【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物與新醫藥，具體地，涉及豬流行性腹瀉病毒毒株、納米抗體和抗體雞尾酒。
技術介紹
1、豬流行性腹瀉(porcine?epidemic?diarrhea,ped)是由豬流行性腹瀉病毒(porcine?epidemic?diarrhea?virus,pedv)引起的一種以急性腹瀉為主要特征的豬腸道傳染病。該病以急性水樣腹瀉、嘔吐、脫水為主要特征，死亡率較高，特別是對于新生仔豬和斷奶仔豬，具有極高的致死率。此疾病1971年在英國發生腹瀉的育肥豬中被首次報道。1978年由比利時根特大學科學家debouck等從患病豬的病料中成功分離到該病原，將其定名為cv777毒株，并通過一系列試驗表明該病原對哺乳仔豬和育肥豬均有致病性。2010年，pedv的一個高毒力新變種(經鑒定為g2型)在中國出現。這種新的pedv變種導致新生仔豬的高發病率和高死亡率。根據報道，g1突變株和與cv777親緣關系較遠的g2型毒株目前均處于流行狀態。疫苗接種是預防ped和緩解疫情的主要方式。亞單位疫苗、病毒載體疫苗、細菌載體疫苗等新型疫苗的出現為ped的防治提供了更多的可能性。但是不容忽視的是，一直以來，由于病毒的高變異性，現有商品化疫苗的預防效果并不理想。到目前為止還沒有有效的預防措施以應對和控制新生仔豬ped的季節性暴發。ped仍然給養豬業造成重大經濟損失。
2、深入理解抗原表位的結構和功能對于開發免疫治療藥物是極其關鍵的。作為體液免疫系統起關鍵作用的因子，抗體早在19世紀后期就已經應用于臨床治療。之后隨著人們對抗體基因研究的不斷深入和分子
3、因此，提供一種能夠與pedv特異性結合，體外無毒性，能有效中和pedv感染，為pedv的治療和預防pedv誘導的腹瀉提供新的方向的納米抗體是本專利技術亟需解決的問題。
技術實現思路
1、針對上述現有技術，本專利技術的目的在于針對現有技術中對于pedv的有效疫苗較少等問題，從而提供一種豬流行性腹瀉病毒毒株、納米抗體和抗體雞尾酒，通過該納米抗體具有的體積小、易于遺傳操作、特異性強、溶解性好等特點，為基于vhh的預防和治療pedv感染的藥物的研究提供新的方向。
2、為了實現上述目的，本專利技術提供了一種豬流行性腹瀉病毒毒株，所述豬流行性腹瀉病毒毒株為豬流行性腹瀉病毒pedv-jsxh-2021毒株，其保藏號為cgmcc?no.46088，于2024年8月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏單位地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號。
3、本專利技術還提供了一種針對豬流行性腹瀉病毒的納米抗體，所述納米抗體通過對所述豬流行性腹瀉病毒pedv-jsxh-2021毒株采用酵母雙雜交篩選獲得。
4、優選地，所述納米抗體為氨基酸序列如seq?id?no:1所示的第一納米抗體(其cdr1序列如seq?id?no:15所示，其cdr2序列如seq?id?no:16所示，其cdr3序列如seq?id?no:17所示)；或者，
5、所述納米抗體為氨基酸序列如seq?id?no:2所示的第二納米抗體(其cdr1序列如seq?id?no:18所示，其cdr2序列如seq?id?no:19所示，其cdr3序列如seq?id?no:20所示)；或者，
6、所述納米抗體為氨基酸序列如seq?id?no:3所示的第三納米抗體(其cdr1序列如seq?id?no:21所示，其cdr2序列如seq?id?no:22所示，其cdr3序列如seq?id?no:23所示)；或者，
7、所述納米抗體為氨基酸序列如seq?id?no:4所示的第四納米抗體(其cdr1序列如seq?id?no:18所示，其cdr2序列如seq?id?no:19所示，其cdr3序列如seq?id?no:24所示)；或者，
8、所述納米抗體為氨基酸序列如seq?id?no:5所示的第五納米抗體(其cdr1序列如seq?id?no:18所示，其cdr2序列如seq?id?no:19所示，其cdr3序列如seq?id?no:25所示)；或者，
9、所述納米抗體為氨基酸序列如seq?id?no:6所示的第六納米抗體(其cdr1序列如seq?id?no:26所示，其cdr2序列如seq?id?no:27所示，其cdr3序列如seq?id?no:28所示)；或者，
10、所述納米抗體為氨基酸序列如seq?id?no:7所示的第七納米抗體(其cdr1序列如seq?id?no:18所示，其cdr2序列如seq?id?no:19所示，其cdr3序列如seq?id?no:29所示)；或者，
11、所述納米抗體為氨基酸序列如seq?id?no:8所示的第八納米抗體(其cdr1序列如seq?id?no:18所示，其cdr2序列如seq?id?no:19所示，其cdr3序列如seq?id?no:30所示)。
