【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥，尤其涉及一種靶向foxm1蛋白的磷酸化修飾干擾肽及其應用。
技術介紹
1、哺乳動物轉錄因子forkhead?box?m1(foxm1)是forkhead家族蛋白的成員之一，foxm1有四種亞型：由選擇性剪接產生的foxm1a、b、c和d，我們重點關注foxm1c，將其稱為foxm1。foxm1主要由n端自主抑制區nrd，中間dna結合區fhd，c端轉錄激活區tad和無序區idr組成，其中在無序區存在有foxm1的聚合結構域。foxm1蛋白是一種已知的原癌基因，在細胞增殖、干細胞多能性、衰老、dna損傷修復和腫瘤形成等生理過程中具有重要作用。foxm1蛋白其促癌性已得到充分的研究，在多種惡性腫瘤細胞中foxm1過度表達。作為轉錄因子，foxm1能通過轉錄調控下游腫瘤相關基因，以此來影響腫瘤的侵襲和轉移。
2、由于大多數轉錄因子在傳統意義上被認為是“不可成藥”的靶點，因為它們存在顯著的無序結構，且缺乏經典的小分子結合口袋。因此，通過設計特異性干擾肽靶向foxm1的聚合結構域來抑制foxm1蛋白的轉錄活性將為癌癥治療提供一種新的思路。
技術實現思路
1、為解決上述技術問題，本專利技術基于foxm1蛋白的轉錄活性依賴于其多聚化形成的凝聚體，破壞foxm1的聚合可以有效地抑制腫瘤的發生發展的發現，以及foxm1蛋白第376位氨基酸的磷酸化也可以在一定程度上抑制聚合的新發現，設計了一種靶向干擾肽，并引入磷酸化修飾，得到一種靶向foxm1蛋白聚合結構域的磷酸化
2、本專利技術的第一個目的是提供一種多肽，所述多肽包括seq?id?no.2所示序列(vpfqipvlyssvrp)，其中的氨基酸均為d-型且第10位絲氨酸經磷酸化修飾。
3、進一步地，所述多肽還包括融合在seq?id?no.2所示序列上的輔助序列。
4、進一步地，所述輔助序列可為任意能夠增強干擾肽效果的序列，包括但不限于用于細胞穿膜的序列、用于靶向的序列、用于防止降解的序列等等。優選地，輔助序列如seqid?no.3所示(rrrqrrkkrg)。
5、進一步地，融合時，seq?id?no.2所示序列和輔助序列之間存在連接序列，連接序列可由2～5個脯氨酸組成。
6、進一步地，輔助序列融合在seq?id?no.2所示序列的c端。
7、進一步地，所述多肽的優選序列如seq?id?no.1所示，其中的氨基酸均為d-型且第10位絲氨酸經磷酸化修飾。該靶向foxm1蛋白的磷酸化修飾干擾肽的制備方法如下：
8、s1、設計干擾肽段靶向位于foxm1蛋白聚合結構域內的氨基酸序列prvssylvpiqfpv；
9、s2、將s1所述干擾肽段與hiv-tat(grkkrrqrrr)融合；
10、s3、將s2中與hiv-tat融合的干擾肽段轉為逆向異構體，獲得干擾肽的氨基酸序列；
11、s4、使用d-型氨基酸為原料合成s3中干擾肽；
12、s5、將影響foxm1聚合的s376位點的磷酸化修飾引入s4得到的干擾肽相應位點中，最終合成帶有磷酸化修飾的干擾肽fip4。
13、本專利技術的第二個目的是提供一種組合物，含有所述多肽。
14、本專利技術的第三個目的是提供所述多肽或組合物在制備靶向制劑中的應用，制劑用于體內或體外靶向干擾foxm1(的聚合)，阻斷foxm1蛋白間的相互作用。
15、進一步地，所述foxm1的序列如seq?id?no.4所示。
16、本專利技術的第四個目的是提供所述多肽或組合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
17、進一步地，所述抗腫瘤藥物用于抑制原位腫瘤和/或轉移腫瘤的發生或發展，如腫瘤肺轉移等。
18、進一步地，所述腫瘤包括但不限于宮頸癌、乳腺癌等。
19、借由上述方案，本專利技術至少具有以下優點：
