【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及基因治療領域，具體涉及一種載藥縫合線及其制備方法，利用縫合線作為載體，負載三型膠原和功能基因用于增強基因表達和傷口愈合的方法。
技術介紹
1、在傷口縫合過程中，手術縫合線廣泛用于各種組織的結扎止血、殘腔閉鎖及組織縫合不可或缺的材料，其主要分為不可吸收縫合線和可吸收縫合線兩大類。不可吸收縫合線因其代謝困難，在人體內易殘留，易產生炎癥反應等弊端，在體內應用受到限制。與不可吸收縫合線相比，可吸收縫合線因其良好的生物相容性;無抗原性；異物反應??；傷口愈合相對完整；無需拆線，減輕了病人痛苦，減少了傷口感染風險等優勢。能否在組織縫合的基礎上，進一步加快傷口恢復，減少病痛、減少愈合過程中瘢痕的產生也成為一個重要的問題。
2、目前對傷口愈合的基因療法有很多，通過向病人傷口處引入功能性正?；?，實質上是增加特定蛋白質的表達，將dna、rna等基因物質遞送至傷口區域。近年來，許多與傷口愈合相關的細胞因子和生長因子參與傷口愈合的事實被印證。例如，轉化生長因子β（tgf-β）、成纖維生長因子（fgf）、血管內皮生長因子（vegf）、基質金屬蛋白酶（mmps）家族等，就tgf-β家族而言，分為三個亞型,?tgf-β1、tgf-β2和tgf-β3，它們具有60%的同源性。與tgf-β1和tgf-β2不同的是，tgf-β3具有抑制纖維化的作用。在傷口中若是tgf-β1/tgf-β3的比值高,那么其在傷口愈合后更易形成瘢痕。這為臨床預防和治療傷口提供了新的思路和靶點。在上述基礎之上，我們考慮能否利用縫合線吸附相關基因藥物，無論是對于皮
3、然而基因藥物的成功表達，離不開非病毒基因載體的幫助，它具有制備簡單、低毒性、低免疫原性等優點，其中陽離子聚合物被廣泛研究并應用，聚乙烯亞胺（pei）是一種高效、低成本的非病毒載體，分子量為25?kda的大分子量pei具有較高的轉染效率，但因其強電荷性和不可降解性也導致了很強的細胞毒性，而小分子量pei雖易降解但轉染效率較為低下。脂質體lipo8000作為質粒載體較pei轉染效果更明顯。相比于pei這一類具有強正電荷的高分子材料，脂質體的雙分子層結構可能具有與細胞膜更好的相容性，相應的轉染的效果可能也會更強，這有待進一步驗證。
4、另一方面，我們還注意到的是，三型膠原在傷口愈合中的作用非常多樣化且綜合，它不僅僅是作為支架結構存在，還通過多種機制直接或間接地影響傷口愈合的各個方面，從而有效地促進受傷組織的恢復和修復，具體包括：能夠與細胞表面的受體結合，通過信號傳導途徑促進細胞增生和遷移，加速受傷區域的修復過程；在初期傷口愈合階段，三型膠原形成的臨時基質可以填補傷口空隙，防止進一步感染并促進愈合；有助于促進膠原合成和組織修復，有助于減少傷口處過度瘢痕組織的形成，使傷口愈合后的組織結構更加自然和完整；
5、此外，在傷口愈合中三型膠原還可以通過調節基質金屬蛋白酶活性，幫助平衡組織再生過程中的蛋白降解和合成，從而促進新組織的形成和成熟；它的存在可以增加傷口區域的抗拉強度，這對于恢復受損組織的結構完整性和功能至關重要。如果能與縫合線的表面相互作用，增加其在傷口區域的粘附性。這種作用就能進一步確?？p合線能夠牢固地保持在傷口周圍，從而促進傷口愈合的順利進行。
6、基于此，如果能將手術縫合線與三型膠原及功能基因藥物結合起來，在縫合傷口的同時，將外源性引入的三型膠原和功能基因在傷口愈合過程中長久留存并成功表達，對于組織恢復到傷前狀態將會有非常積極的作用。盡管如此，能否將三型膠原和功能性基因成功吸附在縫合線上，最終通過縫合并成功在體內完成基因遞送也成為一個關鍵問題。。
技術實現思路
1、針對上述技術問題，本專利技術的目的是提供一種載藥縫合線及其制備方法，是一種用于增強縫合線的基因吸附和傷口修復能力的方法。三型膠原蛋白因其具有較強的生物相容性和生物吸附性，附著在可吸收縫合線上之后能促進傷口愈合的同時，也增強了縫合線本身吸附基因藥物的能力，基因藥物被更高效的負載并表達，對促進組織正常功能恢復有積極作用。
2、本專利技術首先提供了一種載藥縫合線，將三型膠原蛋白和基因藥物依次吸附在可吸收聚合物縫合線表面。
3、本專利技術所述的可吸收聚合物縫合線選自聚乙醇酸（pga）、聚乳酸（pla）、聚（丙交酯-共-乙醇酸）(plga)、聚糖酸酯、聚（l-丙交酯-共-e-己內酯）、聚（e-己內酯）?(pcl)、聚（三亞甲基碳酸酯）?(ptmc)、聚羥基脂肪酸酯（pha）縫合線中的任意一種。
4、本專利技術所述的三型膠原蛋白為重組人源化三型膠原蛋白。
5、本專利技術所述的基因藥物為功能基因和非病毒基因載體組成的復合物。
6、進一步地，所述的功能基因具有調節傷口處生長因子表達，促進傷口愈合，減少愈合過程中纖維化，長期促進傷口恢復的作用。功能基因優選為tgf-β3基因；所述非病毒基因載體為納米脂質體或聚乙烯亞胺(pei)。
