【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及核酸藥物，尤其是涉及一種抑制usp20基因表達的雙鏈寡核苷酸及其應用。
技術介紹
1、泛素特異性蛋白酶(usp20)以獨特機制調節膽固醇代謝。研究發現，敲低usp20可以高效削弱hmg-coa還原酶(hmgcr，膽固醇生物合成途徑中的限速酶)的穩定性，促進其降解以減弱催化膽固醇的合成，從而在源頭上抑制膽固醇的合成和產生。具體而言，膽固醇合成途徑中的限速酶hmgcr在進食后顯著上調，其中泛素特異性蛋白酶20(usp20，一種去泛素化酶)磷酸化修飾扮演了重要角色。餐后升高的葡萄糖和胰島素會刺激mtorc1在s132和s134磷酸化usp20，usp20與gp78結合，被招募到hmgcr復合物中并拮抗其降解從而起到穩定hmgcr的作用，促進膽固醇的合成。usp20的基因缺失或藥理抑制作用亦可顯著降低飲食引起的體重增加，降低血清和肝臟中的脂質水平，提高胰島素敏感性并增加能量消耗。另外，在高糖高脂飲食情況下，抑制usp20活性，可以顯著降低膽固醇、甘油三酯水平，減輕體重、改善胰島素敏感性。膽固醇是機體內重要的代謝產物，與眾多生理病理過程相關，降膽固醇藥物在動脈粥樣硬化性心血管疾病(ascvd)預防中具有重要作用。上述研究表明usp20可以作為新的肝靶向藥物靶點，有望治療包括高脂血癥、肝臟脂肪癥、肥胖和糖尿病等在內的代謝性疾病。
2、小干擾rna(sirna)基于rna干擾機制，可以序列特異性的方式抑制或阻斷目的基因的表達，從而達到治療疾病的目的。因此通過抑制usp20基因的表達，能夠在細胞水平上對膽固醇水平異常引
3、有鑒于此，特提出本專利技術。
技術實現思路
1、針對臨床降血脂、控制代謝綜合征和心腦血管疾病需求，本專利技術以去泛素化酶usp20為靶點開發了能夠降低膽固醇水平、進而預防或控制代謝綜合征的小核酸分子藥物。本專利技術的第一目的在于提供一種抑制usp20基因表達的雙鏈寡核苷酸及其綴合物、藥物組合物、試劑盒以及它們在抑制或降低usp20基因表達或治療usp20基因介導的疾病或癥狀的方法和用途。
2、為解決上述技術問題，本專利技術特采用如下技術方案：
3、根據本專利技術的一個方面，提供了一種抑制usp20基因表達的雙鏈寡核苷酸，所述雙鏈寡核苷酸包括正義鏈和反義鏈，所述正義鏈和所述反義鏈互補或基本互補形成雙鏈區；所述基本互補是指所述正義鏈和所述反義鏈在所述雙鏈區錯配不超過3個核苷酸；
4、其中，所述正義鏈包含至少15個與seq?id?no:349基本相同的連續核苷酸，所述基本相同指所述正義鏈與seq?id?no:349序列中的至少15個連續核苷酸之間具有不超過3個核苷酸差異；
5、其中，所述反義鏈包含至少15個核苷酸且與所述正義鏈互補或基本互補；
6、所述雙鏈寡核苷酸的每個核苷酸為未修飾或經過修飾的核苷酸；
7、任選地，所述雙鏈寡核苷酸中的至少一個核苷酸經過修飾。
8、根據本專利技術的另一個方面，提供了一種鏈寡核苷酸綴合物，所述雙鏈寡核苷酸綴合物包含上述雙鏈寡核苷酸和綴合基團；其中，所述綴合基團包括藥學上可接受的靶向基團和/或遞送輔助基團。
9、根據本專利技術的一個方面，提供了一種上述雙鏈寡核苷酸或上述雙鏈寡核苷酸綴合物在制備用于緩解、預防和/或治療由usp20基因介導的疾病或病癥的藥物中的應用。
10、根據本專利技術的一個方面，提供了一種藥物組合物，包含上述雙鏈寡核苷酸、其異構體或其藥學上可接受的鹽，或包含上述雙鏈寡核苷酸綴合物、其異構體或其藥學上可接受的鹽；還包含治療劑和/或藥學上任選的輔料。
11、根據本專利技術的一個方面，提供了一種試劑盒，所述試劑盒包含上述雙鏈寡核苷酸上述雙鏈寡核苷酸綴合物，或上述藥物組合物。
12、根據本專利技術的一個方面，提供了一種抑制usp20基因表達的方法，所述方法包括向受試者施用上述雙鏈寡核苷酸或上述雙鏈寡核苷酸綴合物，或上述藥物組合物。
13、根據本專利技術的一個方面，提供了一種緩解、治療和/或預防usp20介導的疾病或病癥的方法，所述方法包括向受試者施用上述雙鏈寡核苷酸或上述雙鏈寡核苷酸綴合物，或向受試者施用上述藥物組合物。