20、1、靶向foxm1蛋白并帶有磷酸化修飾的干擾肽fip4相比于普通干擾肽可以更好的抑制foxm1蛋白的聚合，顯著地阻止了foxm1蛋白的轉錄激活，可有效地限制腫瘤的生長，為腫瘤免疫治療方案提供了新的思路；
21、2、蛋白間的相互作用通常為面-面互作，相比于傳統的小分子藥物，本專利技術涉及的靶向foxm1蛋白的干擾肽fip4可有效阻斷foxm1蛋白自身的相互作用；
22、3、靶向foxm1蛋白的干擾肽fip4包含hiv-tat序列，可直接使肽段穿過細胞膜進入細胞內發揮作用，不需要任何的載體，避免載體引起的毒副作用；
23、4、d-型氨基酸較天然l-型氨基酸在動物體內的降解較為緩慢，將干擾肽修飾為d-型氨基酸逆向(d-retroinverso,dri)異構體在以往的臨床試驗中被證明具有良好的耐受性和治療效果，所以靶向foxm1蛋白的干擾肽fip4具備進行臨床試驗的可行性；
24、5、靶向foxm1蛋白的干擾肽fip4長度僅為26氨基酸小肽，根據免疫學原理本身不具備免疫原性，可避免引起超敏反應；
25、6、靶向foxm1蛋白的干擾肽fip4可直接通過現有成熟的多肽合成技術獲得，具有高純度，質量可控，成藥潛力較大等優點。
26、上述說明僅是本專利技術技術方案的概述，為了能夠更清楚了解本專利技術的技術手段，并可依照說明書的內容予以實施，以下以本專利技術的較佳實施例并配合詳細附圖說明如后。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種多肽，其特征在于，所述多肽包括SEQ?ID?NO.2所示序列，其中的氨基酸均為D-型且第10位絲氨酸經磷酸化修飾。
2.根據權利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽還包括融合在SEQ?ID?NO.2所示序列上的輔助序列；輔助序列用于增強所述多肽的干擾效果。
3.根據權利要求2所述的多肽，其特征在于，所述輔助序列包括SEQ?ID?NO.3所示的序列。
4.根據權利要求2所述的多肽，其特征在于，融合時，SEQ?ID?NO.2所示序列和輔助序列之間存在連接序列；連接序列由2～5個脯氨酸組成。
5.根據權利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽的序列如SEQ?ID?NO.1所示，其中的氨基酸均為D-型且第10位絲氨酸經磷酸化修飾。
6.根據權利要求5所述的多肽，其特征在于，所述多肽由以下步驟制備得到：
7.一種組合物，其特征在于，含有權利要求1-6任一項所述多肽。
8.權利要求1-6任一項所述多肽或權利要求7所述組合物在制備靶向制劑中的應用，其特征在于，制劑用于體內或體外靶向干擾FOXM1。p>
9.權利要求1-6任一項所述多肽或權利要求7所述組合物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
10.一種抗腫瘤藥物，其特征在于，含有權利要求1-6任一項所述多肽或權利要求7所述組合物。
...【技術特征摘要】
1.一種多肽，其特征在于，所述多肽包括seq?id?no.2所示序列，其中的氨基酸均為d-型且第10位絲氨酸經磷酸化修飾。
2.根據權利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽還包括融合在seq?id?no.2所示序列上的輔助序列；輔助序列用于增強所述多肽的干擾效果。
3.根據權利要求2所述的多肽，其特征在于，所述輔助序列包括seq?id?no.3所示的序列。
4.根據權利要求2所述的多肽，其特征在于，融合時，seq?id?no.2所示序列和輔助序列之間存在連接序列；連接序列由2～5個脯氨酸組成。
5.根據權利要求1所述的多肽，其特征在于，所...
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