人參皂甙納米微粒及其制備方法和用途技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種人參皂甙納米微粒及其制備方法和用途。將人參皂甙、膽固醇和卵磷脂三者以重量比２０∶１∶１混合，用非離子表面活性劑助溶。人參皂甙、膽固醇和卵磷脂三者相互作用，自動形成納米微粒。然后用透析或者超濾法除去非離子表面活性劑。由此形成的人參皂甙納米微粒（Ｇｉｎｓｏｍｅ）在電子顯微鏡下觀察為一種直徑為６０～８０ｎｍ的球狀微粒。Ｇｉｎｓｏｍｅ具有疫苗免疫佐劑的功能，增強(qiáng)疫苗誘導(dǎo)的體液免疫和細(xì)胞免疫功能，只需要１０微克就可以顯著提高抗原的免疫原性，在疫苗制造上具有廣泛用途。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種人參皂甙納米微粒(Ginsome)及其制備方法和用途。
技術(shù)介紹
佐劑是一類可以增強(qiáng)疫苗誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)強(qiáng)度或改變免疫反應(yīng)類型的物質(zhì)。自從上個世紀(jì)20年代Glenny發(fā)現(xiàn)氫氧化鋁鋁膠具有佐劑以來后，氫氧化鋁鋁膠是目前唯一經(jīng)過批準(zhǔn)的人用疫苗佐劑，已經(jīng)廣泛用于人獸疫苗的生產(chǎn)。但氫氧化鋁鋁膠佐劑有許多不足之處(1，2，3，4)，例如，1)它可促進(jìn)IgE抗體產(chǎn)生，容易誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生過敏反應(yīng)；2)注射后局部刺激性較大；3)多次注射含氫氧化鋁鋁膠的疫苗可以導(dǎo)致鋁鹽在局部累積，引起局部肌肉疾病；4)氫氧化鋁鋁膠主要促進(jìn)Th2類免疫反應(yīng)，而對Th1類免疫反應(yīng)促進(jìn)不大。Th1類免疫反應(yīng)主要是針對細(xì)胞內(nèi)寄生的病原微生物；Th2類免疫反應(yīng)主要是針對細(xì)胞外寄生的病原微生物和寄生蟲。所以，氫氧化鋁鋁膠主要用于細(xì)菌性菌苗的生產(chǎn)，而對于一些病毒疫苗的佐劑意義不大。傳統(tǒng)疫苗一般用全菌體或全病毒制成，含有多種抗原成分，它們當(dāng)中能夠產(chǎn)生保護(hù)性免疫反應(yīng)的只有少部分，其余的抗原非但沒有必要，還會引起一定的副反應(yīng)。隨著免疫學(xué)基礎(chǔ)理論研究的深入，以及抗原提純技術(shù)和基因工程技術(shù)的發(fā)展，出現(xiàn)了許多亞單位抗原和多肽抗原，有的抗原已經(jīng)能夠人工合成。和傳統(tǒng)菌疫苗比較，這些抗原具有分子量小、純度高、安全性好的優(yōu)點。但至今為止，開發(fā)成功的相關(guān)疫苗卻為數(shù)甚少。其原因之一是純化后抗原的免疫原性變差，難以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生足夠的免疫反應(yīng)。因此，研究既促進(jìn)Th1類又促進(jìn)Th2類免疫反應(yīng)的新型佐劑或提高亞單位疫苗的免疫效果具有重要意義。我們以前的研究表明，人參皂甙是一個安全的免疫佐劑。它不僅可以提高Th1類免疫反應(yīng)，還可提高Th2類免疫反應(yīng)(5，6，7，8， 9)。有關(guān)成果已經(jīng)獲得國家專利技術(shù)專利(10)。人參皂甙可以從中草藥人參Panaxginseng C.A.Mey的根，西洋參Panax quinquefolium L.的根，三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的根，或者絞股藍(lán)Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Mak.的全草中提取，是一類具有三萜皂甙化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物(11)。人參皂甙常用的提取方法是(12)用乙醇或甲醇溶劑提取，回收溶劑，將殘渣溶于水，濾除不溶物，水溶液用石油醚、苯或乙醚等親脂性有機(jī)溶劑作兩相萃取，以除去親脂性雜質(zhì)。然后改用水飽和的丁醇萃取，使皂甙轉(zhuǎn)移于丁醇。收集丁醇，減壓蒸干，的粗制人參皂甙。將粗制的人參皂甙溶解于少量甲醇或乙醇中，然后逐滴加入丙酮，混合均勻，即析出人參皂甙。如此處理數(shù)次，即可獲得精制人參皂甙。如此獲得的人參皂甙需要較大劑量才能發(fā)揮佐劑作用，直接作為動物疫苗的免疫佐劑相對成本較高。參考文獻(xiàn)1.Lindblad，L.B.& Sparck J.V.