【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，涉及針對cd4蛋白的單克隆抗體及其用途。
技術介紹
1、cd4蛋白，也稱為cd4分子或cd4受體，是一種在t輔助細胞表面表達的主要表面糖蛋白。cd4+t細胞是人體免疫系統中的關鍵角色，能夠識別由抗原呈遞細胞(apc)提呈的外來抗原并產生響應。cd4+t細胞可以分化為多種效應t細胞亞群，如th1、th2、th17和treg等，執行不同的免疫功能。cd4抗體在細胞分選中發揮著重要作用，也可用于流式細胞術分析和細胞表面標志物的檢測。cd4抗體可以用于免疫組織化學、免疫印跡、免疫細胞化學和免疫沉淀等技術來檢測cd4蛋白，在基礎研究和臨床應用中具有多種功能。
2、雜交瘤細胞大規模培養技術，是一種比較簡便的大量制備單克隆抗體的技術，通過少量擴增雜交瘤細胞后，將其注射入小鼠腹腔體內，5-10天內，的培養單克隆抗體的重組表達技術是生物制藥領域中的一項關鍵技術，它使得單克隆抗體的規?；苽涑蔀榭赡堋Ｍㄟ^大規模生產，制備具有高度一致性和特異性的抗體，用于抗體藥物發現和篩選。重組表達技術室通過將編碼抗體的基因序列克隆到合適的表達載體中，并在宿主細胞內進行表達來實現。常用的表達宿主有人胚胎腎細胞(hek293)和中國倉鼠卵巢細胞(cho)。hek293主要為瞬時轉染表達，周期短，成本低，而且宿主為人源細胞，外源因子風險低；將抗體基因整合到cho細胞基因組上，能夠實現抗體的穩定表達。
3、腹水生產抗體是一種傳統的單克隆抗體制備方法，它涉及將雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔內，使細胞在腹腔中生長并產生腹水，從而獲得大量的
技術實現思路
1、為了解決現有技術中存在的技術問題，本專利技術提供了以下的技術方案：
2、本專利技術提供了一種抗cd4的單克隆抗體或其抗原結合片段，所述單克隆抗體或其抗原結合片段包括seq?id?no:1所示的重鏈可變區cdr1、seq?id?no:2所示的重鏈可變區cdr2、seq?id?no:3所示的重鏈可變區cdr3、seq?id?no:9所示的輕鏈可變區cdr1、seq?idno:10所示的輕鏈可變區cdr2、和seq?id?no:11所示的輕鏈可變區cdr3。
3、本專利技術使用術語“cdr”和“互補決定區”可互換使用，并且是指抗體的參與結合至抗原的可變鏈的一部分。因此，cdr是“抗原結合片段”的一部分或者是“抗原結合片段”。在一些實施例中，單克隆抗體包含共同形成抗原結合片段的三個重鏈可變區cdr與三個輕鏈可變區cdr?！癱dr”可指由本領域已知的任何方法(包括方法的組合)定義的cdr。
4、本專利技術使用術語“cd4”是指來自人類的全長cd4蛋白(uniport?id:p01730)。cd4具體指t淋巴細胞的cd4膜糖蛋白。cd4抗原與t淋巴細胞上的t細胞受體一起作為輔助受體，在ii類mhc分子背景下識別抗原呈遞細胞展示的抗原。
5、本專利技術使用術語“t細胞”或“t淋巴細胞”是本領域公認的，并且旨在包括胸腺細胞、初始t淋巴細胞、未成熟t淋巴細胞、成熟t淋巴細胞、靜息t淋巴細胞或激活的t淋巴細胞。t細胞可以是t輔助(th)細胞，例如t輔助1(th1)或t輔助2(th2)細胞。t細胞可以是輔助t細胞(htl；cd4+t細胞)、細胞毒性t細胞(ctl；cd8+t細胞)、腫瘤浸潤性細胞毒性t細胞(til；cd8+t細胞)、cd4+cd8+t細胞、cd4-cd8-t細胞、表達t細胞受體(tcr)的α和β鏈的αβt細胞和表達tcrγ和δ鏈的γδt細胞，或t細胞的任何其他子集。適用于特定實施方案的其他說明性t細胞群包括記憶t細胞，合適地為早期記憶t細胞。術語“t細胞”在其范圍內包括天然t細胞(例如，從生物體分離的，所述生物體例如為哺乳動物，例如，人，例如，受試者)、離體生長的t細胞和遺傳工程化的t細胞。術語t細胞還包括包含t細胞受體(例如，天然tcr，或重組tcr)的t細胞和包含人工t細胞受體的t細胞(例如，car-t細胞)。
6、進一步，所述單克隆抗體或其抗原結合片段的重鏈可變區框架區fr1、fr2、fr3、fr4的序列分別具有seq?id?no:4-7所述的氨基酸序列至少90％序列一致性，優選至少95％序列一致性，優選至少96％序列一致性，優選至少97％序列一致性，優選至少98％序列一致性，優選至少99％序列一致性，優選至少100％序列一致性；所述單克隆抗體或其抗原結合片段的輕鏈可變區框架區fr1、fr2、fr3、fr4的序列分別具有seq?id?no:12-15所述的氨基酸序列至少90％序列一致性，優選至少95％序列一致性，優選至少96％序列一致性，優選至少97％序列一致性，優選至少98％序列一致性，優選至少99％序列一致性，優選至少100％序列一致性；
7、本專利技術使用術語“序列一致性”是指兩個多核苷酸序列在比較窗口是相同的(即在核苷酸與核苷酸的基礎上)。術語“序列一致性百分比”是通過以下來計算：在比較窗口比較兩個最優對齊的序列、確定在兩個序列中出現相同核酸堿基(例如a、t、c、g、u或i)的位置的數量以獲得匹配位置的數量、將匹配位置的數量除以在比較窗口(即窗口大小)中的位置的總數量、并將結果乘以100以產生序列一致性百分比。
