本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種抗東莨菪堿的單克隆抗體及其應(yīng)用和產(chǎn)品，涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)運用東莨菪堿免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，通過特異性的高通量篩選得到具有高度特異性的雜交瘤細(xì)胞，通過培養(yǎng)和再免疫獲得大量小鼠腹水，再經(jīng)多步分離及純化獲得高純度、高靈敏度和高特異性的抗東莨菪堿的單克隆抗體，為開發(fā)檢測東莨菪堿的免疫試紙條提供了所需的原料。本發(fā)明專利技術(shù)的抗東莨菪堿的單克隆抗體anti?hyoscine?mab1可用于免疫印跡、免疫熒光等免疫學(xué)檢測，所獲抗體經(jīng)驗證具有良好的特異性結(jié)合能力。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物，尤其是涉及一種抗東莨菪堿的單克隆抗體及其應(yīng)用和產(chǎn)品。
技術(shù)介紹
1、東莨菪堿(hyoscine)是一種莨菪烷型生物堿，主要存在于茄科植物顛茄類和曼陀羅類中，是洋金花、賽莨菪和天仙子中主要的生物堿。臨床上，東莨菪堿主要用于鎮(zhèn)痛、麻醉、抗暈動癥、帕金森癥、改善微循環(huán)、戒毒脫癮、農(nóng)藥中毒等，市場需求巨大。
2、近年來東莨菪堿在臨床醫(yī)療上應(yīng)用范圍日趨廣泛，取得了令人注目的療效。比如在治療呼吸系統(tǒng)疾病、感染性休克、心血管疾病、消化系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等疾病中都有重要用途。它的不良反應(yīng)一般有口干、分泌物變稠、面色潮紅、躁動不安、激動、幻覺、譫妄、尿潴留、視物模糊、腹脹、體溫升高等；偶見有心律失常及驚厥、昏迷等情況。東莨菪堿小劑量表現(xiàn)為鎮(zhèn)靜作用，大劑量產(chǎn)生催眠作用。因此很有必要建立一種快速、靈敏、準(zhǔn)確的檢測東莨菪堿的方法，這有助于確定東莨菪堿的濫用。
3、目前，對東莨菪堿的檢測主要依靠氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(gc-ms)、液相色譜四級桿飛行時間質(zhì)譜儀(q-tof?lc/ms)、核磁共振氫譜(h?nmr)、核磁共振碳譜(13c?nmr)、核磁共振氟譜(19f?nmr)、紅外光譜(ir)等方法，但都存在儀器昂貴，檢測費時，并且需要專業(yè)技術(shù)人員操作等缺點，因此不能達到現(xiàn)代檢測對簡便、快速、準(zhǔn)確的要求。
4、有鑒于此，特提出本專利技術(shù)。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的第一目的在于提供一種抗東莨菪堿的單克隆抗體，以解決東莨菪堿的檢測問題。
>2、本專利技術(shù)的第二目的在于提供生物材料。3、本專利技術(shù)的第三目的在于提供上述抗東莨菪堿的單克隆抗體的制備方法。
4、本專利技術(shù)的第四目的在于提供上述抗東莨菪堿的單克隆抗體在制備東莨菪堿的檢測產(chǎn)品中的應(yīng)用。
5、本專利技術(shù)的第五目的在于提供一種東莨菪堿的標(biāo)記物。
6、本專利技術(shù)的第六目的在于提供一種用于東莨菪堿的檢測的試劑盒。
7、為了實現(xiàn)以上目的，特采用以下技術(shù)方案：
8、第一方面，本專利技術(shù)提供了一種抗東莨菪堿的單克隆抗體，所述抗東莨菪堿的單克隆抗體的可變區(qū)包括：具有如seq?id?no.1所示氨基酸序列的互補決定區(qū)cdr1-vh、具有如seq?id?no.2所示氨基酸序列的互補決定區(qū)cdr2-vh、具有如seq?id?no.3所示氨基酸序列的互補決定區(qū)cdr3-vh、具有如seq?id?no.4所示氨基酸序列的互補決定區(qū)cdr1-vl、具有如seq?id?no.14所示氨基酸序列的互補決定區(qū)cdr2-vl和具有如seq?id?no.5所示氨基酸序列的互補決定區(qū)cdr3-vl。
9、作為進一步技術(shù)方案，所述可變區(qū)包括具有如seq?id?no.6所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)vh；
10、所述可變區(qū)包括具有如seq?id?no.7所示氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)vl。
11、作為進一步技術(shù)方案，所述抗東莨菪堿的單克隆抗體為igg抗體。
12、第二方面，本專利技術(shù)提供了生物材料，所述生物材料選自a-c中的任一項：
13、a.核苷酸，所述核苷酸包括編碼所述抗東莨菪堿的單克隆抗體的核苷酸序列；
14、b.載體，所述載體攜帶所述a中的核苷酸；
15、c.細(xì)胞，所述細(xì)胞攜帶所述a中的核苷酸，或者含有所述b中的載體，或者表達所述抗東莨菪堿的單克隆抗體。
16、第三方面，本專利技術(shù)提供了上述抗東莨菪堿的單克隆抗體的制備方法，采用所述的細(xì)胞發(fā)酵得到。
17、第四方面，本專利技術(shù)提供了上述抗東莨菪堿的單克隆抗體在制備東莨菪堿的檢測產(chǎn)品中的應(yīng)用。
18、第五方面，本專利技術(shù)提供了一種東莨菪堿的標(biāo)記物，包括所述抗東莨菪堿的單克隆抗體和標(biāo)記物；
19、所述抗東莨菪堿的單克隆抗體和標(biāo)記物偶聯(lián)。
20、作為進一步技術(shù)方案，所述標(biāo)記物包括酶、熒光分子標(biāo)記、熒光微球、彩色微球、膠體金、生物素或鏈霉親和素。