7、進一步地，納米脂質體優選lipo8000；pei優選支化聚乙烯亞胺，平均mw約為25000。
8、本專利技術其次提供了上述載藥縫合線的制備方法，包括如下步驟：
9、（1）將可吸收聚合物縫合線在三型膠原蛋白溶液中浸泡，充分吸附三型膠原蛋白后取出，晾干，得到表面包覆三型膠原蛋白的縫合線；
10、（2）將表面包覆三型膠原蛋白的縫合線浸泡在基因藥物溶液中，充分吸附后取出，晾干，即得載藥縫合線。
11、本專利技術首先用三型膠原對手術縫合線進行浸泡處理，利用三型膠原的以及縫合線自身的特性，進一步對功能基因進行高效吸附。進一步地，步驟（1）中三型膠原蛋白溶液的質量濃度為0.1-1mg/ml。
12、進一步的，所述基因藥物溶液是將pei25k與功能基因tgf-β3質粒按質量比1:1結合而得到；或，將lipo8000與tgf-β3質粒按1.6μl:1μg?結合而得到的。其中，tgf-β3質粒以溶液形式加入，其質量濃度為1-1.1mg/ml。
13、本專利技術還提供了上述載藥縫合線在作為促進傷口愈合和減少瘢痕組織的基因治療藥物中的應用。
14、與現有技術相比，本專利技術的有益效果在于，本專利技術利用可吸收聚合物縫合線的吸附性能，通過簡單的浸泡吸附，首先在縫合線上附著了三型膠原，增強了縫合線的吸附能力，提高對后續基因藥物的吸附，并能發揮其在傷口恢復中產生積極的作用；其次，本專利技術還發現三型膠原不僅提高了基因藥物的吸附量，還能進一步提高基因遞送效率。
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1.一種載藥縫合線，其特征在于，三型膠原蛋白和基因藥物依次吸附在可吸收聚合物縫合線表面。
2.根據權利要求1所述的載藥縫合線，其特征在于，所述可吸收聚合物縫合線選自聚乙醇酸（PGA）、聚乳酸（PLA）、聚（丙交酯-共-乙醇酸）(PLGA)、聚糖酸酯、聚（L-丙交酯-共-e-己內酯）、聚（e-己內酯）?(PCL)、聚（三亞甲基碳酸酯）?(PTMC)、聚羥基脂肪酸酯（PHA）縫合線中的任意一種。
3.根據權利要求1所述的載藥縫合線，其特征在于，所述三型膠原蛋白為重組人源化三型膠原蛋白。
4.根據權利要求1所述的載藥縫合線，其特征在于，所述基因藥物為功能基因和非病毒基因載體組成的復合物。
5.根據權利要求4所述的載藥縫合線，其特征在于，所述功能基因為TGF-β3基因；所述非病毒基因載體為納米脂質體或聚乙烯亞胺。
6.權利要求1-5任一項所述的載藥縫合線的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：（1）將可吸收聚合物縫合線在三型膠原蛋白溶液中浸泡，充分吸附三型膠原蛋白后取出，晾干，得到表面包覆三型膠原蛋白的縫合線；（2）將表面包覆三型
7.根據權利要求6所述的載藥縫合線的制備方法，其特征在于，步驟（1）中三型膠原蛋白溶液的質量濃度為0.1-1mg/mL。
8.根據權利要求6所述的載藥縫合線的制備方法，其特征在于，步驟（2）所述基因藥物溶液中功能基因與非病毒基因載體的質量體積比為1g:1.6L。
9.根據權利要求6所述的載藥縫合線的制備方法，其特征在于，步驟（2）所述基因藥物溶液中功能基因的濃度為0.3-0.4g/L。
10.權利要求1-5任一項所述的載藥縫合線或權利要求6-9任一項所述方法制備的載藥縫合線在作為促進傷口愈合和減少瘢痕組織的基因治療藥物中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種載藥縫合線，其特征在于，三型膠原蛋白和基因藥物依次吸附在可吸收聚合物縫合線表面。
2.根據權利要求1所述的載藥縫合線，其特征在于，所述可吸收聚合物縫合線選自聚乙醇酸（pga）、聚乳酸（pla）、聚（丙交酯-共-乙醇酸）(plga)、聚糖酸酯、聚（l-丙交酯-共-e-己內酯）、聚（e-己內酯）?(pcl)、聚（三亞甲基碳酸酯）?(ptmc)、聚羥基脂肪酸酯（pha）縫合線中的任意一種。
3.根據權利要求1所述的載藥縫合線，其特征在于，所述三型膠原蛋白為重組人源化三型膠原蛋白。
4.根據權利要求1所述的載藥縫合線，其特征在于，所述基因藥物為功能基因和非病毒基因載體組成的復合物。
5.根據權利要求4所述的載藥縫合線，其特征在于，所述功能基因為tgf-β3基因；所述非病毒基因載體為納米脂質體或聚乙烯亞胺。
6.權利要求1-5任一項所述的載藥縫合線的制備方法，...
【專利技術屬性】
技術研發人員：崔朋飛，白賀，張薇，嚴萱萱，王程，王建浩，
申請(專利權)人：常州大學，
類型：發明
國別省市：
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