8、進一步，所述單克隆抗體或其抗原結合片段的重鏈可變區框架區fr1、fr2、fr3、fr4的序列分別如seq?id?no:4-7所示；所述單克隆抗體或其抗原結合片段的輕鏈可變區框架區fr1、fr2、fr3、fr4的序列分別如seq?id?no:12-15所示；
9、進一步，所述重鏈可變區的氨基酸序列如seq?id?no:8所示，所述輕鏈可變區的氨基酸序列如seq?id?no:16所示；
10、進一步，所述單克隆抗體或其抗原結合片段輕鏈氨基酸序列如seq?id?no:17所示；
11、在一些實施例中，所述輕鏈為輕鏈可變區和輕鏈恒定區的總和。
12、進一步，所述單克隆抗體或其抗原結合片段重鏈氨基酸序列如seq?id?no:18所示；
13、在一些實施例中，所述重鏈為重鏈可變區和重鏈恒定區的總和。所述重鏈恒定區包括ch1區以及ch2與ch3區。
14、進一步，所述單克隆抗體或其抗原結合片段是人源化的。
15、本專利技術使用術語“單克隆抗體”旨在用于本領域中，并且是指從與相同抗原決定簇(表位)結合的基本上同源的抗體群體中獲得的抗體。“基本上同源”意指單獨的抗體除了可少量存在的可能天然存在的突變以外是相同的。這與多克隆抗體形成對比，多克隆抗體通常包括針對各種不同的抗原決定簇(表位)的不同抗體。術語“單克隆抗體”涵蓋完整的和全長單克隆抗體，以及抗體片段(諸如fab、fab′、f(ab′)2、fv)、單鏈(scfv)突變體、包含抗體部分的融合蛋白和包含抗原識別位點的任何其它經修飾的免疫球蛋白分子。“單克隆抗體”及其抗原結合片段以許多方式制成，本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種抗CD4的單克隆抗體或其抗原結合片段，其特征在于，所述單克隆抗體或其抗原結合片段包括SEQ?ID?NO:1所示的重鏈可變區CDR1、SEQ?ID?NO:2所示的重鏈可變區CDR2、SEQ?ID?NO:3所示的重鏈可變區CDR3、SEQ?ID?NO:9所示的輕鏈可變區CDR1、SEQ?ID?NO:10所示的輕鏈可變區CDR2、和SEQ?ID?NO:11所示的輕鏈可變區CDR3。
2.根據權利要求1所述的單克隆抗體或其抗原結合片段，其特征在于，所述單克隆抗體或其抗原結合片段的重鏈可變區框架區FR1、FR2、FR3、FR4的序列分別具有SEQ?ID?NO:4-7所述的氨基酸序列至少90％序列一致性，優選至少95％序列一致性，優選至少96％序列一致性，優選至少97％序列一致性，優選至少98％序列一致性，優選至少99％序列一致性，優選至少100％序列一致性；所述單克隆抗體或其抗原結合片段的輕鏈可變區框架區FR1、FR2、FR3、FR4的序列分別具有SEQ?ID?NO:12-15所述的氨基酸序列至少90％序列一致性，優選至少95％序列一致性，優選至少96％序列一致性，優選
3.多核苷酸，所述核酸分子編碼權利要求1或2所述的單克隆抗體或其抗原結合片段；
4.一種生產權利要求1或2所述的單克隆抗體或其抗原結合片段的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
5.權利要求1或2所述的單克隆抗體或其抗原結合片段在制備治療或預防由CD4蛋白引起的疾病或病癥的藥物中的用途。
6.權利要求1或2所述的單克隆抗體或其抗原結合片段在制備檢測CD4蛋白的產品中的用途。
7.權利要求1或2所述的單克隆抗體或其抗原結合片段在制備細胞分選產品中的用途。
8.一種載體，所述載體包括權利要求3所述的多核苷酸。
9.一種細胞，所述細胞包括權利要求1或2所述的單克隆抗體或其抗原結合片段，權利要求3所述的多核苷酸，或權利要求8所述的載體；
10.一種綴合物，所述綴合物包括權利要求1或2所述的單克隆抗體或其抗原結合片段，和與抗體相綴合的物質；
...【技術特征摘要】
1.一種抗cd4的單克隆抗體或其抗原結合片段，其特征在于，所述單克隆抗體或其抗原結合片段包括seq?id?no:1所示的重鏈可變區cdr1、seq?id?no:2所示的重鏈可變區cdr2、seq?id?no:3所示的重鏈可變區cdr3、seq?id?no:9所示的輕鏈可變區cdr1、seq?id?no:10所示的輕鏈可變區cdr2、和seq?id?no:11所示的輕鏈可變區cdr3。
2.根據權利要求1所述的單克隆抗體或其抗原結合片段，其特征在于，所述單克隆抗體或其抗原結合片段的重鏈可變區框架區fr1、fr2、fr3、fr4的序列分別具有seq?id?no:4-7所述的氨基酸序列至少90％序列一致性，優選至少95％序列一致性，優選至少96％序列一致性，優選至少97％序列一致性，優選至少98％序列一致性，優選至少99％序列一致性，優選至少100％序列一致性；所述單克隆抗體或其抗原結合片段的輕鏈可變區框架區fr1、fr2、fr3、fr4的序列分別具有seq?id?no:12-15所述的氨基酸序列至少90％序列一致性，優選至少95％序列一致性，優選至...
【專利技術屬性】
技術研發人員：霍景瑞，任旭，王菲，胡穎嵩，王立燕，
申請(專利權)人：北京同立海源生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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