21、第六方面，本專利技術(shù)提供了一種用于東莨菪堿的檢測的試劑盒，所述試劑盒包括所述的抗東莨菪堿的單克隆抗體或者所述的東莨菪堿的標(biāo)記物。
22、作為進一步技術(shù)方案，所述試劑盒包括免疫層析檢測試劑盒、elisa檢測試劑盒、免疫磁微粒檢測試劑盒、免疫熒光檢測試劑盒或免疫印記檢測試劑盒。
23、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具有以下有益效果：
24、本專利技術(shù)運用東莨菪堿免疫balb/c小鼠，取小鼠脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，通過特異性的高通量篩選得到具有高度特異性的雜交瘤細(xì)胞，通過培養(yǎng)和再免疫獲得大量小鼠腹水，再經(jīng)多步分離及純化獲得高純度、高靈敏度和高特異性的抗東莨菪堿的單克隆抗體anti-hyoscine-mab1，為開發(fā)檢測東莨菪堿的免疫試紙條提供了所需的原料。本專利技術(shù)的抗東莨菪堿的單克隆抗體anti-hyoscine-mab1可用于免疫印跡、免疫熒光等免疫學(xué)檢測，所獲抗體經(jīng)驗證具有良好的特異性結(jié)合能力。
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【技術(shù)保護點】
1.一種抗東莨菪堿的單克隆抗體，其特征在于，所述抗東莨菪堿的單克隆抗體的可變區(qū)包括：具有如SEQ?ID?NO.1所示氨基酸序列的互補決定區(qū)CDR1-VH、具有如SEQ?ID?NO.2所示氨基酸序列的互補決定區(qū)CDR2-VH、具有如SEQ?ID?NO.3所示氨基酸序列的互補決定區(qū)CDR3-VH、具有如SEQ?ID?NO.4所示氨基酸序列的互補決定區(qū)CDR1-VL、具有如SEQ?ID?NO.14所示氨基酸序列的互補決定區(qū)CDR2-VL和具有如SEQ?ID?NO.5所示氨基酸序列的互補決定區(qū)CDR3-VL。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗東莨菪堿的單克隆抗體，其特征在于，所述可變區(qū)包括具有如SEQ?ID?NO.6所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)VH；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗東莨菪堿的單克隆抗體，其特征在于，所述抗東莨菪堿的單克隆抗體為IgG抗體。
4.生物材料，其特征在于，所述生物材料選自a-c中的任一項：
5.權(quán)利要求1-3任一項所述的抗東莨菪堿的單克隆抗體的制備方法，其特征在于，采用權(quán)利要求4中所述的細(xì)胞發(fā)酵得到。
6.權(quán)利要求1-3任一項所述抗東莨菪堿的單克隆抗體在制備東莨菪堿的檢測產(chǎn)品中的應(yīng)用。
7.一種東莨菪堿的標(biāo)記物，其特征在于，包括權(quán)利要求1-3任一項所述抗東莨菪堿的單克隆抗體和標(biāo)記物；
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的東莨菪堿的標(biāo)記物，其特征在于，所述標(biāo)記物包括酶、熒光分子標(biāo)記、熒光微球、彩色微球、膠體金、生物素或鏈霉親和素。
9.一種用于東莨菪堿的檢測的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求1-3任一項所述的抗東莨菪堿的單克隆抗體或者權(quán)利要求7或8所述的東莨菪堿的標(biāo)記物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括免疫層析檢測試劑盒、ELISA檢測試劑盒、免疫磁微粒檢測試劑盒、免疫熒光檢測試劑盒或免疫印記檢測試劑盒。
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【技術(shù)特征摘要】
1.一種抗東莨菪堿的單克隆抗體，其特征在于，所述抗東莨菪堿的單克隆抗體的可變區(qū)包括：具有如seq?id?no.1所示氨基酸序列的互補決定區(qū)cdr1-vh、具有如seq?id?no.2所示氨基酸序列的互補決定區(qū)cdr2-vh、具有如seq?id?no.3所示氨基酸序列的互補決定區(qū)cdr3-vh、具有如seq?id?no.4所示氨基酸序列的互補決定區(qū)cdr1-vl、具有如seq?id?no.14所示氨基酸序列的互補決定區(qū)cdr2-vl和具有如seq?id?no.5所示氨基酸序列的互補決定區(qū)cdr3-vl。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗東莨菪堿的單克隆抗體，其特征在于，所述可變區(qū)包括具有如seq?id?no.6所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)vh；
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗東莨菪堿的單克隆抗體，其特征在于，所述抗東莨菪堿的單克隆抗體為igg抗體。
4.生物材料，其特征在于，所述生物材料選自a-c中的任...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：成含鋒，上官科科，魏文濤，阿月，
申請(專利權(quán))人：杭州旭科生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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