14、與現有技術相比，本專利技術具有如下有益效果：
15、本專利技術提供的雙鏈寡核苷酸和藥物組合物在體外細胞實驗中顯示出優異的usp20基因表達調節活性。例如，本專利技術的雙鏈寡核苷酸在c57bl/6小鼠細胞中顯示出優異的usp20?mrna抑制活性，在10nm的sirna濃度下，目標基因usp20抑制率最高可達93％以上(rz004027)。
16、由此說明，本公開提供的雙鏈寡核苷酸、藥物組合物以及寡核苷酸綴合物能夠有效調節目標基因usp20的表達水平，因此可有效治療和/或預防由usp20基因表達的mrna水平相關的疾病癥狀，具有良好的應用前景。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種抑制USP20基因表達的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸包括正義鏈和反義鏈，所述正義鏈和所述反義鏈互補或基本互補形成雙鏈區；所述基本互補是指所述正義鏈和所述反義鏈在所述雙鏈區錯配不超過3個核苷酸；
2.根據權利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述反義鏈與SEQ?ID?NO:349的核苷酸序列的至少15個、16個、17個，18個、19個、20個、21個、22個或23個連續的核苷酸互補或基本互補，所述基本互補指在互補區域的錯配不超過3個核苷酸。
3.根據權利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述正義鏈包含至少15個與SEQID?NO:349的核苷酸序列差異不超過2個核苷酸的連續核苷酸；且，所述正義鏈的核苷酸和所述反義鏈的核苷酸基本上全部是修飾的核苷酸，以及，所述雙鏈區的長度為15-25bp；其中，基本上全部是修飾的核苷酸指的是該鏈上未修飾的核苷酸數目不超過5個，優選不超過3個，更優選不超過1個。
4.根據權利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述反義鏈包含與表1中所列反義序列的任一個相差不超過3個核苷酸的至少15個連
5.根據權利要求1-4任一項所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述正義鏈和/或反義鏈含有至少一個核糖2′位羥基被大基團2′-O(CH2)nOR取代的核苷酸，其中，n為1或2，R選自：取代或未取代的C1-C6烷基，取代的或未取代的C1-C6烷氧基；其中，所述取代基選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、羥基、氨基、碳原子數不超過6的環烷基、碳原子數不超過12的芳基或雜芳基。
6.根據權利要求1-4任一項所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸的核苷酸還包括下列修飾的一種或多種；
7.根據權利要求1-6任一項所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸由修飾的核苷酸組成，且所述正義鏈選自下列(A1)-(A7)中的任意一種，且所述反義鏈選自(A8)-(A14)中的任意一種：
8.一種雙鏈寡核苷酸綴合物，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸綴合物包含權利要求1-7中任一項所述的雙鏈寡核苷酸和綴合基團；其中，所述綴合基團包括藥學上可接受的靶向基團和/或遞送輔助基團；
9.根據權利要求8所述的雙鏈寡核苷酸綴合物，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸與含有N-乙酰半乳糖胺單元的綴合基團通過共價綴合，該雙鏈寡核苷酸如式(Ⅰ)或式(Ⅱ)所示；
