【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本公開涉及核酸藥物，具體涉及一種含有末端核苷酸修飾的雙鏈寡核苷酸及其在抑制agt基因表達(dá)中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、血管緊張素原（agt），也被稱為serpina8或anhu，是serpin家族的成員并且是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（raas）的組分，raas在血壓調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用。腎臟的近腎小球細(xì)胞將腎素分泌至循環(huán)中。它主要在肝臟中產(chǎn)生，并且釋放到循環(huán)中，在此處腎素將其轉(zhuǎn)化為血管緊張素i。隨后通過血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ace）將血管緊張素i轉(zhuǎn)化成血管緊張素ii。血管緊張素ii是引起血管收縮的肽激素，其進(jìn)而可以增加血壓。血管緊張素ii也刺激腎上腺皮質(zhì)的激素醛固酮的分泌。醛固酮使腎臟增加鈉和水的重吸收，導(dǎo)致體內(nèi)流體體積的增加，進(jìn)而可以增加血壓。raas途徑的過度刺激或活動(dòng)可導(dǎo)致高的血壓。慢性高的血壓被稱為高血壓。高血壓患者的高的血壓需要心臟更加努力地使血液循環(huán)通過血管。
2、世界衛(wèi)生組織（who）已將高血壓確定為心血管發(fā)病的主要原因。高血壓是各種疾病、病癥和病狀的主要危險(xiǎn)因素，所述疾病、病癥和病狀諸如預(yù)期壽命縮短、慢性腎病、中風(fēng)、心肌梗塞、心力衰竭、血管動(dòng)脈瘤（例如主動(dòng)脈瘤）、外周動(dòng)脈疾病、心臟損傷（例如，心臟擴(kuò)大或肥大）和其他心血管相關(guān)疾病、病癥和/或病狀。
3、盡管可用于治療高血壓的抗壓藥數(shù)量大，但超過三分之二的受試者用一種抗壓藥不能得到控制并且需要兩種或更多種選自不同藥物類別的抗壓藥。由于依從性和副作用隨著用藥增加而增加，這進(jìn)一步降低了具有受控血壓的受試者的數(shù)量。因此，用于患有血管緊張素原相關(guān)疾病的受試
4、有鑒于此，特提出本公開。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本公開提供一種雙鏈寡核苷酸，所述雙鏈寡核苷酸可誘導(dǎo)沉默復(fù)合體（risc）-介導(dǎo)的血管緊張素原（agt）基因的rna轉(zhuǎn)錄物的切割，抑制agt基因的表達(dá)，可用于治療或預(yù)防由血管緊張素原（agt）基因介導(dǎo)的疾病或病癥。本公開還提供包括所述雙鏈寡核苷酸的綴合物、藥物組合物、試劑盒以及它們?cè)谝种苹蚪档蚢gt基因表達(dá)或治療agt基因介導(dǎo)的疾病或癥狀的方法和用途。
2、本公開包括如下技術(shù)方案：
3、在本公開的第一方面，本公開提供一種抑制agt基因表達(dá)的雙鏈寡核苷酸，所述雙鏈寡核苷酸包含正義鏈和反義鏈，所述反義鏈包含或選自如式（a）所示的任一條序列中的至少15個(gè)、至少16個(gè)、至少17個(gè)、至少18個(gè)、至少19個(gè)、至少20個(gè)或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或包含與所述連續(xù)核苷酸之間具有1、2或3個(gè)核苷酸差異的核苷酸序列；所述正義鏈包含至少17個(gè)核苷酸，且所述正義鏈與所述反義鏈互補(bǔ)或基本互補(bǔ)形成雙鏈體區(qū)，所述基本互補(bǔ)是指所述正義鏈和所述反義鏈在所述雙鏈體區(qū)的錯(cuò)配不超過3個(gè)核苷酸；
4、式（a）5'-x1guuucuucauccaguuga(x2)m(x3)n-3'；
5、其中，x1選自a或u；
6、(x2)m(x3)n表示3'端的突出堿基，x2、x3各自獨(dú)立的選自a、u、g、c或t，m和n獨(dú)立地選自0或1，且m+n≥1。
7、進(jìn)一步地，所述核苷酸x2、x3中的至少1個(gè)為[2’-r1-2’-r2]雙取代修飾核苷酸，所述雙取代修飾核苷酸指核苷酸的核糖2’位羥基和氫被取代的核苷酸，其中r1和r2各自獨(dú)立地選自鹵素（優(yōu)選f）、任選取代的c1-c6烷基（優(yōu)選甲基或乙基）或任選取代的c1-c6烷氧基（優(yōu)選甲氧基）。
8、在本公開的一些具體實(shí)施方式中，x1選自a。在本公開的另一些具體實(shí)施方式中，x1選自u(píng)。
9、在本公開的一些可選實(shí)施方式中，(x2)m(x3)n選自gg、uu、tt、cc、aa、g、u、t、c或a。在本公開的另一些可選實(shí)施方式中，(x2)m(x3)n選自u(píng)u或u。在本公開的一些具體實(shí)施方式中，(x2)m(x3)n選自u(píng)u。在本公開的另一些具體實(shí)施方式中，(x2)m(x3)n選自u(píng)。
10、根據(jù)本公開的實(shí)施例，所述反義鏈包含或選自a1）-a3）所示的任一條序列，或與上述任一序列具有1個(gè)或2個(gè)核苷酸差異的核苷酸序列：