(1987)Basic concepts in the applicationof immunological adjuvants.Scand.J.Lab.Anim.Sci.141-132.Bomford，R.(1994)Adjuvants.InDale，M.M.et al.(Ed)Textbookof Immunopharmacology，3rded，Blackwell Scientific Publications，Oxford.pp.335-3393.Ott，G.，Nest，G.V.& Burke，R.L.(1994)The use of Muramyl peptidesas vaccine adjuvants.InInternational Business Communications-Newadvances in vaccine technologies and applications February 23-25，1994，pp.89-1144.Malakoff，D.Public Health.Aluminum is put on trial as a vaccinebooster.Science 2000，288，1323-13245.HU，S.，CONCHA，C，COORAY，R.HOLMBERG，O.Ginseng-enhanced oxidative andphagocytic activities of polymorphonuclear leucocytes from bovineperipheral blood and stripping milk.Vet.Res.1995，26，155-1616.CONCHA，C.，HU，S.，HOLMBERG，O.The proliferative responses of cowstripping milk and blood lymphocytes to pokeweed mitogen and ginsengin vitro.Vet.Res.1996，27，107-1157.HU，S.，CONCHA，C.，LIN，F(xiàn).，PERSSON WALLER，K.Adjuvant effect of ginsengextracts on the immune responses to immunization againstStaphylococcus aureus in dairy cattle.Vet.Immunol.Immunopathol.2003，91，29-378.RIVERA，E.，DAGGFELDT，A.，HU，S.Ginseng extract in aluminium hydroxideadjuvanted vaccines improves the antibody response of pigs to porcineparvovirus and Erysipelothrix rhusiopathiae.Vet.Immunol.Immuopathol.2003，91，19-279.Rivera，E.，Hu，S.，Concha，C.Ginseng and aluminium hydroxide actsynergistically as vaccine adjuvants.Vaccine 2003，21，1149-115710.人參總皂甙和單體皂甙Rb1的疫苗佐劑用途(專利號ZL02110578.2)；11.宋小妹，唐志書(主編)，中草藥化學(xué)成分提取分離與制備(第1版)，人民衛(wèi)生出版社，北京，2004年，第33頁，第51頁，第206頁，第394頁。12.王憲楷(主編)，天然藥物化學(xué)，第1版，人民衛(wèi)生出版社出版，北京，1988年，第549頁。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種人參皂甙納米微粒(Ginsome)及其制備方法和用途。人參皂甙納米微粒(Ginsome)是一種含有人參皂甙、膽固醇和卵磷脂的直徑為60～80nm的球狀微粒。人參皂甙納米微粒(Ginsome)的制備方法的步驟如下1)人參皂甙溶液的配制將人參皂甙溶解于蒸餾水，配成50～100mg/ml溶液，過濾除菌，備用；2)膽固醇/卵磷脂溶液的配制將非離子型表面活性劑，例如Mega-10，可用Sigma公司產(chǎn)品或辛基葡萄糖甙octylglucoside本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】
一種人參皂甙納米微粒，其特征在于，它是一種含有人參皂甙、膽固醇、卵磷脂的直徑為６０～８０ｎｍ的球狀微粒。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：胡松華，
申請(專利權(quán))人：浙江大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：86[中國|杭州]