10.根據權利要求8所述的雙鏈寡核苷酸綴合物，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸綴合物如式(Ⅲ)所示；
11.權利要求1-7任一項所述的雙鏈寡核苷酸或權利要求8-10任一項所述的雙鏈寡核苷酸綴合物在制備用于緩解、預防和/或治療由USP20基因介導的疾病或病癥的藥物中的應用；
12.藥物組合物，其特征在于，包含權利要求1-7任一項所述的雙鏈寡核苷酸、其異構體或其藥學上可接受的鹽，或包含權利要求8-10任一項所述的雙鏈寡核苷酸綴合物、其異構體或其藥學上可接受的鹽；還包含治療劑和/或藥學上任選的輔料。
13.試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含權利要求1-7任一項所述的雙鏈寡核苷酸或權利要求8-10任一項所述的雙鏈寡核苷酸綴合物，或權利要求12所述的藥物組合物。
14.一種抑制USP20基因表達的方法，其特征在于，所述方法包括向受試者施用權利要求1-7任一項所述的雙鏈寡核苷酸或權利要求8-10任一項所述的雙鏈寡核苷酸綴合物，或權利要求12所述的藥物組合物；
15.一種緩解、治療和/或預防USP20介導的疾病或病癥的方法，其特征在于，所述方法包括向受試者施用權利要求1-7任一項所述的雙鏈寡核苷酸或權利要求8-10任一項所述的雙鏈寡核苷酸綴合物，或向受試者施用權利要求12所述的藥物組合物；
...【技術特征摘要】
1.一種抑制usp20基因表達的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸包括正義鏈和反義鏈，所述正義鏈和所述反義鏈互補或基本互補形成雙鏈區；所述基本互補是指所述正義鏈和所述反義鏈在所述雙鏈區錯配不超過3個核苷酸；
2.根據權利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述反義鏈與seq?id?no:349的核苷酸序列的至少15個、16個、17個，18個、19個、20個、21個、22個或23個連續的核苷酸互補或基本互補，所述基本互補指在互補區域的錯配不超過3個核苷酸。
3.根據權利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述正義鏈包含至少15個與seqid?no:349的核苷酸序列差異不超過2個核苷酸的連續核苷酸；且，所述正義鏈的核苷酸和所述反義鏈的核苷酸基本上全部是修飾的核苷酸，以及，所述雙鏈區的長度為15-25bp；其中，基本上全部是修飾的核苷酸指的是該鏈上未修飾的核苷酸數目不超過5個，優選不超過3個，更優選不超過1個。
4.根據權利要求1所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述反義鏈包含與表1中所列反義序列的任一個相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸的序列，并且其中所述正義鏈包含與表1中所列正義序列的任一個相差不超過3個核苷酸的至少15個連續核苷酸的序列；
5.根據權利要求1-4任一項所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述正義鏈和/或反義鏈含有至少一個核糖2′位羥基被大基團2′-o(ch2)nor取代的核苷酸，其中，n為1或2，r選自：取代或未取代的c1-c6烷基，取代的或未取代的c1-c6烷氧基；其中，所述取代基選自鹵素、c1-c6烷基、c1-c6烷氧基、羥基、氨基、碳原子數不超過6的環烷基、碳原子數不超過12的芳基或雜芳基。
6.根據權利要求1-4任一項所述的雙鏈寡核苷酸，其特征在于，所述雙鏈寡核苷酸的核苷酸還包括下列修飾的一種或多種；
7.根據權利要求1-6任一項所述的雙鏈寡核苷酸...
【專利技術屬性】
技術研發人員：黃淵余，孔麗娜，
申請(專利權)人：蘇州炫景生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。