogz蛋白在細胞周期進展、染色體分離以及dna修復等多種細胞過程中的關鍵作用，使其在大腦發育和功能中具有重要意義。近年來，pogz基因的突變被發現與懷特-薩頓綜合征(white-suttonsyndrome,whsus)等單基因遺傳性神經發育障礙密切相關。whsus是一種表現多樣的綜合征，患者可能會出現智力障礙、自閉癥譜系障礙、焦慮、睡眠障礙等癥狀。研究發現，pogz基因的功能喪失性變異是導致該綜合征的主要原因，且相同的pogz突變通常會導致相似的臨床表現。
2、目前，pogz基因的致病突變只能通過全外顯子組測序(wes)或者全基因組測序(wes)技術進行檢測。這兩個方法都是二代測序技術，對檢測技術和設備要求很高，價格昂貴，而且周期長。
技術實現思路
2、為實現上述目的，本專利技術提出用于檢測pogz基因致病突變的引物組，包括第一引物組，第二引物組，第三引物組，第四引物組和第五引物組；
3、其中，所述第一引物組包括第一上游引物和第一下游引物，所述第一上游引物的核苷酸序列為seq?id?no.1所示，所述第一下游引物的核苷酸序列為seq?id?no.2所示；
4、所述第二引物組包括第二上游引物和第二下游引物，所述第二上游引物的核苷酸序列為seq?id?no.3所示，所述第二下游引物的核苷酸序列為seq?id?no.4所示；
5、所述第三引物組包括第三上游引物和第三下游引物，所述第三上游引物的核苷酸序列為seq?id?no.5所示，所述第三下游引物的核苷酸序列為seq?id?no.6所示；
6、所述第四引物組包括第四上游引物和第四下游引物，所述第三上游引物的核苷酸序列為seq?id?no.7所示，所述第三下游引物的核苷酸序列為seq?id?no.8所示；
7、所述第五引物組包括第五上游引物和第五下游引物，所述第五上游引物的核苷酸序列為seq?id?no.9所示，所述第五下游引物的核苷酸序列為seq?id?no.10所示。
8、可選地/在一實施例中，所述第一引物組，第二引物組，第三引物組，第四引物組用于sanger測序。
9、可選地/在一實施例中，所述sanger測序的pcr反應體系包括如下組分：
10、10×pcr?buffer；
11、dntp(2.5mm)；
12、mgcl2(25mm)；
13、上游引物；
14、下游引物；
15、基因組dna(100ng/μl)；
16、taq?dna聚合酶；
17、ddh2o。
18、可選地/在一實施例中，所述sanger測序的pcr反應體系各組分體積如下：
19、10×pcr?buffer：1.0μl；
20、dntp(2.5mm)：0.8μl；
21、mgcl2(25mm)：3.0μl；
22、上游引物：0.4μl；
23、下游引物：0.4μl；
24、基因組dna(100ng/μl)：1.0μl；
25、taq?dna聚合酶：0.1μl；
26、ddh2o：3.3μl；
27、總體積：10μl。
28、可選地/在一實施例中，所述第五引物組用于凝膠電泳檢測。
29、可選地/在一實施例中，所述第五引物組的反轉錄體系包括如下組分：mrna：8.0μl；
30、nuclease-free?water：0.6μl；
31、5×reaction?buffer：4.0μl；
32、mgcl2(25mm)：4.0μl；
33、oligo(dt)15primer(500μ/ml)：0.5μl；
34、random?primers(500μ/ml)：0.5μl；
35、pcr?nucleotide?mix：1.0μl；
36、recombinant?ribonuclease?inhibitor：0.4μl；
37、reverse?transcriptase：1.0μl；
38、總體積：20μl。
39、可選地/在一實施例中，所述第五引物組的pcr反應體系包括如下組分：10×pcrbuffer；
40、dntp(2.5mm)；
41、mgcl2(25mm)；
42、上游引物；
43、下游引物；
44、基因組dna(100ng/μl)；
45、taq?dna聚合酶；
46、ddh2o。
47、可選地/在一實施例中，所述第五引物組的pcr反應體系各組分體積如下：
48、10×pcr?buffer：1.0μl；
49、dntp(2.5mm)：0.8μl；
50、mgcl2(25mm)：3.0μl；
51、上游引物：0.4μl；
52、下游引物：0.4μl；
53、cdna：1.0μl；
54、taq?dna聚合酶：0.1μl；
55、ddh2o：3.3μl；
56、總體積：10μl。
57、本專利技術還提出一種用于檢測pogz基因致病突變的試劑盒，包括上述引物組
58、本專利技術還提出上述試劑盒在檢測pogz基因致病突變中的應用。
59、本專利技術的技術方案通過采用多組引物組來對pogz基因致病突變進行檢測，從而可利用sanger測序或凝膠電泳檢測來完成pogz基因致病突變的檢測，即能通過sanger測序來確定pogz基因是否存在致病突變，進而縮短了檢測周期，降低了檢測成本。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.用于檢測POGZ基因致病突變的引物組，其特征在于，包括第一引物組，第二引物組，第三引物組，第四引物組和第五引物組；
2.如權利要求1所述的引物組，其特征在于，所述第一引物組，第二引物組，第三引物組，第四引物組用于Sanger測序。
3.如權利要求2所述的引物組，其特征在于，所述Sanger測序的PCR反應體系包括如下組分：
4.如權利要求3所述的引物組，其特征在于，所述Sanger測序的PCR反應體系各組分體積如下：
5.如權利要求1所述的引物組，其特征在于，所述第五引物組用于凝膠電泳檢測。
6.如權利要求5所述的引物組，其特征在于，所述第五引物組的反轉錄體系包括如下組分：
7.如權利要求6所述的引物組，其特征在于，所述第五引物組的PCR反應體系包括如下組分：
8.如權利要求7所述的引物組，其特征在于，所述第五引物組的PCR反應體系各組分體積如下：
9.用于檢測POGZ基因致病突變的試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1至9中任一項所述的引物組。
10.如權利要求9所述的
...【技術特征摘要】
1.用于檢測pogz基因致病突變的引物組，其特征在于，包括第一引物組，第二引物組，第三引物組，第四引物組和第五引物組；
2.如權利要求1所述的引物組，其特征在于，所述第一引物組，第二引物組，第三引物組，第四引物組用于sanger測序。
3.如權利要求2所述的引物組，其特征在于，所述sanger測序的pcr反應體系包括如下組分：
4.如權利要求3所述的引物組，其特征在于，所述sanger測序的pcr反應體系各組分體積如下：
5.如權利要求1所述的引物組，其特征在于，所...
【專利技術屬性】
技術研發人員：吳涌，羅三川，鄧琦，
申請(專利權)人：深圳市寶安區婦幼保健院，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。