含蜂膠佐劑的人用疫苗及其制備方法技術

含蜂膠佐劑的人用疫苗及其制備方法，各種疫苗每毫升含蜂膠佐劑為２－２０毫克，尺度一般要大于免疫活性抗原５－１０納米。粗蜂膠→冷凍→粉碎→提取→濾液→過濾→連續離心→除去殘渣→除去沉淀→加疫苗→納米技術處理→超濾→真空濃縮→含蜂膠佐劑的人用疫苗→凍藏保存。具有滅活劑、防腐劑、免疫增強劑、穩定劑和促滲劑“五位一體”的功效。安全可靠無化學殘留，對人體無毒副作用；免疫抗體形成快速、高效、持久；免疫期延長達一倍以上；能全面啟動機體的免疫防衛系統；巧妙地解決了疫苗快速與持久相矛盾的難題；產生各種細胞因子；能顯著增強機體的非特異性免疫力；是天然的抗生素和抗病毒物質，無需添加任何抗生素和防腐劑；更易于運輸和保存；使用更方便。

【技術實現步驟摘要】
所屬領域本專利技術涉及疫苗及其制備方法。具體地說，是涉及蜂膠提取、純化達到“三脫一溶”(脫鉛、脫敏、脫色，溶于水)的要求；并用納米技術裂解的，屬于生物藥品領域。
技術介紹
蜂膠是蜜蜂從膠源植物新生枝葉芽或樹皮上或花蕾處采集的樹膠(樹脂類物質)，混以蜜蜂上腭腺及蠟腺分泌物的臘質加工而成的芬香性不透明的膠狀固體，它是經蜜蜂反復加工涂到蜂巢入口、內壁，以保持巢內相對無菌狀態的膠塊狀物質。所以蜂膠是蜜蜂生命延生的物質基礎。當蜂王產卵前，蜜蜂預先在巢房內涂抹蜂膠，蜂王只在涂過蜂膠的巢房里產卵。由于有了蜂膠的保護與營養，加上蜜蜂的哺育及充足的食料供應，經過產卵、孵化、幼蟲，蛹這一發育過程，很快成長為新的蜜蜂個體。蜂膠是蜜蜂的神奇藥品，無論是野生還是家養的蜜蜂，都必須經歷幼齡、青年、壯年、老年的生命過程，在這一過程中也會受到細菌、真菌、霉菌、病毒，病原蟲的侵害，蜜蜂的抗病力與自愈力特別強，因為他們擁有蜂膠。當蜂場到沒有膠源植物放蜂時，蜂群中的蜂膠消耗殆盡，蜜蜂抗感染能力下降，便會爆發毀滅性的“幼蟲腐臭病”，即使大劑量抗生素也很難奏效，當蜂場來到有膠源植物的場地，蜜蜂生產并使用蜂膠，“幼蟲腐臭病”自然治愈，蜜蜂生命群體蓬勃發展。可見蜂膠是天然消毒劑，天然防腐劑。蜜蜂生產的蜂膠，主要儲存于巢內蜂路兩邊與頂部，以及蜂巢縫隙處。當蜜蜂從野外工作回巢，要通過三面都有蜂膠的蜂路，就完成了嚴格的消毒殺菌，蜂巢縫隙處的蜂膠，相當于一道消毒殺菌，保護蜂群免受外界不良因素侵害的屏障。野生或家養的蜜蜂每群有好幾萬只，它們群居的蜂巢內陰暗潮濕，空間狹小，存有大量營養豐富的蜂產品，濕度等條件非常適合微生物生長。但是，蜂巢內非常清潔，衛生狀況極好，永遠不會發現任何發霉變質的東西，蜂巢內貯存有大量的蜂產品，老鼠，蜥蜴等小動物偶爾會侵入掠食，蜜蜂立即群起而攻之，將其蟄死后在尸體表面涂一層蜂膠。于是尸體就不會腐敗了，這都是蜂膠的功效。因此人們稱蜂膠是蜜蜂王國的“保護神”。蜂膠是天上眾神通過蜜蜂給人類帶來的至高無尚的治療“仙丹”，是藥物成份高度濃縮物。蜂膠的有效成分是樹脂(55％)、蜂蠟(30％)、精油(10％)與花粉(5％)所組成的混合物。樹脂是植物的分泌物含有許多具有抗氧化作用的類黃酮素。蜂膠里含有其特有的芳香味，就是來自植物的精油，而這些香精亦具有療效。蜂膠中主要作用的功效成份是黃酮類化合物，目前已經分離確認的就有30多種。還有阿魏酸等10多種芳香酸，香豆酸苯乙酯等30多種芳香酯，當歸酸等30多種脂肪酸及酯類化合物，賴氨酸等20多種氨基酸，沒藥醇等10多種萜烯類化合物，鋅等30多種礦物質，維生素P等多種維生素，胰蛋白酶等多種活性酶；目前，科技工作者已經基本搞清了蜂膠的組成成份，是一種稀有珍貴的蜂產品，一般情況下每群蜂幾萬只每天只能生產生0.2克左右。神奇的蜂膠具有天然的防腐、抑菌、殺菌、抗病毒作用，提高機體免疫能力，抑制腫瘤細胞，鎮痛，降低血糖功能。所以有著廣泛的醫療和保健作用。因此，我國權威藥典《中華本草》列舉蜂膠有八大功效抗病原微生物；增強免疫功能；調節神經機能；促進組織修復；改善血液循環；保護肝功；清除自由基；無毒副作用。但是，目前蜂膠應用有限，僅限于口服，尚未在生化領域開發和應用，生物藥品方面更是欠缺。
技術實現思路