12、優選地，所述納米抗體的制備方法具體包括：
13、s100、提取所述豬流行性腹瀉病毒pedv-jsxh-2021毒株的rna后反轉錄，以反轉錄后獲得的cdna為模板，對所述豬流行性腹瀉病毒pedv-jsxh-2021毒株進行擴增后測序，得到所述豬流行性腹瀉病毒pedv-jsxh-2021毒株的s基因序列，將s基因序列連接到載體，得到誘餌質粒；
14、s200、將文庫質粒和步驟s100中獲得的誘餌質粒轉化到酵母細胞中，將轉化后的酵母細胞涂布于sd-tlh培養基上培養后，挑取長出的克隆單菌落，篩選獲得陽性酵母克隆；
15、s300、提取步驟s300中獲得的陽性酵母克隆質粒并經pcr擴增、測序后，經過seqman、blast比對，得到所述納米抗體的編碼基因；
16、s400、表達步驟s300中的所述納米抗體的編碼基因，對應獲得所述納米抗體。
17、優選地，步驟s100中，擴增過程為分段式pcr擴增，通過對分段擴增后的多段擴增產物分別測序后拼接，得到所述豬流行性腹瀉病毒pedv-jsxh-2021毒株的s基因序列。
18、優選，分段式pcr擴增過程采用兩對引物對進行擴增，且第一擴增引物對如seq?idno:9和seq?id?no:10本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種豬流行性腹瀉病毒毒株，其特征在于，所述豬流行性腹瀉病毒毒株為豬流行性腹瀉病毒PEDV-JSXH-2021毒株，其保藏號為CGMCCNo.46088，于2024年8月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。
2.一種針對豬流行性腹瀉病毒的納米抗體，其特征在于，所述納米抗體通過對所述豬流行性腹瀉病毒PEDV-JSXH-2021毒株采用酵母雙雜交篩選獲得。
3.根據權利要求2所述的納米抗體，其特征在于，所述納米抗體為氨基酸序列如SEQ?IDNo:1所示的第一納米抗體；或者，
4.根據權利要求2或3所述的納米抗體，其特征在于，所述納米抗體的制備方法具體包括：
5.根據權利要求4所述的納米抗體，其特征在于，步驟S100中，擴增過程為分段式PCR擴增，通過對分段擴增后的多段擴增產物分別測序后拼接，得到所述豬流行性腹瀉病毒PEDV-JSXH-2021毒株的S基因序列。
6.根據權利要求5所述的納米抗體，其特征在于，分段式PCR擴增過程采用兩對引物對進行擴增，且第一擴增引物對如SEQ?ID?No:9和SEQ?ID
7.根據權利要求4所述的納米抗體，其特征在于，步驟S300中，PCR擴增過程采用如SEQID?No:13和SEQ?ID?No:14所示的引物對進行擴增；和/或；
8.一種用于豬流行性腹瀉病毒的抗體雞尾酒，其特征在于，所述抗體雞尾酒包括如權利要求3所述的第一納米抗體、第二納米抗體、第三納米抗體、第四納米抗體、第五納米抗體、第六納米抗體、第七納米抗體和第八納米抗體中的至少兩種。
9.根據權利要求8所述的抗體雞尾酒，其特征在于，所述抗體雞尾酒包括第一納米抗體、第三納米抗體、第四納米抗體、第五納米抗體、第六納米抗體、第七納米抗體和第八納米抗體中的至少兩種。
10.根據權利要求9所述的抗體雞尾酒，其特征在于，所述抗體雞尾酒包括第一納米抗體、第三納米抗體、第四納米抗體、第五納米抗體、第六納米抗體、第七納米抗體和第八納米抗體；且，
...【技術特征摘要】
1.一種豬流行性腹瀉病毒毒株，其特征在于，所述豬流行性腹瀉病毒毒株為豬流行性腹瀉病毒pedv-jsxh-2021毒株，其保藏號為cgmccno.46088，于2024年8月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。
2.一種針對豬流行性腹瀉病毒的納米抗體，其特征在于，所述納米抗體通過對所述豬流行性腹瀉病毒pedv-jsxh-2021毒株采用酵母雙雜交篩選獲得。
3.根據權利要求2所述的納米抗體，其特征在于，所述納米抗體為氨基酸序列如seq?idno:1所示的第一納米抗體；或者，
4.根據權利要求2或3所述的納米抗體，其特征在于，所述納米抗體的制備方法具體包括：
5.根據權利要求4所述的納米抗體，其特征在于，步驟s100中，擴增過程為分段式pcr擴增，通過對分段擴增后的多段擴增產物分別測序后拼接，得到所述豬流行性腹瀉病毒pedv-jsxh-2021毒株的s基因序列。
6.根據權利要求5所述的納米抗體，其特征在于，分段式pcr擴增過程采用兩對引物...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張力，曹世諾，苗偉，朱善元，周末，吳植，傅長瑤，林淼，
申請(專利權)人：江蘇農牧科技職業學院，
類型：發明
國別省市：
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