11、a1）5'-aguuucuucauccaguugauu-3'；
12、a2）5'-aguuucuucauccaguugau-3'；
13、a3）5'-uguuucuucauccaguugauu-3'。
14、根據(jù)本公開的實(shí)施例，所述正義鏈包含或選自b1）-b2）所示的任一條序列中的至少15個(gè)、至少16個(gè)、至少17個(gè)、至少18個(gè)或至少19個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或包含與該連續(xù)核苷酸之間具有1、2或3個(gè)核苷酸差異的核苷酸序列；
15、b1）5'-ucaacuggaugaagaaacu-3'；
16、b2）5'-ucaacuggaugaagaaaca-3'。
17、在本公開的具體實(shí)施中，所述反義鏈包含或選自a1）-a3）所示的任一條序列，且所述正義鏈包含或選自b1）-b2）所示的任一條序列。
18、在本公開的一些具體實(shí)施方案中，所述雙鏈寡核苷酸選自下列中的一組或多組：
19、1）反義鏈具有如a1（seq?id?no.3）所示核苷酸序列，且正義鏈具有如b1（seq?idno.1）所示核苷酸序列；
20、2）反義鏈具有如a2（seq?id?no.4）所示核苷酸序列，且正義鏈具有如b1（seq?idno.1）所示核苷酸序列；
21、3）反義鏈具有如a3（seq?id?no.5）所示核苷酸序列，且正義鏈具有如b2（seq?idno.2）所示核苷酸序列。
22、表1?雙鏈寡核苷酸的裸序列核苷酸信息
23、
24、在本公開的一些實(shí)施方式中，所述雙鏈寡核苷酸中的每個(gè)核苷酸獨(dú)立地選自經(jīng)修飾或未修飾的核苷酸。
25、在本公開的一些實(shí)施方式中，所述雙鏈寡核苷酸的正義鏈或反義鏈中的至少一個(gè)核苷酸為修飾的核苷酸，例如，所述修飾的核苷酸為核糖基團(tuán)以及任選的磷酸基團(tuán)被修飾的核苷酸基團(tuán)，但不限于此。
26、根據(jù)本公開的實(shí)施例，所述雙鏈寡核苷酸中的全部核苷酸基本上都選自經(jīng)修飾的核苷酸。其中，“該雙鏈寡核苷酸中的全部核苷酸基本上都選自經(jīng)修飾的核苷酸”是指雙鏈寡核苷酸中的核苷酸大部分但不是全部為經(jīng)修飾的核苷酸，并且可以包含不多于5、4、3、2或1個(gè)未修飾的核苷酸。
27、根據(jù)本公開的實(shí)施例，所述雙鏈寡核苷酸中的全部核苷酸選自經(jīng)修飾的核苷酸，所述修飾包括核苷酸的核糖基2'位單取代或雙取代修飾中的一種或兩種。
28、其中，未修飾的核苷酸的結(jié)構(gòu)式為：，base代表核苷堿基，每個(gè)核苷酸上的核苷堿基獨(dú)立地選自尿嘧啶u、胸腺嘧啶t、胞嘧啶c、腺嘌呤a或鳥嘌呤g。
29、在本公開可選的實(shí)施方式中，所述雙鏈寡核苷酸中的每個(gè)核苷酸各自獨(dú)立地選自下列經(jīng)修飾的核苷酸：
30、2'-氟代修飾的核苷酸、2'-脫氧修本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種抑制AGT基因表達(dá)的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸包含正義鏈和反義鏈，所述反義鏈包含或選自如式（A）所示的序列中的至少15個(gè)、至少16個(gè)、至少17個(gè)、至少18個(gè)、至少19個(gè)、至少20個(gè)或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或包含與所述連續(xù)核苷酸之間具有1、2或3個(gè)核苷酸差異的核苷酸序列；所述正義鏈包含至少17個(gè)核苷酸，且所述正義鏈與所述反義鏈互補(bǔ)或基本互補(bǔ)形成雙鏈體區(qū)，所述基本互補(bǔ)是指所述正義鏈和所述反義鏈在所述雙鏈體區(qū)的錯(cuò)配不超過3個(gè)核苷酸；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述反義鏈包含或選自A1）-A3）所示的任一條序列，或與上述任一序列具有1個(gè)或2個(gè)核苷酸差異的核苷酸序列：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述反義鏈包含或選自A1）-A3）所示的任一條序列，且所述正義鏈包含或選自B1）-B2）所示的任一條序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸選自下列中的一組或多組：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸中的
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸中的全部核苷酸選自經(jīng)修飾的核苷酸，所述修飾包括核苷酸的核糖基2'位單取代修飾或2'位雙取代修飾，所述雙鏈寡核苷酸中的每個(gè)核苷酸各自獨(dú)立地選自下列經(jīng)修飾的核苷酸：2'-氟修飾的核苷酸、2'-O-甲基修飾的核苷酸、2'-O-甲氧基乙基修飾的核苷酸、[2'-F-2'-甲基]雙取代修飾的核苷酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸的每個(gè)核苷酸獨(dú)立地選自經(jīng)修飾的核苷酸，所述修飾選自下列（1）-（2）中的任一種：