本專利技術是，針對人用疫苗要求更高、更嚴、更安全，更有效，通過對蜂膠原料的標化、提取、純化變共達到“三脫一溶”的技術，與疫苗免疫抗原配比并納米技術裂解，制備出人用蜂膠佐劑疫苗。含蜂膠佐劑的人用疫苗，各種疫苗每毫升含蜂膠佐劑為2-20毫克，尺度一般要大于免疫活性抗原5-10納米。疫苗免疫活性抗原與蜂膠佐劑的配比及納米技術處理，各種疫苗滅活后，免疫活性抗原符合國家規定的標準，每毫升含蜂膠佐劑為2-20毫克為宜。按此比例配好，再按疫苗免疫活性抗原納米尺度大小，選擇最佳納米尺度，一般要大于免疫活性抗原5-10納米，用納米對撞機，進行納米技術處理，使疫苗與佐劑充分裂解、乳化和均質，以提高和增強免疫活性、穩定性、防腐性和滲透性及進一步疫苗的滅活性。確保疫苗安全可靠，有效穩定。含蜂膠佐劑的人用疫苗制備方法粗蜂膠→冷凍→粉碎→提取→濾液→過濾→連續離心→除去殘渣→除去沉淀→加疫苗→納米技術處理→超濾→真空濃縮→含蜂膠佐劑的人用疫苗→凍藏保存。1.嚴格蜂膠原料來源和標準控制蜂膠屬于環保生態型天然有機保健醫藥食品。用于人用疫苗佐劑必須遵循“綠色制造”保真正“純天然，無污染，富活性，高品質”的原料，最好取自產于國家級自然保護區，如東北長白山、興安嶺產地蜂膠等；最低要符合國家SB/T10096-92行業標準，還必須備有國家權威研究機構出示檢定報告或從國家農科院蜜蜂研究所提取純化的符合標準的蜂膠產品作為疫苗佐劑原料。2.合格蜂膠原料提取純化，確保佐劑無毒、安全高效、穩定。疫苗佐劑天然蜂膠在采集過程中混入的蜂蠟、蜂尸等雜質，因此，在生產蜂膠產品時需要對粗蜂膠進行提取純化。目前，在所有的溶劑中，乙醇被認為是疫苗佐劑最理想的溶劑。含蜂膠佐劑的人用疫苗制備工藝流程及操作要點如下(1)工藝流程(見圖1)(2)操作要點1.冷凍處理 原料蜂膠由于在常溫下呈粘滯狀態，很難對其進行粉碎，因此，必須將蜂膠進行冷凍處理，通常在-5-8℃條件下冷凍5-6小時，使蜂膠變硬，變脆。2.蜂膠的粉碎 為了加快蜂膠有效成分溶入溶劑中，必須對其進行粉碎，以增加蜂膠和溶劑的接觸面積，溶出速度也隨之加快。由于蜂膠遇熱變軟，很容易粘在容器上，因此經冷凍后的蜂膠應盡快在10-15分鐘內用球磨機進行粉碎。球磨機是一種適合粉碎結晶物料、易熔化的樹脂、樹膠及其他非組織性脆性物料的粉碎設備。在操作時將大塊蜂膠進行粗破碎，然后裝入球磨機的罐內并蓋嚴，由電動機帶動球罐轉動，轉速控制在使其中的圓球能在一定的角度落下的速度。蜂膠在圓球起落產生的撞擊作用、圓球與罐壁及球與球之間的研磨作用中被粉碎。蜂膠一般被粉碎15-25目即可，不可粉碎得過小，否則蜂膠提取液在過濾時很困難。另外，球磨機的工作環境應在10-15℃，否則，因摩擦和撞擊產熱，引起蜂膠熔化，難以實施粉碎作業。3.蜂膠的浸提操作 天然蜂膠幾乎不溶于水，我們選最佳溶劑乙醇來提純蜂蛟，按1∶5比例加75-95％乙醇，浸提30-35小時，并正常攪拌。4.過濾 置于儲罐中的蜂膠溶液加2-2.5％活性炭充分攪拌后靜置24小時，上清液用過濾機過濾，濾400-600目，即得到澄清的蜂膠溶液。5.超濾 離心和納米技術處理 澄清蜂膠溶液用(3000-5000轉/分)連續離心，除去沉淀(脫鉛)，離心溶液再用8000-10000萬分子量超濾膜超濾，以除去過敏原脫敏，最后用納米技術處理，較好解決水溶性問題。6.真空濃縮回收乙醇 采用真空濃縮，具體操作(1)將蜂膠溶液泵入濃縮鍋內；(2)接通冷凝器的冷卻水；(3)開啟水力真空泵，使濃縮罐內的真空度達到66.7KPa(500mmHG)；(4)接通蒸汽或熱水加熱器；(5)控制蒸汽壓使罐內溫度達到125-145℃，罐內蜂膠提取液開始沸騰，乙醇蒸氣由導管進入冷凝器，乙醇蒸氣被液化流入儲罐中；(6)乙醇揮發完后，停止水力真空泵和蒸氣，等罐冷卻后再關閉冷卻水；(7)放出蜂膠膏，冷卻、分割、稱量、包裝。蜂膠佐劑疫苗的動物實驗(1本文檔來自技高網...

【技術保護點】
含蜂膠佐劑的人用疫苗，各種疫苗每毫升含蜂膠佐劑為２－２０毫克，尺度一般要大于免疫活性抗原５－１０納米。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：茍仕金，茍鴻鷹，王成余，
申請(專利權)人：遼寧天成生物制藥研究所有限公司，
類型：發明
國別省市：89[中國|沈陽]