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，按照5'末端到3'末端方向，所述雙鏈寡核苷酸的正義鏈包含或選自MB1）-?MB4）所示經(jīng)修飾的核苷酸序列的任一條：
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸選自組1）-組5）中一組或多組：
11.一種綴合物，其特征在于，所述綴合物包含權(quán)利要求1-10任一項(xiàng)所述的雙鏈寡核苷酸，以及綴合至所述雙鏈寡核苷酸上的一個(gè)或多個(gè)能夠與細(xì)胞表面受體結(jié)合的配體；
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的綴合物，其特征在于，所述配體具有如式（Ⅱ）所示的結(jié)構(gòu)、或其立體異構(gòu)體、或其互變異構(gòu)體、或其藥學(xué)上可接受的鹽：
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的綴合物，其特征在于，所述配體具有式（Ⅲ）、式（Ⅳ）、式（Ⅴ）或式（Ⅵ）所示的結(jié)構(gòu)，或其立體異構(gòu)體、或其互變異構(gòu)體、或其藥學(xué)上可接受的鹽：
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的綴合物，其特征在于，所述配體的數(shù)量選自一個(gè)，一個(gè)所述配體綴合到雙鏈寡核苷酸正義鏈的3'末端；或者，
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的綴合物，其特征在于，所述綴合物選自R303079、R303082、R303086、R303087、R303088、R303089中一組或多組。
16.一種藥物組合物，所述藥物組合物包括如下任意項(xiàng)以及藥學(xué)上可接受的輔料：
17.如下任意項(xiàng)在制備用于緩解、預(yù)防和/或治療AGT基因介導(dǎo)的疾病或病癥的藥物中的用途：
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種抑制agt基因表達(dá)的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸包含正義鏈和反義鏈，所述反義鏈包含或選自如式（a）所示的序列中的至少15個(gè)、至少16個(gè)、至少17個(gè)、至少18個(gè)、至少19個(gè)、至少20個(gè)或至少21個(gè)連續(xù)核苷酸的核苷酸序列，或包含與所述連續(xù)核苷酸之間具有1、2或3個(gè)核苷酸差異的核苷酸序列；所述正義鏈包含至少17個(gè)核苷酸，且所述正義鏈與所述反義鏈互補(bǔ)或基本互補(bǔ)形成雙鏈體區(qū)，所述基本互補(bǔ)是指所述正義鏈和所述反義鏈在所述雙鏈體區(qū)的錯(cuò)配不超過3個(gè)核苷酸；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述反義鏈包含或選自a1）-a3）所示的任一條序列，或與上述任一序列具有1個(gè)或2個(gè)核苷酸差異的核苷酸序列：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述反義鏈包含或選自a1）-a3）所示的任一條序列，且所述正義鏈包含或選自b1）-b2）所示的任一條序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸選自下列中的一組或多組：
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸中的全部核苷酸選自經(jīng)修飾的核苷酸，所述修飾包括核苷酸的核糖基2'位單取代或2'位雙取代修飾中的一種或兩種；
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸中的全部核苷酸選自經(jīng)修飾的核苷酸，所述修飾包括核苷酸的核糖基2'位單取代修飾或2'位雙取代修飾，所述雙鏈寡核苷酸中的每個(gè)核苷酸各自獨(dú)立地選自下列經(jīng)修飾的核苷酸：2'-氟修飾的核苷酸、2'-o-甲基修飾的核苷酸、2'-o-甲氧基乙基修飾的核苷酸、[2'-f-2'-甲基]雙取代修飾的核苷酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求6...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李海濤，黃淵余，孔麗娜，范志彬，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：蘇州炫景生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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